液相色谱法固定相的发展与研究现状

液相色谱法固定相的发展与研究现状作者：杨智超班级：B轻化122学号：1210802225摘要；柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。固定相的的选择对样品的分离起着重要作用，有时甚至是决定性的作用。在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。关键词；柱色谱固定相色谱工作者HPLC分析方法1.引言随着生物工程和生物科学的发展,手性拆分和测定引起了人们的普遍关注。尽管对映体间物理化学性质几乎完全相同,但它们的生化和药理作用却往往不同。这是因为生物本身内部的核酸、蛋白质及多糖都具有与其功能相适应的结构,它们常常对扬长避短一化合物的两种对映体表现出不同的响应。例如具有镇静作用的反应停(thalidomide,酞胺哌啶酮),其有效成分是R构型,而S构型则具有致畸作用。据统计,常用的200种药物中,大约有120种至少含有一个手性中心。而这些手性药物中有80%～90%以外消旋体形式在市场销售,存在巨大的潜在危险性。因此,对映体的拆分与识别对于生命科学和药物化学研究以及人类的健康具有十分重要的意义。目前用于手性分离的方法主要有毛细管电泳法、薄层色谱法、亚临界及超临界流体色谱法、气相色谱法和液相色谱法。近年来,高效液相色谱法取得了令人瞩目的进展,已成为对映体拆分强有力的手段之一。而其中所用的手性固定相的是能否进行手性分离的关键。2.1液相色谱固定相的现状高效液相色谱在药物分析中的应用,主要考虑试样的预处理和分析柱.检测器的选择.在试样的预处理上,日前兴起的固相(微)萃取使得许多含量低的成分得到精制提纯,从而适于高效液相色谱的测定,而孙新国采用逆流萃取测定川芎嗪含量取得了很好的效果.中药中有些紫外吸收弱,或无特征紫外吸收的成分,直接用高效液相色谱测定,其灵敏度和分离度都不尽人意,利用柱前或柱后衍生化法可使这些成分较精确地测定出来.对于极性大.脂溶性差物质,在YWGCl8柱上不易保留,用十二烷基磺酸钠作为离子对试剂,降低其极性,延长柱上的保留时间,取得较好的分离较果.将液相色谱和质谱这两个强有力的分析技术在线连接在一起,经过三十年的发展已成为一项较为成熟的分析手段,但是它从形成伊始就存在着问题如下:1.从液相色谱流进质谱时,流动相的变化.溶剂的组成.高温高压离子化的问题制约着这种联用技术发展,大气压离子化接口具有去除溶剂和离子化的双重功效,它的引入,使得该技术在各个领域得到了广泛的应用.电喷雾离子源是一种软电离技术,一般只生成(M+H)+和(M-H)-两种分子离子峰,选择性监测(mz)190的负分子离子峰,具有较高的灵敏度.准确度.专一性,满足了低浓度药物研究的需求.2.由张莉等人研究的三维高效液相色谱法可以同步测定葛根素和阿魏酸两种指标.通过实验证明:如果选择合适的柱温等色谱条件,乙醇作为反相高效液相色谱流动相,分析中药及中成药中有效成分,既安全又准确.结构相似的物质,普通的检测器难以检测出来,高效液相色谱-电化学法可以有效地测定黄连粉中仅差一个基团的黄芩苷和黄芩素的含量.样品经色谱柱分离后收集,再经荧光分光光度计测荧光强度,影响因素多,测定复杂,改进后的高效液相色谱-荧光法则可以不经衍生化和收集分离物,只经化学处理除杂,浓缩后直接进样即可.用该法测定贯叶连翘中金丝桃素的含量也取得了较好的结果.高效液相色谱-示差折光测黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量也都取得了较为满意的结果。对于只有紫外末端吸收,用紫外检测时灵敏度低,基线易漂移,示差折光检测其易受外界条件干扰,蒸发散射检测器能克服以上不足,响应值只与样品质量有关,其信号相应与质量成正比,不同化合物,质量相同则信号相应基本一致.蒸发光散射检测法是基于不挥发样品分子对光的散射程度与其质量成正比,与其所含基团性质无关.只要选择适当的检测器参数,便可使流动相和溶剂完全气化,不产生信号,而样品中的各个组分以不挥发粒子存在,对光有散射,以被检测出来.因此,蒸发光散射检测器可用于含不同基团的多组分同时分离.2.2液相色谱固定相的发展方向（1）缩短分析时间,提高分离效率.应用先进的检测仪器和方法,对流动相.固定相进行调节或改变,采用梯度洗脱.柱切换技术有望解决这个问题.梯度洗脱的高效液相色谱法,能分析较宽极性范围的样品,较等度洗脱具有很大的优势,但对于成分更复杂.极性范围更宽的中药样品则有些力不从心.多柱高效液相色谱法又称多维高效液相色谱法.除具有梯度洗脱一样的改变流动相浓度的优点外,还可以改变固定相种类.键合度.粒径.柱长.柱径等及流动相种类.浓度等.（2）进一步向自动化.智能化及联用技术上发展.液相色谱与质谱联用在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的首选方法,LC-MS-MS法测定血浆中HIV-1蛋白酶,准确高效,血浆中残留的内源性组份和其他药物不干扰测定,既节省材料又节约时间.已经应用于体液.血浆.血清中的药物分析.中药复方注射液“清开灵”中的胆酸类物的分析采用液相色谱质谱质谱联用,效果理想.高效液相色谱-核磁共振联用在药物分析方面的作用很不错.新近提出的智能多柱高效液相色谱系统利用切换技术的模块式分离性能,把样品分块的切换进不同性质的色谱柱,再用合适的流动相洗脱.全过程采用智能化控制。2.3液相色谱法的改进——反相色谱固定相的研究进进九十年代更是热火朝天。这方面的研究报道远远超过活动相的研究，人们不断探索保存过程及相关烷基键结构的复杂性和可能制得的各种新型固定相。Bolok和其合作者从统计技术研究反相色谱柱的老化过程。Montes等评价了一种硅氢化物介质的硅氢烯制备烷基键合相，更早时候基质制备可供参考。Moriyama等评价了用2mm硅胶制得的TSK胶SuperODS新型反相色谱柱的特性，他们论述了如何分离手性化合物。Schmid与合作者论述了含饱和脂肪酸键合相的合成与性质，并且与相应的饱和烃固定相的使用作过比较。Pesek和Matyska合成了两种不同的二醇键合相，包括一种是“可靠的”，另一种通过将7－辛烯－1，2－二醇直接连接到氢化硅基质上。Jino和Nakamura[4]评价了用氟处理的键合硅胶作为一种反相色谱基质与常规反相色谱基质的选择性不同。Buszewki等比较了烷基胺和烷基键合相基质用于反相分离，发现前者对分离极性化合物效果明显，但其热稳定性不如后者。Wongyai用苯丙醇胺键合到硅胶上产生离子交换--反相基质的混合模型，并且评价了酸性系列、中性和碱性物质的分离效果。Friebe将Calixarene键合到硅胶上研究其作为选择相能够形成类似于环糊精的内包合物。Chriswanto和伙伴们将聚吡咯相涂在硅胶上作为HPLC的特征化填料。Ge等合成了聚3－辛环吡咯改性硅胶，评价其作为蛋白质的分离及探讨酸、碱介质的稳定性。Skapo和Simpson则在活动床中制得反相基质，他们总结出在有机溶剂中通过这种途径与常规键合相比较可制得重现性更好的基质。Theinpont论述了在HPLC柱中已经填装好的硅胶的衍生化过程和通过这种途径制得的色谱柱和常规键合相色谱柱进行了比较。3.总结近年来,一些先进的检测仪器成功的用在了高效液相色谱分析法上,使得高效液相色谱的应用更广泛,并充分利用高效快速.选择性好.灵敏度高等优点,建立更加系统的成分分析方法.通过与质谱联用.梯度洗脱.柱切换技术.配合先进的检测技术,以及与分子生物学.现代分子药理学相结合,将在中药分析中发挥很大作用.参考文献；[1]韩熠,李正宇,孟霞.离子液体在色谱分析中的应用[J].化学试剂,2005,27(11):722-725.[2]WasserscheidP,BösmannA,BolmC.Synthesisandproperiesofionicliquidsderivedfromthechiralpool[J].Chem.Commun.,2002,(3):200-201.[3]傅若农,刘虎威.高分辨气相色谱及高分辨裂解气相色谱[M].北京:北京理工大学出版社,1992.83-84.[4]傅若农.气相色谱固定相的演变[J].化学试剂,2006,28(1):11-15.[5]傅若农.近年气相色谱固定相的进展[J].化学试剂,2011,33(7):577-582.[6]李德生，张金萍．天然沸石的活化与再生技术研究[J]．中国给水排水，2006，21(6)：47-49[7]肖举强，栾红．新型除氟材料镁型活化沸石[J]．兰州铁道学院学院：自然科学报，2003，22(6)：12-14[8]陈平．关于用稀土改型的沸石除水中氟的研究[J]．黑龙江商学院学报，2002，10(3)：2-3[9]秦钰慧．饮用水水质准则[M]．北京：人民卫生出版社，2002[10]王富民,薛应龙.植物生理通讯,1988.125:39[11]仲祟林,王兆华,金玉莲等.中草药,1990,21(7):15[12]仲崇林,金玉莲,王兆华等.中国中药杂志,1990;15(11):42[13]张任思,刘克里.分析化学,1983;11(8):582