现代分离技术实验报告

课程：现代分离技术实验报告班级：应化134班学号：2013015054姓名：聂晓迪实验名称：金银花中绿原酸的提取与分离关键字：金银花绿原酸薄层色谱索氏提取器柱层析摘要：通过索氏提取器从金银花中提取绿原酸，利用减压浓缩、柱层析、紫外检测技术，薄层色谱对绿原酸进行分析，检测。一、实验背景金银花是人医临床常用的有代表性的清热解毒药,具有抗菌、消炎、解热、保肝、止血、免疫调节、降血脂、兴奋中枢等多方面的药理学作用，能改善放、化疗所致的白细胞降低，有“中药中的青霉素”的美誉。另外，金银花还被广泛地应用于保健品、化妆品、卷烟、食品等行业。金银花抗菌的有效成分主要是绿原酸和异绿原酸，并且常以绿原酸含量的高低来评价金银花质量的优劣。采用超声波法和索氏法均能较好地从金银花中提取绿原酸。本实验中采用索氏提取法。二、实验目的(1)掌握渗滤、回流提取、索氏提取等天然生物活性成分的一般提取方法；（2)掌握制作薄板及薄板层析、色谱分离、重结晶等天然生物活性成分的一般分离与纯化方法；（3）熟悉天然生物活性成分的一般定性检测方法。（4）培养动手能力和分析及解决实际问题等综合能力。三、实验原理绿原酸是一种含羟基和邻二酚基的有机酸，极性与乙醇相近。因此根据“相似相溶”原理，含有乙醇的溶剂更容易有效的提取绿原酸。由于乙醇溶剂的扩散‘渗透作用逐渐通过金银花细胞壁渗入到细胞内，溶解了绿原酸，而造成细胞内外绿原酸的浓度差，于是细胞内的绿原酸溶液不断向外扩散，乙醇溶剂不断进入金银花中，如此不断往返，就可以把绿原酸近于完全溶出或大部分溶出。四、实验主要用品(1)材料:金银花（为金银花花蕾和开放花的混合样品，经烘房烘干后，备用。）(2)试剂:本实验所用有机、无机试剂均为分析纯。薄层层析硅胶：GF254和硅胶G，化学纯柱层析硅胶：硅胶G（粒度100-200目）(3)主要仪器：旋转蒸发仪、电热恒温鼓风干燥箱、三用紫外仪、电子分析天平、高效液相色谱仪。五、绿原酸物理性质名称分子式分子量性状熔点溶解度绿原酸C16H18O9345.30半水化合物为针状晶（110℃变为无水化合物）208℃水中4%，在热水中溶解度更大，易溶于乙醇、丙酮和甲醇等极性溶剂，难溶于氯仿、苯、乙醚等亲脂性有机溶剂结构式：六、实验装置图图一索氏提取器图二旋转蒸发仪薄层色谱七、实验步骤与现象1.索氏提取器对绿原酸的提取：(1)金银花粗粉称取50g，用滤纸做成筒状嵌入提取器中，用75%乙醇采用索氏提取器回流处理4h（9点-13点10分），发生虹吸36次。提取器内液体颜色逐渐由深墨绿色变为浅黄绿色，烧瓶内液体颜色越来越深，逐渐变为墨绿色。（2)取其提取液在旋转蒸发仪中进行减压浓缩，温度设置为45℃，浓缩得浸膏，呈褐绿色。2.TLC板的制备与活化：（1）在干净的研钵内加入约6g硅胶GF254，在轻轻研磨的同时缓慢加入15ml0.5%羧甲基纤维素钠水溶液。继续研磨约10min，当体系粘稠度适宜时，即可进行铺板。（2)用药匙将适量糊状物均匀摊在干净干燥的载玻片上，然后用手拿住薄板的一端在台面上轻轻振动，直至薄层均匀为止。将铺好的薄板平放在水平的台面上，凉干。(3)将凉干后的薄板放入预先恒温到105～110℃的烘箱中活化30min。3.绿原酸的分离（1）粗分离：取一定量浸膏，按1∶1加入200-300目硅胶拌样，晾干。（2）用乙酸乙酯湿法装柱（硅胶200-300目），干法上样，柱体用乙酸乙酯约300ml先进行洗脱，直到柱体褐色基本褪去；然后用乙酸乙酯-甲酸-水（20∶1∶0.1）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶0.1）、甲醇洗脱。流速控制在每1/10柱体积即可。分部收集，每管40ml，均装在小烧杯里，时时点板采样，看在紫外灯下是否有明显荧光斑点显现。(3)对有斑点的烧杯中液体进行TLC分析：用事先活化好的薄层板对每管收集液进行TLC分析，点样数视板的大小而定，每两斑点之间最小间距不少于8mm，自己实验过程中将右侧第一个点为绿原酸对照点。等展开剂（组成较易挥发，注意小心保存）爬行到板层4/5～5/6高度时，取出薄层板，平放在桌面上，让溶剂挥发干。然后将薄板置于波长365nm紫外灯下下，观察和记录薄板上斑点的分布情况及其对应的Rf值。（4）结论：根据Rf值或斑点高度判断不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有相同斑点，表明两管含有相同的成分。发现在第二次洗脱中得到的液体中含有绿原酸，连着2个烧杯中均含有绿原酸，随即将这2杯液体进行减压浓缩。在浓缩过程中，烧瓶底部便有针状结晶产生。结束蒸馏后，用甲醇将瓶底结晶洗下来，在烧杯中静置结晶。八、实验结果与讨论将所有显现荧光的烧杯中液体进行薄板层析，在紫外灯下得到如图所示的板图：左侧第一个点为得到的浸膏点样，依次分别为有荧光出现的液体点样，最后一个为标准绿原酸点样进行对照。最后我们发现，只有第二，三个点样的与标准绿原酸跑板距离相同，计算得Rf值相近。二，三点样Rf值计算等于0.236。实验讨论：（1）实验开始时，索氏提取器装金银花不能高于虹吸管最高点，否则回流液体不能完全侵泡金银花粉末，导致不能做到将所需成分完全提取出来。我组的金银花粉末要高于虹吸管一些，但是介于回流滴下的乙醇会浸泡粉末，绿原酸提取情况还算差强人意。下次使用索氏提取器必须要注意这个问题。（2）在制作薄板过程中，要注意硅胶与羟甲基纤维素钠水溶液的比例，不能太稠也不能太稀，以玻棒提起滴下时刚刚能连成线为宜，均匀铺于玻璃板上，边铺边抖动使其铺就均匀。（3）在对各收集管进行薄层分析之前，为了节约薄板，可用毛细管将各收集管中的液体依次在一块薄板上并对各点样按照相应的管号一次编号，等样点上的溶剂彻底挥发干后，置于波长365nm的紫外灯下观察，有明显斑点的表明其对应接受管中含有化合物，没有斑点的表明对应管中没有化合物。然后再对有斑点的各管按照下法进行薄层分析。九、实验收获每次实验以前，必须预习本实验内容，了解其操作程序和理论要点，切勿盲目进行实验，实验时须准备记录薄一本，随时正确记录每一实验应记的项目。如原料用量，实验时发生的现象，反应结果，产品数量、熔点、沸点、产品纯度等，以作写正式报告的依据。本次实验是一次典型的天然产物提取及分离技术的实验，综合课本上的知识并且给予我们亲手操作实践的机会，在实验过程中又学到了新的操作技术，例如旋转蒸发仪的使用，紫外灯的使用，如何更好地制作薄板等等，收货颇多。