环境标本中活的麻风分枝杆菌存在于麻风病人住房周围

环境标本中活的麻风分枝杆菌存在于麻风病人住房周围摘要目的：麻风病由麻风分枝杆菌引起的一种慢性全身性传染病，引起人类疾病中建立的首要生物体中的其中之一。由于麻风病在地方病区域的高流行性，有必要确认环境中麻风分枝杆菌的来源和它的传播方式。材料和方法：从50例麻风病例的病灶用70%乙醇切开皮肤涂片，50例麻风病例来源于麻风安置村和高地方病区域的医院，160份土壤样本来自于不同地区的麻风病医院和治愈的麻风病人的安置村。活动期同样居住在样本收集地。麻风分枝杆菌特定基因区域（RLEP129bp）和16srRNA靶基因被用于聚合酶链反应（PCR），它基本检测麻风分枝杆菌的存在和活性，放大来确定一个rPOT部位数字6bp串联重复序列的存在。结果：所有的sss收集患者样品表明rPOT部位的三副（6bp串联重复序列，一个古印度类型）。52例土壤样品表明麻风分枝杆菌DNA的存在，然而麻风分枝杆菌特定16srRNA基因在这些样品的16是被放大的，PCR扩增片段长度分析表明91bp,i.c.，来自于土壤样品中的Rpot6bp串联重复序列三副和从病人标本观察的三副是相似的。结论：土壤中存在活的麻风分枝杆菌和从病人标记的麻风分枝杆菌有着相同的rPOT基因分型，表明了它可能是相同的麻风分枝杆菌，在土壤中发现的麻风分枝杆菌可能是病人排出的一种，它在环境中的生存性和致病性对于传播是有意义的，需要更进一步的研究，这次研究的发现对于进一步探索理解麻风分枝杆菌的传播模式，可能提供了更具可能性的洞察力。对于额外的人类资源或者麻风分枝杆菌储藏所得存在也可能潜在的识别。关键词：环境，rPOT基因分型，传播，活的麻风分枝杆菌前言：1874年Armauer认为麻风病是由麻风分枝杆菌引起的一种传染病。印度拥有全球60%的麻风病人，在1985年有效的多种药物联合治疗的全面启动下，全球疾病的患病率锐减，而印度的患病率保持不变。在2012年期间官方报道中承认的的105个国家和地区，全球已知的麻风病的患病率在2012年初达到181941例，但是在2011年检测的新的例数是2101075，像安哥拉，巴西，孟加拉图，中国，刚果共和国，印度，马达加斯加，莫桑比克和尼泊尔有地方特性的保持不变。印度，2011-12年已经达到麻风病人总数的0.83。患病率0.68/10000表明33个州/联邦领土达到消灭麻风病的水平。649个地区中的528个地区在2014年3月同样达到消除，剩下一些地方特性的地区比哈尔，奥里赛邦，哈蒂斯加尔布，北方邦，西孟加拉邦，恰尔肯德邦的消除指数没有达到。全球使用多种药物联合治疗（MDP）似乎最小效果，即便有的话，影响疾病的传播，对于这种情况的合理性的解释是缺少的。一些合理性的愿意可能是在所以的病人中联合化疗不能杀死所有的麻风分支杆菌。活动期病例的休止表明大多数国家认为未经治疗和未经处理的病例在社区中能够继续传播疾病。一个LL病人在症状变得非常严重引起寻求医疗之前能够传播感染给更多的人。在评估疾病的传播中，疾病的长期潜伏是另一个问题。虽然麻风分支杆菌耐药性的出现已经报道了，但是但是它的传播并没有很好的证实，麻风病真正的传播机制还不知道，认为出现传播是飞沫传播，它携带了从鼻子到嘴巴排放的杆菌，一个感染者直接接触易感人群。有限乘法和增长的麻风分支杆菌老鼠鞋垫已经证实它是一个有用的工具来评估生物的活性和检测临床分离株的药敏实验。然而，新近发展的前进的分子生物技术表明环境中麻风分支杆菌的存在，并且进一步表明，它们的角色是继续传播疾病。传播疾病重要的原因是离开人体的麻风分支杆菌是活的。从北印度流行区获得的土壤样品证明活的麻风分支杆菌的存在证实一个地区的高患病率。已经报道了麻风分支杆菌存在于印度尼西亚水中样品，一致的观察认为发展中国家提高卫生，环境，地下水排水系统，机械化耕作实践，治疗，管道供水等等。能促进麻风病的消失。因此，病人排除微生物在环境中，如果残留活的可能引起疾病的传播，当前研究关注在环境样品中的麻风杆菌的检测和麻风分支杆菌特定rPOT目标基因的基因分型识别相似之处。从病人和环境中获得的麻风分支杆菌这种基因的许多复制品，这次研究可能是麻风分支杆菌从病人到环境传播的联系的一个前景，反之亦然。材料与分析伦理批准所有的病人都能获得知情同意，这次研究获得了印度的麻风病委员会的国际伦理会的批准。样品采集样品的采集来自于病人和普如里压县，西孟加拉邦的流行地区的不同环境。在1.5ml试管中用百分之70乙醇对麻风病人进行切开皮肤涂片（SSSs），用手泥刀把地面土壤挖到4英寸深，用干净的朔料容器收集土壤，贴上现场数字和乡村名字。收集到的样品被送到实验室（2天内）储存在4-8℃到进一步处理。160份土壤收集来自不同的地方，像医院，校园和麻风病人的安置村。洗澡的地方（房子的背面）,常见坐的地方，房子入口的附近，房子周围永远洗涤的和附近钻孔的特殊地区永远样品采集。从切开皮肤标本样品中提取DNA细菌指数50阳性病例中收集的切开皮肤涂片（SSS）置于70%乙醇中，并且用100000转/分（8000*g）离心10分钟，丢掉上浮物。风干微粒，用来清楚乙醇，乙醇消除后，样品在60℃下裂解缓冲液中溶解一晚（含有1mg/ml蛋白酶K的10mm三羟甲基氨基甲烷缓冲液PH8.5和0.05%-20），接下来失活的蛋白酶K在95℃里持续15分钟，这种溶解产物为进一步使用聚合酶链反应做准备。从土壤样品中提取DNA用早期标准协议描述处理土壤样本中提取DNA，简单的说，用乙醇，100mg的土壤和锆珠（0.1mm）中放入1.5ml微型离心机。珠磨器使用4800转/分，确保均质分布并且促进细胞裂解。在4℃下，用10000转/分，分离溶解产物10分钟，并且乙醇废弃了。在颗粒中，添加25ul裂解缓冲液并且用60℃水溶液培养一夜。接下来是失活的蛋白酶K，持续15分钟。30ul的10%十二烷基硫酸纳(SDS)添加到试管，在60℃水浴下培养1小时，其次在3000转/分离线10分钟，析出的DNA添加到70%乙醇中接着在零下20℃培养一晚，随后试管在10000转/分下离心15分钟。上层清液丢弃。颗粒风干约15-20分钟以确保完全清楚乙醇。颗粒再次悬浮在10mmTE缓冲液（PH8.0）的50ul里，在37℃水浴培养1小时来确保DNA已经溶解，DNA的溶解是通过预制剂去除树脂列（中心，美国SR04350）和储存在零下20℃到进一步使用。