病毒的分离与鉴定

实验九病毒的分离与鉴定（一）1、病毒的培养与鉴定2、病毒的CPE过程3、病毒的电镜照片观察4、流感病毒的分离鉴定（一）（1）鸡胚尿囊腔接种法（2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种流感病毒的分离鉴定（1）鸡胚尿囊腔接种法（2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种目的：熟悉人工培养病毒的常用方法及其操作技术。实验材料：(1)来亨鸡受精卵、卵架、检卵灯。(2)碘酒、酒精消毒棉球。(3)灭菌的手术刀、镊子、剪刀。(4)1ml注射器及针头。(5)病毒液:流感病毒、新城鸡瘟病毒。(6)无菌胶布。鸡胚尿囊腔接种法分离鉴定程序病人急性期咽喉含漱液(经双抗处理)鸡胚培养(羊水囊或尿囊腔)35℃，72h收获：取羊水或尿囊液作血凝试验(+)(—)作血凝抑制试验盲传鸡胚两代，仍为阴性时报告阴性(1)取孵育10~12d鸡胚,在检卵灯下画出气室界线,于胚胎附近无大血管处画出标记作为注射入口.(2)将卵置于卵架上,消毒标记处,用无菌剪刀尖在标记处打一小孔.实验方法：(3)用灭菌注射器吸取流感病毒液0.2ml,由小孔刺入0.5cm后,进行注射.(4)注射后,用无菌胶布封孔,置35度温箱孵育.(5)每日在灯下检视鸡胚情况(若鸡胚在接种后24h内死亡为非特异性死亡,应弃之).实验方法：实验材料(1)脑炎病毒悬液.(2)小白鼠(3W龄).(3)1ml的注射器、针头.(4)碘酒、酒精棉球.实验方法:(1)以左手将小白鼠头部和体部固定于台面.(2)用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种(3)以1ml的注射器抽提病毒悬液,以右手持注射器,将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺入颅腔,约进针2~3mm,注入量0.02~0.03ml.(4)注射完毕,将用过之物煮沸消毒.实验结果:接种后每日观察动物2次.动物一般在接种后3-4d后开始发病,食欲减退,活动迟缓,耸毛、震颤、卷曲、尾强直,逐渐导致麻痹、瘫痪而死亡.病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种