溶液各种配制

附录：常用试剂配制及应用一、常用缓冲液、试剂的配制碳酸盐缓冲液(Carbonate-BicarbonateBuffer)由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH9的缓冲液配制（附表1）。附表1.0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）pH0.2mol/LNa2CO3(ml)0.2mol/LNaHCO3(ml)pH0.2mol/LNa2CO3(ml)0.2mol/LNaHCO3(ml)9.24.046.010.027.522.59.37.542.510.130.020.09.49.540.510.233.017.09.513.037.010.335.514.59.616.034.010.438.511.59.719.530.510.540.59.59.822.028.010.642.57.59.925.025.010.745.05.0磷酸缓冲液(PhosphateBuffers，PB)磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽。NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH4的缓冲液。Na2HPO4的pH值偏碱性，可用作pH10的缓冲液。而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制（附表2）。附表2.0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2）pH0.2mol/LNaH2PO4(ml)0.2mol/LNa2HPO4(ml)pH0.2mol/LNaH2PO4(ml)0.2mol/LNa2HPO4(ml)5.793.56.57.039.061.05.892.08.07.133.067.05.990.010.07.228.072.06.087.712.37.323.077.06.185.015.07.419.081.06.281.518.57.516.084.06.377.522.57.613.087.06.473.526.57.710.589.56.568.531.57.88.591.56.662.537.57.97.093.06.756.543.58.05.394.76.851.049.08.14.295.86.945.055.08.23.097.0磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-bufferedsaline,PBS)磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.44gKH2PO40.24g在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。Tris缓冲液（Tris-HClBuffer,TB）Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定pH的0.05mol/LTris缓冲液的配制是将50ml0.1mol/LTris碱溶液与附表3所示相应体积（ml）的0.1mol/LHCl混合，加水至将体积100ml，即为0.05mol/LTris缓冲液。另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液pH可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加HCl用量，精细调节pH至所需值。附表4.0.05mol/LTris缓冲液pH需0.1mol/LHCl（ml)pH需0.1mol/LHCl（ml)7.145.78.126.27.244.78.222.97.343.48.319.17.442.08.417.27.540.38.514.77.638.58.612.47.736.68.710.37.834.58.88.57.932.08.97.08.029.2Tris盐缓冲液（TBS）：Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用TBS配制如下。8gNaCl、0.2gKCl以及3gTris溶解于800ml蒸馏水中，加入0.015g酚红并用HCl调pH至7.4用蒸馏水定容至1L，分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存。现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加KCl及酚红。Hank’s液(Hank’sBalancedSaltSolution)Hank’s液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。贮存液A液：(I)NaCl80gKCl4gMgSO4·7H2O1gMgCl2·6H2O1g用双蒸馏水定容至450ml。(II)CaCl21.4g(或CaCl2·2H2O1.85g)用双蒸馏水定容至50ml。将I和II液混合，即成A液。贮存液B液：Na2HPO4·12H2O1.52g，KH2PO40.6g,酚红0.2g,葡萄糖10.0g,酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至500ml。(3)应用液：A、B储存液分别经112.6℃湿热灭菌20min，取A和B液各25ml，加无菌双蒸馏水至450ml，使用前用无菌的3.5%或5.6%NaHCO3调至所需pH。注意：药品必须全部用A.R试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。无Ca2+、Mg2+Hank’s液（Hank’sSolutionwithoutcalcium,magnesiumsulfate）NaCl80g,KCl4g,Na2HPO4·12H2O1.52g，KH2PO40.6g,葡萄糖10g,用双蒸馏水溶解后，加入0.4％酚红溶液50ml，再加入双蒸水至1000ml，112.6℃湿热灭菌20min，4℃冰箱保存。临用前将原液用无菌双蒸水作1：10倍稀释，用无菌的3.5%或5.6%NaHCO3调至所需pH。pH7.2柠檬酸盐缓冲液(CitrateBuffer)柠檬酸0.327g柠檬酸钠2.63g磷酸氢钠0.222葡萄糖0.00255mg蒸馏水加至100ml。pH3.3枸橼酸-磷酸盐缓冲液（Citricacid-PhosphateBuffer)0.131mol/Lcitrateacid，0.066mol/LNa2HPO4，等量混合，调节pH至3.3。0.5mol/LEDTA,pH8.0EDTA·2H2O186.1gNaOH～20g将EDTA·2H2O加入800ml水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。用NaOH调节pH至8.0，EDTA直到接近pH8.0才完全溶解，定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。0.4%酚红溶液取酚红0.4g置于研钵中逐滴加入1mol/LNaOH溶液11.28ml，边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中，加双蒸水至100ml，过滤后，4℃冰箱保存。醋酸钾（PotassiumAcetate）在60ml5mol/L醋酸钾溶液中，加入11.5ml冰醋酸和28.5ml水。该溶液用于碱性裂解。3mol/L醋酸钠（SodiumAcetate），pH5.2和pH7.0在800ml水中溶解408.1g三水醋酸钠，用冰乙酸调pH至5.2或用稀释乙酸调pH至7.0，加双蒸水至1L。分装后高压灭菌。柠檬酸钠缓冲液(SodiumCitrateBuffer)柠檬酸钠1.8gHCl(1mol)4ml无水乙醇95ml先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠，然后加入HCl和无水乙醇，再补充去离子水至总量200ml。饱合硫酸铵溶液(SaturatedAmmoniumSulfateSolution)取500ml双蒸馏水，加入约400克硫酸铵，水浴加热至70℃，磁力搅拌器充分搅拌，直到加入的硫酸铵不再溶解，以氨水（也可用NaOH）调pH7.2，室温保存。二、酶免疫检测常用试剂配制包被液(CoatingBuffer)（pH9.5碳酸盐缓冲液）Na2CO3·10H2O8.58gNaHCO35.8g溶于双蒸水至1000ml。封闭液(Confiningliquid)（5%脱脂乳-PBS溶液，pH7.4）脱脂乳50g加0.02mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）至1000ml溶解。洗液(washingliquid)氯化钠8.0g磷酸二氢钾0.2g磷酸氢二钠（12H2O）2.9g吐温-200.5ml加去离子水至1000ml溶解即可。终止液(stopbuffer)（2mol/LH2SO4）：21.7mlH2SO4加去离子水至200ml。缓冲甘油(glycerinebuffer)甘油9份PB（pH8.0）1份将9份甘油与1份PB合并，充分混匀。0.5%H2O2-甲醇液(HydrogenPeroxide-MethanolSolution)（总体积120ml）3%H2O220ml甲醇100mlDAB-H2O2底物缓冲液(DAB-H2O2SubstrateBuffer)取6mg二氨基联苯胺(3,3’-DiaminobenzidineTetrahydrochlorideDAB)溶解于10ml0.05molTris-HClpH7.6。使用前取0.3%H2O20.1ml加入到DAB溶液中(H2O2的终浓度为0.003%)。如有沉淀生成，则用滤纸过滤。5-溴-4-氯-3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液（BCIP/NBTSubstrateSolution）贮存液配制：NBT：在10ml70%的乙醇中溶解0.5gNBT。BCIP：在10ml100%二甲基甲酰胺中溶解0.5gBCIP。贮存液4℃保存，可稳定一年。底物显色液：取66μlNBT贮液与33μlBCIP加入到10ml碱性磷酸酶缓冲液中，充分混匀，底物显色液应在用前1小时内配制。三、细胞相关试剂配制L-谷氨酰胺（L-G）溶液（L-glutaminSolution）（0.2mol/L）称2.9gL-谷氨酰胺（分子量为146.15）用去离子水溶解至100ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5ml/瓶，-20℃冻存。100x青-链霉素（双抗）溶液（P/SPenicillin/StreptomycinSolution）取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1g，溶于100ml去离子水中，分装小瓶，4～5ml/瓶，-20℃冻存。7.5%NaHCO3溶液（NaHCO3Solution）称分析纯NaHCO37.5g，用去离子水溶解至l00ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5m1/瓶，盖紧瓶塞，4℃保存。HEPES溶液（HEPESSolution）（1mol/L）称23.83gHEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonicacid，N-2-羟乙基呱嗪-N'-2-乙基磺酸，分子量为238.3），用去离子水溶解至100ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5m1/瓶，4℃保存。氨基喋呤（A）贮存液（AminopterinStockingSolution）（100×,4×10-5mol/L）称1.76mg氨基喋呤（Aminopterin,分子量440.4），溶于90m1去离子水中，滴