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第一节动物细胞工程【课标要求】1、掌握动物细胞培养的过程和条件，并了解它们的前景及存在的问题。2、知道动物细胞融合的概念、方法及单克隆抗体的制备与应用，并正确理解动物细胞融合的原理。【学习指导】重点：1、动物细胞培养的过程及条件2、动物细胞融合的概念及方法3、单克隆看题的制备与应用【知识梳理】一、动物细胞培养1）细胞培养是细胞工程中最基础的技术，它是把机体的中取出剪碎，利用______将剪碎的组织分散成,使其在人工培养条件下的过程。2）动物细胞培养所需的条件有a．无菌、无毒的环境：培养液应进行_____________处理。b．营养：合成培养基成分有糖、_____________、促生长因子、无机盐、微量元素，通常需加入_____________、血浆等。c．温度：适宜温度为_________±0.5℃；pH为_________～7．4。d．气体环境：_____________95％，CO25％。3）动物细胞培养的过程可分为___________。其中原代培养是指，传代培养是指。4）贴壁生长出现在___过程中，接触抑制出现在_____过程中。5）细胞株：细胞系：6）冻存及复苏a、保存细胞的措施主要是b、长期保存的方法是c、需要细胞时可以二、细胞培养的意义：1、2、3、三.动物细胞融合（又叫：细胞杂交）1）概念：指或动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。2）结果：融合形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为细胞。3）动物细胞融合原理：细胞膜的。4）诱导动物细胞融合的方法：物理方法、化学方法、生物方法。5）意义：细胞融合突破了有性杂交方法的局限，使成为可能。四、单克隆抗体1）概念：由单一B淋巴细胞进行无性生殖形成的细胞所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。2）抗体：淋巴细胞（浆细胞）产生的，化学本质为，具有特异性。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。3）哺乳动物感染病原体（如病毒、细菌等）后，体内会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌，凝集或杀死这些病原体。但是每一个B淋巴细胞只分泌。因此，要想获得大量的，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。4）单克隆抗体的制备（1）过程：第一步：将注射到小鼠体内进行免疫；第二步：从该小鼠脾脏中获得能够产生抗体的细胞，与小鼠的细胞在，或聚乙二醇的诱导下融合；第三步：在特定的培养基中，筛选出细胞；第四步：培养杂交瘤细胞，从中挑选出的细胞群，继续培养；第五步：将该杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠内增殖，然后再分离纯化单克隆抗体；（2）杂交瘤细胞的特点：既能大量，又能产生。5）提取单克隆抗体：从培养液或小鼠腹水中提取。特别提醒：在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有才能生长。B淋巴细胞的特点：，缺点：骨髓瘤细胞的特点：。杂交瘤细胞具备具备双亲的遗传物质，不仅能产生，还能，能大量产生单克隆抗体。6）单克隆抗体的应用（1）单克隆抗体的优点：强、高，并可能。（2）诊断疾病：诊断病毒引起的疾病和用癌细胞制备的单克隆抗体定位诊断．（3）用于治疗疾病和运载药物：①运用药物与单克隆抗体连接在一起制成＂生物导弹＂．②优点：疗效高，毒副作用小。【习题巩固】1、动物细胞工程技术的基础是（）A、动物细胞融合B、胚胎移植C、动物细胞培养D、核移植2、下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是（）A、动物细胞培育的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中D、培养至50代后的传代细胞称为细胞株3、在进行动物细胞培养时，通常选用的培养材料是（）A、衰老退化的动物组织细胞B、成熟动物个体的体细胞C、动物的受精卵细胞D、动物胚胎或幼龄动物个体的细胞4、下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的是（）A、用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B、将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C、在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D、动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰老死亡5、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A、经过免疫的B淋巴细胞B、不经过免疫的T淋巴细胞C、经过免疫的T淋巴细胞D、不经过免疫的B淋巴细胞6、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是（）①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞[来源:学_科_网Z_X_X_K]A、①②③④B、①③⑤C、②④D、①③7、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是_______________________________________。（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有________________________________________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第代，到这时的培养称为___________________________。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。（5）在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是______________________________________________。8、图是某种淋巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回答：（1）这是细胞，它是由_______________________分化而来的。（2）抗体从开始合成到分泌出细胞，经过的细胞结构顺序是（填标号）_____。抗体的分泌说明细胞的各种生物膜在结构上具有________，并以〔〕的形式转变。（3）在分泌抗体时要消耗由〔〕提供的能量。（4）抗体的化学本质是，它能与发生特异性结合，发挥免疫效应，该过程属于免疫。（5）若该抗体是单克隆抗体，则该细胞名称为________。在制备单克隆抗体的过程中，要应用的动物细胞工程的技术手段是。9．人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答下列问题。(1)制备单克隆抗体过程中要用到和技术。(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于，使小鼠产生能分泌相应的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的免疫。(3)在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基喋呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。①利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是。(4)此过程生产的单克隆抗体可以与特异性结合，从而诊断早孕。【学后反思】