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本科毕业论文（设计）题目:花蓼茎段愈伤组织的诱导以及再生体系的建立院系：生物与环境工程学院专业：生物工程姓名：学号：指导教师：教师职称：博士填写日期：2016年4月5日贵阳学院毕业论文（设计）-1-贵阳学院本科毕业论文（设计）诚信承诺书为了为确保毕业论文写作质量和答辩工作的顺利开展，达到按期圆满毕业的目标。本人郑重承诺：1、本人所呈交的毕业论文，是在指导老师的指导下完成的，严格按照学校有关规定完成的。2、本人在毕业论文引用他人的观点和参考资料均加以注释哈说明。3、本人承诺在毕业论文选题和研究内容过程中没有抄袭他人的研究成果和伪造相关数据等行为。4、在毕业论文中对侵犯知识产权的行为，本人愿承担相应的责任。论文（设计）作者签名：日期：2016年4月5日贵阳学院毕业论文（设计）-2-目录头花蓼茎段愈伤组织的诱导以及再生体系的建立-4-摘要-4-ABSTRACT-4-Keywords-5-第一部分文献综述-5-1.1头花蓼研究概况-6-1.1.1头花蓼作为景观植物的研究-7-1.1.2头花蓼的成分分析-7-1.1.3组织培养-7-1.1.3.1种子的萌发和育苗技术-7-1.1.3.2组织培养-8-1.1.3.3再生体系的建立及四倍体诱导-8-1.2影响头花蓼组织培养的因素-9-1.2.1外植体-9-1.2.2基本培养基-9-1.2.3激素-9-1.2.4附加物质-10-1.2.5培养条件因素的影响-10-1.2.6实验过程注意事项-10-贵阳学院毕业论文（设计）-3-1.3头花蓼组织培养的意义-11-第二部分正文-11-2.1材料和方法-11-2.1.1实验材料的获取-11-2.1.2实验方法-11-2.2培养条件-11-2.3培养过程-12-2.3.1胚芽获得-12-2.3.2无菌苗的获得-12-2.3.3再生植株的获得-12-2.4结果与分析-12-2.5结论与讨论-13-参考文献：-13-致谢-15-贵阳学院毕业论文（设计）-4-头花蓼茎段愈伤组织的诱导以及再生体系的建立摘要头花蓼是贵州少数民族地区常用的草药，具有极大的药用价值和经济价值。本实验以头花蓼无菌茎段为原材料，通过头花蓼种子在无菌环境中萌发出胚芽；胚芽生长成完整植株（无菌苗）；无菌苗茎段获得再生植株得的过程。目的是减少培养过程，缩短培养时间，提高组培效率。实验结果：（1）胚芽的获得：以头花蓼种子为原料，以MS+2mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+30mg(蔗糖)+9mg(琼脂)为培养基，诱导胚芽萌发；（2）无菌苗的获得：以（1）中的胚芽为材料，接种到MS培养基中，在光照下培养获得无菌苗；（3）再生植株的获得：以（2）中的无菌苗为材料，剪切下茎段，接种到MS+2mg/LZT+0.4mg/LNAA+30mg(蔗糖)+9mg(琼脂)培养基上，培养获得再生植株。关键词:头花蓼;胚芽;无菌苗;再生植株。ABSTRACTPolygonumCapitatumiscommonlyusedherbsinGuizhouMinorityAreas,hasgreatmedicinalvalueandeconomicvalue.Inthisexperiment,thefirstflowerstemsectionPolygonumsterilerawmaterials,throughtheheadPolygonumseedssproutgerminasterileenvironment;germgrowintowholeplants(novaccine);asepticstemsegmentsobtainregeneratedplantswas贵阳学院毕业论文（设计）-5-process.Thepurposeistoreducethetrainingprocessandshortentheincubationtime,improvetheefficiencyoftissueculture.Results:(1)germsobtained:thefirstflowersPolygonumseedsasrawmaterial,MS+2mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+30mg(sucrose)+9mg(agar)forthemediumtoinduceembryogermination;(2)asepticobtained:in(1)thegermofmaterialinoculatedintoMSmedium,andculturedinthelightnovaccine;(3)RegenerationPlants:A(2)novaccineforthematerial,shearedstem,inoculatedintoMS+2mg/LZT+0.4mg/LNAA+30mg(sucrose)+9mg(agar)onthemedium,culturedplantregeneration.Keywords:Polygonumcapitatum;germ;novaccine;regeneratedplants.第一部分文献综述头花蓼（Polygonumcapitatum）是蓼科（Polygonaceae）蓼属（Polygonum）多年生草本植物，又名四季红、石莽草、骨虫草等。头花蓼生长在海拔600-3500米的地区，在我国主要分布在江西、湖南、湖北、四川、贵州、广东、广西、云南及西藏等地；在国外主要分布在尼泊尔、不丹、印度、锡金、缅甸和越南等地。头花蓼喜欢生长在阴暗湿润的环境中，常生在草甸石上，常绿阔叶林中，常绿林中，稻田边，干旱山坡，干旱田中，耕地，沟渠边，河边，荒地，树林中，路边，墙边，沙滩，山谷，石缝中。头花蓼根系发达，茎匍匐丛生，叶片略带红色，有大量腺毛；叶面上还有有黑褐色新月形斑点；花期长（1-12月），花球红色或粉红色，成片生长时具有良好的景观效果，因此可作为一种园林观赏植物。头花蓼全草均可入药，具有清热、凉血、利尿、止痢的功能；主要治疗膀胱炎、肾孟肾炎、痢疾等季疾病。头花蓼是贵州苗族地区常用的草药，也是贵州着重发展的“六大苗药”之一。贵州威门药业股份有限公司以头花蓼为原贵阳学院毕业论文（设计）-6-料生产“热淋清”颗粒，该颗粒对泌尿系统疾病有独特疗效、服用方便且无毒无副作用等特点，深受东南亚地区人民的欢迎和认同。该公司每年需要上百吨头花蓼用于生产“热淋清”颗粒，然而贵州省头花蓼野生资源有限（蕴藏量大约有300000kg），由于常年采摘，自然储量已越来越少。此外，头花蓼也有较高的经济价值（据贵州省施秉县药材价格数据显示，贵州头花蓼鲜活6元/公斤，按每亩400kg产量计算，可比种植玉米增收500-800元）。基于上述两点原因，贵州已开始大面积人工种植头花蓼（例如：施秉县头花蓼GAP种植基地和织金县头花蓼基地）。随着药材市场需求量的不断增加和头花蓼人工种植面积的不断扩大，掀起了科学实验者们对头花蓼研究的热潮，头花蓼的研究正在进入一个全新的时代。研究的内容有：研究头花蓼种子种植技术，头花蓼化学成分分析，药用成分研究，茎尖快速繁育，还有头花蓼茎段组织培养技术，但是关于头花蓼无菌苗茎段研究的很少。因此，本实验在无菌环境下，通过头花蓼种子消毒灭菌后在光照培养箱中萌发出胚芽；胚芽生长成完整植株（无菌苗）；无菌苗茎段培养获得再生植株的过程，建立了头花蓼茎段的再生体系。1.1头花蓼研究概况从德国植物学家G．Haberlandt19世纪初提出植物细胞组织培养的设想到现在，通过长期的科学研究，植物细胞的全能性和器管分化、体细胞胚胎发育的激素调节得到了证实；植物组织培养技术也有了迅速发展。组织培养技术的广泛运用使得植物繁育体系发生了很大的改变。组织培养技术已经成为了人们获得理想植株最常用的方法之一。组织培养技术可以得到和母本性状保持一致的子代，这在果树培育、濒危植物的延续方面已经得到运用；新品种的开发，也离不开组织培养，例如无籽西瓜。头花蓼是1959年在铜矿区发现的生长旺盛的优势草本植物[1]；1999年，《贵阳中药现代化科技产业实施方案》颁布以后[2]，为头花蓼的深入研究提供了条件。以头花蓼为原料生产的热淋清药物开始用于尿道炎治疗，疗效显著[3]；其后，头花蓼的研究主要在头花蓼的药用成分分析以及热淋清药物治疗泌尿系统疾病方面[4-6]；直到2005年，才有了关于头花蓼种子繁育的报道[7]；在之后的10年中，头花蓼的研究的不断的发展深入到各个方向：贵阳学院毕业论文（设计）-7-1.1.1头花蓼作为景观植物的研究头花蓼叶面上还有有黑褐色新月形斑点，花期长，花球红色或粉红色，成片生长时具有良好的景观效果，因此可作为一种园林观赏植物[8]。2014年，刘艳丽，付飞跃和王海洋三人以头花蓼为研究对象，通过屋顶种植槽,设置实生苗幼苗期3种不同水分及成苗期6种不同水肥处理,对比分析其适应性,探讨景观价值.结果表明:幼苗期,头花蓼在900mL的浇水量下,生长最佳,经历30d,叶片大小稳定;成苗期,头花蓼在浇水1600mL施氮肥处理下,生长最佳;头花蓼植株80d成坪,种群平均盖度为91%,花期持续时间为240d,可作为屋顶绿化地被材料[9];韦美玉和赵洪对野生头花蓼形成的景观效果进行研究，发现它的茎、叶、芽、花等具有较高的观赏价值,可作为花卉开发利用[10]。1.1.2头花蓼的成分分析2000年，李勇军，王永林，胡昌奇等人对头花蓼的黄酮类物质进行研究，首次在头花蓼中分离出了槲皮素、槲皮苷、陆地棉苷和槲皮素-3-O-(2″没食子酰基)-鼠李糖苷[11]；许乾丽对头花蓼和头花蓼制剂进行研究，发现了主要有效活性成分是没食子酸[12]；2003年，张丽艳、杨玉琴和高言明等人对不同产地、不同季节头花蓼的黄酮含量进行测定，结果显示不同采收期的的头花蓼中总黄酮含量差异明显，在8月和9月含量最高[13]；2005年，赵德刚、刘世会和高玉琼等人对头花蓼挥发性成分研究，分离出88个成分,确定了51个化合物,占挥发油总量的73.10%[14]；赵叶，张开霞，刘军等人对头花蓼水提取物化学成分进行研究，结果分离鉴定了15个化合物,分别为龙胆酸、原儿茶酸、没食子酸甲酯、木犀草素、儿茶素、水飞蓟宾、大豆苷、杨梅苷、芦丁、槲皮素、槲皮苷、五味子苷、山柰酚、尿嘧啶、苯丙氨酸。其中龙胆酸、没食子酸甲酯、木犀草素、大豆苷、尿嘧啶、苯丙氨酸为首次从头花蓼中分离得到[15]。1.1.3组织培养1.1.3.1种子的萌发和育苗技术2003年，贵州省启动中药现代化产业种植基地、2004年贵州全力打造中国药谷的期贵阳学院毕业论文（设计）-8-刊发布以及贵州威门药业生产的热淋清药物在治疗泌尿系统疾病取得的良好效果[16-18]，推动了贵州省头花蓼的现代化、产业化发展，同时也加快了科研人员对头花蓼快速繁殖研究的步伐。2006年，王新村和孙长生等人通过对影响头花蓼种子育苗的因素（育苗基质、覆土厚度、播种方法、播种后保温保湿措施等）进行系列试验研究,提出了头花蓼种子育苗的可行方法,并研究制订了种苗质量标准[19]；吕小梨、赵致、王华磊对头花蓼种子发芽条件(温度、盐胁迫和培养方式)的研究，得出在种子15摄氏度时发芽率最高，在同一温度条件下光培养比暗培养发芽率高,纸间比纸上发芽率高的结论[20]；孙长生，韩见宇，魏升华等人也对头花蓼种子育苗技术做了进一步研究[21]。1.1.3.2组织培养继头花蓼种子育苗技术研究之后，为了满足头花蓼产业化种植的需要，科研人员的研究也进一步深入到头花蓼的组织培养和快速繁育方面。2006年，龙祥友和孙长生以头花蓼茎尖为实验材料，以MS为基本培养基，以6-BA和NAA作为生长调节剂，通过丛芽诱导培养、增殖诱导培养、生根诱导培养获得苗根[22]；毛堂芬和朱英以当年新生的植株的中部茎段为外植体，在超净台上，先用75%的酒精消毒10-20秒，再用0.1%的升汞消毒4-5分钟，无菌水冲洗4-5次后，然后切小段极性接种在不同浓度培养基（MS、1/2MS、6-BA和B5）上，通过继代培养和生根培养获得幼苗[23]；马鲜，赵德刚，杨琴和苏莲等人报道了不