稳态时兔体内甲磺酸帕珠沙星对多索茶碱药动学的影响

稳态时兔体内甲磺酸帕珠沙星对多索茶碱药动学的影响李峰阚全程郑州大学第一附属医院郑州市450052[摘要]目的：观察家兔体内稳态时甲磺酸帕珠沙星对多索茶碱药动学的影响。方法：实验分为两期：Ⅰ期单独灌服多索茶碱至稳态；Ⅱ期合用甲磺酸帕珠沙星和多索茶碱4天。采用HPLC法平行监测合用药前后多索茶碱的血药浓度，对两期药动学参数进行统计学分析。结果：两期的AUC、Cmax、CL/F均有显著性差异（P0.05），与Ⅰ期相比较，Ⅱ期峰时Tmax延后，吸收速率Ka变小，消除半衰期T1/2β延长，消除率相应减少。结论：甲磺酸帕珠沙星能延缓多索茶碱在兔体内的消除，提示两药长期合用时应对多索茶碱进行血药浓度监测。关键词多索茶碱；帕珠沙星；血药浓度；药动学中图分类号：R963文献标示码：文章编号：EffectofPazufloxacinmesilateonpharmacokineticsofDoxofyllineatsteadystateinrabbitsLiFeng,KanQuan-cheng(theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,HenanZhengzhou450052,China)ABSTRACT:OBJECTIVEToinvestigatetheeffectofPazufloxacinmesilateonpharmacokineticsofdoxofyllineatsteadystateinrabbits.METHODSTheexperimentwasdividedinto2stages:(I)thesubjectsonlyreceiveddoxofyllineuntilsteadystate;(II)Pazufloxacinmesilateanddoxofyllinewerecoadmistratedfor4days.TheblooddrugconcentrationwasmeasuredbyHPLC.RESAULTSComparedtostageI,AUC、Cmax、CL/FhadsignificantlychangedoratstageII(P0.05),andtherewasnosignificantvariationinmodificationofotherpharmacokineticsparameters.CONCLUSIONPazufloxacinmesilatecandecreasetheeliminationofdoxofyllineinrabbits.DoxdrugmonitoringisneededwhenthedrugistakenwithPZFXforalongperiod.Keywords:doxofylline,Pazufloxacin,high-performanceliquidchromatography(HPLC),pharmacokinetics多索茶碱（Doxofylline，Dox），是一种新型的甲基黄嘌呤类支气管扩张剂，可通过抑制平滑肌细胞内的磷酸二酯酶松弛平滑肌，达到平喘、抗炎和镇咳的作用[1]，与茶碱相比具有疗效较强，耐受性好，不良反应少等特点。甲磺酸帕珠沙星（Pazufloxacinmesilate,PZFX）是日本富山化学株市会社研发的第三代氟喹诺酮类广谱抗菌药[2]，于2002年9月首次在日本上市，临床上常与Dox合用治疗哮喘型支气管炎或慢性阻塞性肺炎等疾病。两种药物相互作用未见报道，本实验以家兔为试验对象，考察PZFX对Dox药动学的影响，为临床合理用药提供理论依据。1材料1.1动物健康日本大耳白兔8只，雌雄兼用，体重（2.8±0.3）kg，由河南省实验动物中心提供。1.2药品与试剂多索茶碱片（200mg/片，批号060726，黑龙江福和华星制药集团股份有限公司）；甲磺酸帕珠沙星注射剂（0.3g/10mL，批号05090101，四川奥邦药业有限公司）；多索茶碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号100625-200301）；内标物咖啡因（中国药品生物制品检定所，批号171215-200507）；乙腈、甲醇为色谱纯，二氯甲烷、异丙醇为分析纯，水为重蒸馏水。1.3仪器高效液相色谱仪：WatersTM600泵-2487紫外检测器；YKH-液体快速混合器（江西医疗器械厂）；TGL-16型高速离心机（上海安亭科学仪器厂）。2方法和结果2.1色谱条件色谱柱：Nova-PakRC18柱（3.9mm×150mm,4µm）；流动相：含1‰三乙胺的乙腈-0.05M磷酸盐缓冲液（15：85，PH6.5~6.7）；流速：0.8mL•min-1；柱温：30℃；检测波长：273nm。该色谱条件下,Dox与内标的色谱峰完全分离，空白血清在Dox和内标咖啡因的保留时间6.7和4.3min处无杂质峰出现，本方法有较强的专属性。2.2血样处理兔血清200µL置于加有10µL内标咖啡因标准液的5mL具塞离心管中，精密加入萃取液（二氯甲烷：异丙醇=95：5）2mL，旋涡混合1min，4000r/min离心10min，吸取下清液1.5mL于另一试管中，在50oC水浴中空气流吹干，残渣加入0.1mL甲醇，振荡30s后，取20µL进样，进行HPLC色谱分析。测得样品与内标物的峰高比值，代入标准曲线方程计算血样中Dox的浓度。2.3标准曲线的制备精密量取Dox标准液适量，置于加有10µL内标咖啡因标准液的离心管中，加入空白兔血清200µL，配成Dox浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0mg.L-1的含药血清，照2.2项下操作，每种浓度做5份样品，记录色谱图，以样品的峰高与内标的峰高的比值（Y）对浓度（C）进行线性回归，得标准曲线方程Y=7.8664C+0.0392(r=0.9994),血清中Dox浓度在0.25~20.0mg.L-1范围内呈良好的线性关系，最低检测浓度为0.05mg.L-1。2.4回收率和精密度试验分别精密吸取0.5、5.0、20.0mg.L-13个浓度的标准液，按“标准曲线的制备”项下操作，测定Dox的浓度，以实测浓度与加入浓度之比乘以100%，计算回收率。以同样的方法连续测定5日，计算日内差和日间差。结果见表1。表1血清多索茶碱的回收率和精密度（n=5）Tab1Resultsofrecoveryandprecisionrateofdoxofyllineinserum（n=5）理论浓度/mg.L-1实测浓度/mg.L-1回收率/%日内差RSD/%日间差RSD/%0.50.51104.88.877.745.04.9399.863.454.8920.020.09100.52.402.782.5实验方法给药方案包括以下两期：Ⅰ期单用多索茶碱，每只ig给予Dox30mg/kg，q12h（早晚各一次），连用3天后当晚禁食12h，于第4天晨灌服Dox后0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、12h取耳缘静脉血1mL于EP管中，离心，分取血清，置于-20℃冷冻保存待测。Ⅱ期合用PZFX和多索茶碱，于第4天晚Dox用法不变情况下加用PZFX(30mg/kg，缓慢静脉推注，q12h)。连用4天，于第8天晨灌服Dox后0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、12h取耳缘静脉血1mL，以下操作同前。照2.2项下处理血样，测定合用药前后Dox的血药浓度。2.6数据处理血药浓度-时间数据用3P87程序经计算机处理，选择最佳房室模型，计算药动学参数。单用组和合并用药组的药动学参数使用SPSS10.0统计学软件进行配对t检验。2.7血药浓度和药动学参数8只家兔单用及合用PZFX后不同时间的Dox血药浓度的变化见表2，平均血药浓度-时间曲线如图1。数据经3P87程序拟合，符合一级吸收一房室开放模型，算得的药动学参数结果见表3。图1单用及合用甲磺酸帕珠沙星后多索茶碱的药时曲线Fig1Concentration-timecurvesofDoxofyllineassociatewithPazufloxacinmesilate01234567802468101214t/hC/mg.L-1单用合用表2单用及合用甲磺酸帕珠沙星后多索茶碱的血药浓度（n=8）Tab3ConcentrationofDoxofyllineassociatewithPazufloxacinmesilate（n=8）时间/h多索茶碱血药浓度/mg.L-1t检验单用合用01.52±1.021.88±0.90P0.050.255.45±6.215.32±5.05P0.050.55.94±3.587.14±6.03P0.0516.75±2.967.29±3.41P0.051.55.86±2.516.86±3.16P0.0524.62±2.175.86±2.93P0.0534.08±1.934.81±2.31P0.0543.68±1.734.27±2.13P0.0562.70±1.413.35±1.65P0.0591.82±0.852.40±1.21P0.05121.31±0.631.79±0.83P0.05表3单用及合用甲磺酸帕珠沙星后多索茶碱的药动学参数（n=8）Tab3PharmacokineticparametersofDoxofyllineassociatewithPazufloxacinmesilate（n=8）药动学参数单用合用t检验Tmax/h0.58±0.500.77±0.59P0.05Cmax/mg.L-16.00±3.046.87±3.81P0.05Cmin/mg.L-11.20±0.581.67±0.83P0.05AUCss120/mg.(L.h)-137.54±16.6945.14±22.16P0.05Ka/h-117.63±17.3011.32±10.81P0.05Ke/h-10.15±0.040.13±0.02P0.05T1/2a/h0.12±0.120.16±0.16P0.05T1/2β/h4.95±1.155.29±0.79P0.05V/F(C)/L.kg-16.45±4.795.56±4.02P0.05CL/F/L.(h.kg)-10.90±0.630.75±0.57P0.05从表2和图1中可见，合用PZFX后的Dox血药浓度比单用时消除明显减慢，除0.25h外其余各时间点的平均血药浓度均有升高趋势，且1.5h后各点浓度的升高均有显著性（P0.05）。表3中数据显示，合用组Dox的峰浓度Cmax由(6.00±3.04)升高到(6.87±3.81)mg.L-1，增加了14.5%(P0.05)；谷浓度Cmin由(1.20±0.58)升高到(1.67±0.83)mg.L-1，增加了39.2%(P0.05)；一个给药周期内的药-时曲线下面积AUC由(37.53±16.69)增加到(45.14±22.16)mg.(L.h)-1，增加了20.3%(P0.05)；清除率CL/F由(0.90±0.63)减少到(0.75±0.57)L.(h.kg)-1，降低了16.7%(P0.05)。其他药动学参数（Tmax、Ka、Ke、T1/2a、T1/2β、V/F）在两期间差异无统计学意义（P0.05）。３讨论慢性阻塞性患者一般需长期服用多索茶碱治疗，观察其它药物对多索茶碱的药物动力学影响，具有一定的临床意义。本实验采用多剂量给药，观察达稳态后一个给药周期内的药时曲线变化，与临床用药方式更为接近。由实验结果可知，在该给药剂量条件下，合用PZFX后，Dox稳态时的峰浓度、谷浓度、AUC均有不同程度增加，清除率下降，两期间差异有显著性（P0.05）。说明PZFX对Dox在体内稳态时的消除过程有抑制作用。多索茶碱在体内被肝药酶分解，部分代谢成β-羟基茶碱。与茶碱相比，Dox在7-N上连接了1，3-二氧戊烷基，水溶性明显增加，在胃肠道吸收迅速且完全，理论上其吸收速率常数变异小[3]，但本实验中两期的吸收