电镜在肾小球疾病病理诊断中的应用价值研究

电镜在肾小球疾病病理诊断中的应用价值研究【摘要】目的：探讨电镜在肾小球疾病病理诊断中的应用价值。方法：选取我院在2013年3月~2014年3月接诊的82例肾小球疾病患者作为研究对象，所有患者都应用光镜+免疫荧光法、电镜分别进行肾组织活检，比较两种检查方法对肾小球疾病的诊断结果。结果：最终病理诊断显示IgA肾病所占比例最高，为19.51%，其次为肾小球微小病变，占9.76%，薄基底膜肾病、膜性肾病、狼疮性肾炎所占比例也较高，均为7.32%。电镜对最终病例诊断结果起完全修正作用的有19例（23.17%），起补充修正作用的有19例（23.17%）。光镜+免疫荧光检验有44例对肾活检最终病理诊断结果产生影响，占53.66%，电镜检验有38例对肾活检最终病理诊断结果产生影响，占46.34%，二者比较，差异具有统计学意义（P0.05）。结论：在肾小球疾病病理诊断中，电镜检查可为临床诊断、疾病分型、病理分期提供重要的参考信息，电镜联合光镜检查可进一步降低肾小球疾病误诊率，值得推广应用。【关键词】肾小球疾病；肾活检；电子显微镜；光学显微镜目前，临床诊断肾脏疾病最基本的手段仍为肾活组织病理检查，肾活检对明确肾脏疾病类型、发病机制、判断预后及评估病情进展都具有重要作用。在肾活检病理诊断中，电镜、免疫荧光/免疫组化、光镜是不可或缺的三大组成部分[1]。近年来，随着电镜技术的发展与普及，其在肾活检病理诊断中的应用优势也越来越明显，其能反映肾小球超微结构改变，对肾小球疾病的免疫荧光和光镜病理诊断进行验证和修正[2]。为进一步明确电镜在肾小球疾病病理诊断中的应用价值，本文选取了82例行电镜、免疫荧光、光镜肾活检的肾小球疾病患者进行研究，现报道如下。1一般资料与方法1.1一般资料选取我院泌尿内科在2013年3月~2014年3月接诊的82例肾小球疾病患者作为研究对象，本组患者均接受肾组织活检，其临床检查及实验室检查资料均完整。男45例，女37例，年龄8~75岁，平均（36.5±18.8）岁。临床表现：肾病综合征10例，血尿32例，肾炎综合征11例，蛋白尿2例，肾功能衰竭1例，溶血尿毒综合征1例。1.2方法所有患者均在B超引导下行肾穿刺活检术，取肾活检标本，并将其分为3份，分别用于免疫荧光、光镜、电镜检查。（1）第一份肾活检标本进行石蜡包埋，切片（厚度2μm），常规进行Masson（马森）、PASM（嗜银）、PAS（糖原）、HE（苏木精-伊红）染色，然后进行光镜检查；（2）第二份肾活检标本冰冻后切片（厚度4μm），用以免疫荧光检测。采用直接法检测FRA（纤维蛋白原）、C1q、C3、IgA、IgM、IgC，采用间接法进行乙肝病毒抗原检测，检测项目包括HbeAg、HbcAg、HbsAg；（3）第三份肾活检标本进行电镜检查。分别使用戊二醛（2.5%）、锇酸（1%）对活检标本进行前固定、后固定，再使用丙酮脱水，使用Epon812环氧树脂对肾组织进行常规包埋处理，使用甲苯胺蓝染色定位后切片（厚度50nm），铀、铅双重电子染色后，在H-600型电子显微镜下观察肾小球基底膜厚度、基底膜内沉积物情况、系膜细胞或基质增生情况、系膜内沉积物情况、内皮细胞及上皮细胞增生及结构变化情况、系膜与基底膜关系、足突融合程度、足细胞变性、假微绒毛形成情况等。部分疑难病例，还需进行Ⅳ型胶原α3α5染色和κλ轻链染色/刚果红染色。1.3观察指标参考WHO制定的肾小球疾病分类方法、肾活检病理诊断标准，对免疫荧光和光镜检查结果进行初步病理诊断，再结合电镜检查结果做出最终病理诊断，个别疑难病例，还需结合Ⅳ型胶原α3α5染色和κλ轻链染色/刚果红染色结果做出最终病例诊断。1.4统计学方法本次研究数据应用统计学软件SPSS19.0进行处理，计数资料比较采用卡方检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1最终病理诊断82例患者的最终病理诊断结果见表1。从表1可知，IgA肾病所占比例最高，为19.51%，其次为肾小球微小病变，占9.76%，薄基底膜肾病、膜性肾病、狼疮性肾炎所占比例也较高，均为7.32%。表182例患者的最终病理诊断结果疾病类型例数构成比（%）疾病类型例数构成比（%）IgA肾病1619.51膜增生肾炎33.66肾小球微小病变89.76内皮细胞病33.66薄基底膜肾病67.32乙型肝炎病毒性肾炎33.66膜性肾病67.32小管间质性疾病33.66狼疮性肾炎67.32IgM肾病22.44糖尿病肾病56.10Alpot综合征22.44局灶节段肾小球硬化56.10毛细血管内增生肾炎22.44紫癜性肾炎56.10肾淀粉样变11.22系膜增生性肾炎56.10高血压性肾损害11.22肾小球轻微病变44.88硬化性肾炎11.222.2电镜的完全修正、补充修正结果电镜对最终病理诊断结果的完全修正、补充修正结果见表2。从表2可知，电镜对最终病例诊断结果起完全修正作用的有19例，占23.17%，完全修正的疾病类型包括肾小球微小病变、薄基底膜肾病、膜性肾病、糖尿病肾病、Alpot综合征、肾淀粉样变；起补充修正作用的有19例，占23.17%，补充修正的疾病类型包括IgA肾病、膜性肾病、狼疮性肾病、糖尿病肾病、局灶节段肾小球硬化、乙型肝炎病毒性肾病、膜增生肾炎。表2电镜的完全修正、补充修正结果[n]疾病类型完全修正补充修正验证诊断合计IgA肾病011516肾小球微小病变8008薄基底膜肾病6006膜性肾病1326狼疮性肾炎0516糖尿病肾病1405局灶节段肾小球硬化0145紫癜性肾炎0055系膜增生性肾炎0055肾小球轻微病变0044膜增生肾炎0123内皮细胞病0123乙型肝炎病毒性肾炎0303小管间质性疾病0033IgM肾病0022Alpot综合征2002毛细血管内增生肾炎0012肾淀粉样变1001高血压性肾损害0011硬化性肾炎0011合计19194482构成比/%23.1723.1753.66100.02.3光镜+免疫荧光检验与电镜的病理诊断影响程度光镜+免疫荧光检验有44例对肾活检最终病理诊断结果产生影响，占53.66%；电镜检验有38例对肾活检最终病理诊断结果产生影响，占46.34%，二者比较，差异具有统计学意义（P0.05）。见表3。表3光镜+免疫荧光检验与电镜的病理诊断影响程度比较[n]检测方法对最终病理诊断无影响对最终病理诊断有影响影响率（%）电镜443846.34光镜+免疫荧光384453.663讨论电镜可将标本放大数十万倍，在电镜下，可清晰地观察到肾小球基底膜结构及厚度变化，肾小球足细胞足突形态，以及其他细胞的细胞器变化，同时还能观察到致密物及致密物沉淀部位、病毒样颗粒、特殊纤维样物质，而肾活检标本的这些情况在光镜下，或通过免疫病理检查是无法完成的[3]。电镜的问世及应用，也发现了纤维性肾小球病等多种新的肾小球疾病，极大地丰富了人们对肾脏疾病尤其是肾小球疾病的认识，其已经成为了目前肾脏病理诊断的重要组成部分之一[4]。本组患者的最终病理诊断结果显示，所有肾脏疾病中，肾小球疾病所占比例最高，达到了96.8%。提示电镜检查对肾小球疾病诊断的敏感性较高，这可能与电镜能显示肾小球基底膜超微结构、电子致密物分布情况，从而能更好地进行肾小球病理诊断有关[5]。本次研究显示，在最终病理诊断结果中，23.17%是由电镜检查起决定性作用，疾病类型包括肾小球微小病变、薄基底膜肾病、膜性肾病、糖尿病肾病、Alpot综合征、肾淀粉样变。这一结果与国内相关文献报道相符[6]。这也提示光镜诊断为肾小球轻微病变和免疫荧光结果呈阴性的病例，还应做电镜检查，以免发生漏诊[7]。最终病理诊断结果中电镜检查起修正诊断作用的占23.17%，疾病类型以免疫复合物性肾炎居多，这可能与电镜能够精确定位电子致密物沉积部位，显示沉积物特点、结构等有关。虽然电镜检查的应用优势显著，但其观察范围较为局限，对弥漫性肾炎、局灶节段性肾小球病变的诊断较为有限，其对最终病理诊断结果无影响，免疫荧光+光镜检查即可独立诊[8]。然而，由于电镜具有显示电子致密物、超微结构改变的作用，故可为病理诊断提供相关佐证，用以验证免疫荧光+光镜诊断结果。综上所述，在肾小球疾病病理诊断中，电镜检查可为临床诊断、疾病分型、病理分期提供重要的参考信息，电镜联合光镜检查可进一步降低肾小球疾病误诊率，值得推广应用。【参考文献】[1]唐炯.68例肾脏疾病病理分析[J].医学信息,2014,(9):437-437.[2]董航,李艳茹,崔新明等.应用透射电镜在小儿肾小球疾病诊断中的利弊[J].中国实验诊断学,2012,16(6):1103-1105.[3]肖长长,骆九源,姚月成等.59例肾活检病例临床与病理分析[J].中国处方药,2014,(5):102-103.[4]畅飞,张莉,孟梅霞等.158例肾活检病理及临床分析[J].海南医学,2012,23(18):122-124.[5]王锐艳,孙婷丽.78例肾小球疾病临床与病理[J].中国实用医药,2013,8(24):38-39.[6]Satirapoj,B.,Nast,C.C.,Adler,S.G.etal.NovelInsightsintotheRelationshipBetweenGlomerularPathologyandProgressiveKidneyDisease[J].Advancesinchronickidneydisease,2012,19(2):93-100.[7]刘秋萍.镜下鉴别肾小球源性血尿242份探讨[J].中国现代药物应用,2010,4(2):59.[8]孙治华,张叔伟,柳林伟等.超声引导下行肾活检120例的临床分析[J].中国临床新医学,2011,04(4):348-350.