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第1章《植物组织培养实验室的构建和操作技术》参考答案一、填空：1、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平、显微镜、蒸馏水发生器、酸度计等。2、培养基成分主要包括①无机营养成分（大量元素、微量元素和铁盐）、②有机营养成分（包括维生素、氨基酸等）、③植物生长调节物质、④碳水化合物、⑤其它物质。3、培养基最常用的碳源是蔗糖，使用浓度在1%-5%常用3%。4、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养基渗透压。5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L之间。6、驯化的目的：在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮，提高苗的移裁成活率。7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值高：有利于根的形成和愈伤组织的形成；低：有利于芽的形成。8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下，锅内温度达121℃，维持20-30min。9、选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。10、诱导胚状体比诱导芽的优点：(1)数量多、(2)速度快、(3)结构完整。11、试管苗的生态环境：高温且恒温、高湿、弱光、无菌。12、培养基中加入活性炭的目的：利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响。二、名词解释1、MS培养基（MSculturemedium）：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。特点是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。2、母液：是欲配制液的浓缩液。配成比所需浓度高10-100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。好处:①保证各物质成分的准确性②配制时的快速移取③便于低温保藏。3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。4、玻璃化现象（vitrificationphenomenon）：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。5、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。6、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。7、接种：在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。三、问答题1、一般组织培养的操作工序：（1）、培养器皿的清洗；（2）、培养基的配制、分装和高压灭菌；（3）、无菌操作——材料的表面灭菌和接种；（4）、将培养物放到培养室培养；（5）、试管苗的驯化、移栽和初期管理。2、固体培养基与液体培养基相比有何特点？优点:操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究.缺点:培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢，影响养分的充分利用，同时培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用。3、论述植物生长调节物质在组织培养中的作用？并列举常见的种类(1)生长素类：主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化；促进细胞伸长；诱导根的分化，促进生根(2)IAA（吲哚乙酸）；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸)(3）细胞分裂素类：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。抑制衰老，减少叶绿素分解，有保鲜效果。(4)包括6—BA(6—苄基腺嘌呤)、Kt(激动素)、Zt(玉米素)等。4、在培养基中加入活性炭有什么作用？（1）主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响（2）活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根（3）对形态发生和器官形成有良好的效应5、常用的培养基有哪些？说明其特点(1）MS培养基：1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。特点是无机盐离子浓度较高(2)hite培养基：无机机盐浓度较低，适于生根培养。(3)N6培养基：KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。广泛应用于禾谷类植物的花粉和花药培养。(4）B5培养基：主要特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。适宜双子叶植物特别是木本植物的培养(5)M—8P培养基：为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素6、植物组织培养技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容？（1）培养基的配制及灭菌（2）外植体的选择及灭菌（3）外植体的接种及培养（4）试管苗的驯化与移栽7、如何配制组织培养用的培养基？(1）配制母液：一般母液配成比所需浓度高10-100倍的浓缩液，配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。(2)配制方法：①将母液按顺序摆放②取适量的蒸馏水入容器③按需要量依次取母液及生长调节物质④加入蔗糖（30g/L）溶解⑤定容⑥调PH值⑦分装培养瓶，并加琼脂(6-10g/L)，封口⑧高压灭菌8、组织培养中常用的灭菌方法？分为物理的和化学的两类，（1）物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤和大量无菌水冲洗等措施；（2）化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。9、怎样进行培养基的高压湿热灭菌?方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到49kPa时，打开放气阀，放出空气（注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底），待压力表指针归零后，再关闭放气阀。当压力表上升达到108kPa时，锅内温度达121℃（在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢），维持20-30min。10、如何对外植体进行表面消毒？(1)将需要的材料用水洗干净。(2)表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。(3)灭菌剂处理：0.1%升汞10分钟、或在10%漂白粉上清液中浸泡10-15分钟。(4)用无菌水冲洗3-5次左右11、无菌操作时应注意哪些事项？(1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室；(2)在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后70%酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面；(5)接种工具蘸95%酒精，灼烧；(6)接种时将试管斜着，使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。(7)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；(8)接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。12、接种后离体培养物对光、温、湿等环境条件的要求？(1)光照：愈伤组织的诱导不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般12－16h/d，光照度1000－5000lx。(2)温度：一般25±2℃(3)湿度：培养室内的湿度要求保持70％－80％的相对湿度。13、在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？(1)外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗①同时长芽和根②先长芽，再长根③先长根，再长芽(2)外植体→胚状体→试管苗(3)外植体→根、芽→试管苗。14、论述离体培养可能出现的异常现象及防止措施？（1）污染：污染原因从病源分面主要有细菌和真菌和两大类。预防措施：(1)减少或防止材料带菌(2)外植体灭菌要彻底(3)玻璃器皿和金属器皿的灭菌(4)布质制品的灭菌(5)无菌室的消毒(6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进行接种。（2）、褐变：防止的措施有：选择适宜的外植体及最佳培养基、连续转移、加抗氧化剂、加活性剂。（3）、玻璃化现象，预防措施：①适当控制培养基中无机营养成分；②适当提高培养基中蔗糖和琼脂浓度；③适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生长素量；④增加自然光照，控制光照时间；⑤控制好培养温度；⑥增加容器通风，最好进行CO2施肥15、与常规苗相比，试管苗具有哪些特点？(1)生长细弱；(2)光合作用差(3)叶片气孔数目少，活性差(4)根的吸收功能弱(5)对逆境的适应和抵抗能力差16、如何提高试管苗移栽的成活率？（1）试管苗的生理状况应选择壮苗，以提高移栽后的成活率（2）加入植物生长调节物质如生长素（3）降低无机盐的浓度（4）加入少量活性炭，尤其是用酸、碱和有机溶剂洗过的活性炭（5）环境因子适当的环境条件能提高移栽的成活率（6）移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过渡