物材处置废弃的新式菌落的分离作用研讨

中国过滤与分离公共技术服务平台物材处置废弃的新式菌落的分离作用研讨脱氮除硫（S2-）菌株的富集培养和分离筛选将从广西大学教学实验基地旱地采集的1g土样制成10mL的土壤悬液，吸取此悬液1mL接入盛有100mL富集培养基的血清瓶中，密闭胶塞，30℃下静止培养。培养4～7d，选取变浑浊并有气泡产生，在显微镜下观察有活跃活动菌的培养液1mL转接入新鲜的富集培养液中。如此重复，进行多级富集。将产气多、浑浊度大的富集培养物进行平板划线分离，然后将分离得到的多个菌株接种于穿刺培养基下部，做初筛试验/a[/img][/align]。从中选取产生气泡较多的菌株做脱氮除硫试验，据结果选取脱氮除硫（S2-）率高的菌株作为筛选菌株。分离初筛株脱氮除硫（S2-）试验取二环初筛菌株菌苔接种至15mL脱氮除硫（S2-）试验培养基中，以未接种的培养基为空白对照，各做2个重复平行试验，密塞30℃下培养2d.离心取上清液测定培养前后培养液中的NO3--N及S2-的含量，将平行试验结果取平均，以空白对照的结果作校正后，计算各菌株NO3--N及S2-的脱除率。NO3--N及S2-的含量分别用酚二磺酸光度法、二硝基苯二胺光度法[5]测定。筛选株形态观察采用常规方法，在平板培养基上培养后观察选定的筛选株的菌落形态。在光学显微镜下观察该菌株细胞形态、测量细胞大小、检验革兰氏染色结果，并在电子显微镜下拍照观察。筛选株生理实验将选定的筛选株在半固体穿刺培养基中进行穿刺培养，根据培养生长特征确定其与分子氧的关系。制备筛选株菌悬中国过滤与分离公共技术服务平台液，以此悬液接种，分别作在富集培养基中加入不同浓度的酵母膏和NaCl，以及在不同温度条件、不同起始pH条件下的试验。试验均采用10的接种量，静止培养。除培养温度试验外，其余均在30℃下培养。以721分光光度计测定起始及培养24h的OD420，以培养液OD420的增加表示菌体生长量。筛选株16SrDNA序列测定取筛选株的新鲜培养物离心所得的湿细胞，用无菌水和TE洗涤后，用SDS碱溶法提取总DNA[6].将总DNA样品送大连宝生物工程公司，委托其以通用引物63F，1387R进行PCR扩增16SrDNA，并对PCR产物回收进行测序。结果与分析菌株的分离筛选从旱田土的富集培养物中分离出45个菌株，经初筛选取5株（编号为T10、T11、T12、T15、T39）产气较多的菌株，分别做脱氮除硫（S2-）试验，培养2d后做化学测定，并计算它们的脱氮除硫（S2-）率。结果表明，5株初筛株均具有脱氮除硫（S2-）作用，其中，T39的脱氮除硫（S2-）率较高，所以，取其作为本研究的筛选菌株。至于空白对照也表现出NO3-N及S2-含量的降低，可能是由于硝酸盐和硫化物在溶液中稳定性较差，或与培养液中其他的物质发生了化学作用所致。结论与讨论研究结果表明，利用选择性无机培养基易从土壤中富集培养分离到脱氮除硫（S2-）的菌株。本研究所分离筛选的菌株T39，其革兰氏染色阴性，菌细胞杆状，单极生鞭毛，兼性厌氧，中温性、非耐盐，在培养基中添加少量酵母浸出膏可促进其生长，最适生长温度为25～30℃，最适起始pH为6.5～7.5.中国过滤与分离公共技术服务平台