直投式乳酸菌剂对便秘模型小鼠肠道功能的影响

直投式乳酸菌剂对便秘模型小鼠肠道功能的影响摘要：探讨直投式乳酸菌剂（directvatsetlactobacillus，DVSL）对便秘模型小鼠肠道功能的影响。小肠运动实验：将50只清洁级昆明雄性小鼠按体重随机分为5组，每组10只，即空白组，模型组和低、中、高剂量组。低、中、高剂量组小鼠每天分别灌胃2.09、4.17、8.34×107CFU/mLDVSL水悬液，空白组和模型组灌胃蒸馏水，每只小鼠的灌胃体积为0.2mL/10g体重，均自由摄食饮水，每周测定空腹体重1次。第15d空白组给予蒸馏水，其余四组小鼠灌胃浓度为5mg/kg复方地芬诺酯悬液，0.5h后各组均灌胃墨汁，观察各组小鼠的小肠推进率；小鼠排便实验：方法同上，不同的是实验19d时复方地芬诺酯灌胃浓度为10mg/kg，测定指标为首次黑便时间、6h内黑便粒数及其重量。各时间点各组小鼠体重均无统计学差异（P0.05）；模型组小鼠小肠推进率、6h内黑便粒数及其重量均低于空白组，首次黑便时间延长，两组间差异均有统计学意义（P0.01），说明小鼠便秘模型建立成功；中剂量小鼠小肠推进率、6h内黑便粒数均高于模型组（P0.05），高剂量组小鼠6h内黑便粒数及其重量均高于模型组（P0.01），而首次黑便时间短于模型组（P0.01）。按照根据《保健食品检验与评价技术规范（2003版）》结果判定原则，直投式乳酸菌对便秘模型小鼠具有调节肠道功能的作用。关键词：直投式乳酸菌；便秘；肠道功能EffectofDirectVatSetLactobacillusonIntestinalFunctioninMicewithConstipationAbstract：Toinvestigatetheeffectofdirectvatsetlactobacillus（DVSL）onintestinalfunctioninmicewithconstipation.Accordingtobodyweight，50malecleanKMmicewererandomlydividedintofivegroupswith10ineachforthesmallintestinalmovementexperiment，whichincludingcontrolgroup，modelgroupandthelow，middleandhighdosagegroup.Miceofthelow，middleandhighdosagegroupwererespectivelygiventhewatersolutionofDVSLwith2.09，4.17，8.34×107CFU/mLat0.2mL/10gbodyweightonceaday，whilemiceofcontrolgroupandmodelgroupweregivenwater，eachmousewasfreeaccesstodietandwater，andthebodyweightofmicewererecordedweekly.Miceofcontrolgroupweregivenwater，whilethatofmodelgroupand3dosagegroupswerecompounddipheoxylatewith5mg/kgatthe15thday.Halfanhourlater，miceofcontrolandmodelgroupweretreatedwithink，andthatofthethreedosagegroupsweretheinkmixedwithcorrespondingdoseof收稿日期：2013-09-24基金项目：国家科技支撑计划（2012BAD31B04）；“十二·五”四川省科技支撑项目“泡菜产业链”专项（2012NZ0002）。作者简介：邹华军（1986-），女，在读研究生。研究方向：营养与疾病。*通讯作者FoodandFermentationTechnology第49卷（第5期）Vol.49，No.5第49卷（总第177期）便秘是常见的胃肠道功能失调症，根据其发病机理可分为器质性便秘和功能性便秘［1］，其中后者更常见且主要由饮食因素、生活方式或药物因素所致。长期便秘可引起腹胀、腹痛、头痛、食欲不振、失眠和肿瘤等［2-3］，严重影响生活质量。由于人们生活方式改变、人口老龄化和神经紧张等社会因素和心理因素［4］，便秘在人群中普遍存在［5］，如亚洲［6］，北美［7］和欧洲等地区［8］。根据流行病学调查显示6.1%北京市成年人受功能性便秘所导致的症状的影响［9］，并且女性和老人更多见，如北京成年男性与女性便秘的发生率之比为1/4.59［10］。目前，便秘者多采用刺激性或润肠性药物进行排便，其副作用较大［11］。研究表明便秘与肠道微生物群有关，肠道乳酸杆菌和双歧杆菌等有益菌减少而潜在的有害菌增加，使肠道菌群失调而可能导致便秘［12］。益生菌是一种有活性的肠道微生物，具有改善肠道功能［13］、降低血脂［14］、调节免疫功能［15］等保健作用。益生菌不仅广泛应用于食品发酵工业，还用于临床治疗便秘、腹泻、湿疹等疾病［16-17］。本研究使用的直投式乳酸菌是从泡菜水中提取，其主要成分是植物乳杆菌和短乳杆菌。然而不同来源的植物乳杆菌作用效果存在差异［18］，因此直投式乳酸菌对肠道功能的改善作用尚有待研究。本研究使用复方地芬诺酯建立便秘小鼠模型，通过小肠运动实验和小鼠排便实验来探讨直投式乳酸菌对便秘模型小鼠肠道功能的影响，为直投式乳酸菌改善肠道功能提供依据。1材料与方法1.1主要材料与试剂直投式乳酸菌粉，菌含量2.45×1010CFU/g，四川省食品发酵工业研究设计院提供。清洁级昆明雄性小鼠，体重（15±2）g，共100只，简阳达硕动物科技有限公司。复方地芬诺酯，活性碳粉，阿拉伯树胶，成都宝信生物有限公司。1.2方法1.2.1溶液的配制［19］复方地芬诺酯混悬液：复方地芬诺酯片，每片含复方地芬诺酯2.5mg，分别取10、20片用研钵研碎呈粉末后加水至100mL，临用前配制。其中浓度5mg/kg体重用于小肠运动实验，10mg/kg用于小鼠排便实验。墨汁：准确称取阿拉伯树胶100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，称取活性碳（粉状）50g加至上述溶液中煮沸3次，待溶液凉后加水定容到1000mL，于冰箱中4℃保存，用前摇匀。1.2.2实验动物与分组处理100只清洁级雄性昆明小鼠，适应性喂养4d后，按照体重随机分为10组，按照预先规定的分组原则，前五组用于小肠运动实验，后五组用于小鼠排便实验。每个实验均包括空白组，模型组，低、中、高剂量直投式乳酸菌组，其处理措施如下：（1）空白组和模型组:灌胃蒸馏水；（2）低、中、高剂量组:分别灌胃2.09、4.17、8.34×107CFU/mL直投式乳酸菌剂水悬液。每只小鼠灌胃体积为0.2mL/10g体重，均自由摄食饮水，每周测定空腹体重1次。1.2.2.1小肠运动实验给予直投式乳酸菌剂的水悬液14d后，各组小鼠禁食不禁水16h。空白对照组给蒸馏水，模型组和3个剂量组小鼠灌胃给予复方地芬诺酯（5mg/kg）。给予复方地芬诺酯0.5h后，空白组和模型组均灌胃DVSLrespectively，theintestinalpropulsiveratewasmeasuredafter25minutes.Accordingtotheabovemethods，thetimeofthefirstblackfeces，theamountoffeceswithin6hoursanditsweightweremeasuredaftermicewereadministratedcompounddipheoxylatewith10mg/kgandinkinthedefectionexperimentwith19days.Therewerenostatisticaldifferencesinbodyweightofmiceineachgroupatdifferenttime（P0.05）.Andtheintestinalpropulsiverate，thetimeofthefirstblackfeces，theamountoffeceswithin6hoursanditsweighthadstatisticaldifferencesinmiceofcontrolgroupandmodelgroup（P0.01），whichsuggestedthatmiceconstipationmodelwassuccessfullyestablished.Theintestinalpropulsiverateandtheamountoffeceswithin6hoursofmiceinmiddledosagegroupwerehigherthanthatofmodelgroup（P0.05），andtheamountoffeceswithin6hoursanditsweightofmiceinhighdosagesgroupwerehigherthanthatofmodelgroup（P0.01），whiletimeofthefirstblackfeceswasshorter（P0.01）.AccordingtotheTechnicalStandardsforTesting&AssessmentofHealthFood（2003edition），thesolutionofdirectvastsetlactobacillushastheregulationofintestinalfunctioninmicewithconstipation.Keywords：directvatsetlactobacillus（DVSL）；constipation；intestinalfunctiondoi：10.3969/j.issn.1674-506X.2013.05-007邹华军等：直投式乳酸菌剂对便秘模型小鼠肠道功能的影响272013年第5期图2直投式乳酸菌剂对各组小鼠的6h内黑便粒数的影响Fig.2TheeffectofDVSLontheamountoffeceswithin6hoursofmiceineachgroup注：*表示与空白组比较，P0.01；#表示与模型组比较，P0.05；☆表示与模型组比较，P0.01＃☆空白组模型组低剂量组中剂量组高剂量组01015202530356h内黑便粒数/粒*图1直投式乳酸菌剂对各组小鼠的小肠推进率的影响Fig.1TheeffectofDVSLonintestinalpropulsiverateofmiceineachgroup＃0405060708090小肠推进率/%空白组模型组低剂量组中剂量组高剂量组*注:*表示与空白组比较，P0.01；#表示与模型组比较，P0.05。图3直投式乳酸菌剂对各组小鼠的6h内黑便重量的影响Fig.3TheeffectofDVSLontheweightoffeceswithin6hoursofmiceineachgroup☆*1.00.80.60.40.20.06h内黑便重量/g空白组模型组低剂量组中剂量组高剂量组注：*表示与空白组比较，P0.01；☆表示髙剂量组与模型组比较，P0.01。墨汁，低、中、高剂量组分别给予含受试样品的墨汁。25min后，立即脱颈椎处死小鼠，之后剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按下式计算墨汁推进率：小肠推进率/%＝［墨汁推进长度（cm）/小肠总长度（cm）］×1001.2.2.2小鼠排便实验给予直投式乳酸菌剂的水悬液19d后，各组小鼠禁食不禁水16h。空白对照组给予蒸馏水，模型组和3个剂量组小鼠给予复方地芬诺酯（10mg/kg）。给予复方地芬诺酯0.5h后，空白组和模型组小鼠灌胃墨汁，低、中、高剂量组分别给予含受试样品的墨汁