搜索
-1-研究工作总结一、任务来源本课题任务来源于2006年广西科学基金项目资助课题－联合用药治疗外伤性增生性玻璃体视网膜病变的试验研究（项目批准号:桂科自0640191）。二、研究背景增生性玻璃体视网膜病变（proliferativevitreoretinopathy,PVR）是指眼穿通伤、眼内出血、孔源性视网膜脱离及视网膜复位手术后，由于玻璃体内及视网膜表面的细胞增生和收缩，造成牵引性视网膜脱离的一种严重眼病。PVR形成的条件是血-眼屏障破坏，导致视网膜色素上皮细胞、胶质细胞、成纤维细胞等在细胞因子及细胞外基质的作用下，迁移至视网膜表面及玻璃体腔，增殖附着于一切可能界面，并发生收缩，最终造成牵引性视网膜脱离导致失明。目前治疗PVR主要通过手术，但由于手术自身的局限性，手术后仍然有相当比例的PVR再发生致使手术失败。通过药物阻止视网膜色素上皮细胞、胶质细胞、成纤维细胞在玻璃体腔移行和增殖，从而达到控制PVR的发生发展逐渐成为眼科学界的共识。为此，国内外眼科学者正致力寻找抑制PVR的药物。目前，利用药物抑制PVR发生、发展的研究已成为眼科学研究的一大热点。不过，由于目前治疗PVR的药物种类和疗效尚无明确的、达成一致的结果，仍需多中心、随机化、大样本的进一步研究。-2-综观近年来治疗PVR的药物，主要集中在以下几类药物：（1）皮质类固醇。多个研究表明[1-4]在玻璃体切割术中玻璃体腔内注射去炎舒松,长期随访发现眼内炎发生率和视网膜脱离复发率均降低。（2）抗代谢药物。HueberA[5]发现柔红霉素可诱导RPE细胞凋亡，从而降低PVR的发生发展。（3）维生素类及其衍生物。阎晓然[6]利用全反式维甲酸缓释系统植入兔眼玻璃体腔，结果发现含量为650ug和1070ug的全反式维甲酸可有效预防术后PVR发生。（4）钙通道拮抗剂和钙调蛋白拮抗剂。胡正等[7]研究发现维拉帕米具有明显的抑制RPE的增殖作用，10μmol/L浓度维拉帕米能使视网膜色素上皮细胞增殖率显著下降、以及延迟PVR发生。（5）抑制纤维素生成的药物。Lane等[8]发现在玻璃体切割术的灌注液中加入5×103U/L低分子量肝素可明显抑制术后纤维蛋白的生成，对PVR的防治有一定意义。（6）抑制细胞外基质合成的药物。YasukawaT等[9]发现曲尼司特可抑制细胞外基质合成，抑制兔实验性PVR的形成。（7）细胞信号转导抑制剂。Zheng等[10]报道血小板源性的生长因子受体激酶抑制剂AG1295在体内可抑制实验性PVR的发生。随着对PVR认识的提高，眼科学者逐渐认识到由于PVR发生的多因素性，病理过程的多时相，单一用药效果必然有限。根据病理时相联合用药，更能提高药物治疗PVR的防治效果以及降低药物的毒副作用。目前玻璃体腔联合用药治疗PVR主要表现在（1）5-氟尿嘧啶（5-fu）与肝素的联合用药：ScheerS等[11]研究认为5-FU及肝素联合应用进行玻璃体内灌注治疗C1级以上PVR安全有效。我国张少冲等[12]在临床试验中，配置浓度为低分子肝素5IU／m1+0.25mg／m1的5-FU作为PVR手术灌注液来观察联合用药对防-3-治玻切术后PVR的效果。研究结果显示，治疗组术后PVR明显低于对照组。（2）5-氟尿嘧啶（5-fu）与糖皮质激素类联合用药：Cardillo等[13]将5-FU与糖皮质激素类药物以共价键相连接,制成缓释制剂,并将其植入玻璃体内观察疗效。发现PVR严重程度和牵拉性视网膜脱离的发生率均显著低于对照组。（3）TPA、肝素和高三尖山酯碱的联合应用：梅妍等[14]在PVR术后将三种药物注入患者玻璃体腔内。结果显示可以有效地抑制术后PVR形成，降低视网膜脱离的发生率。（4）阿霉素与地塞米松联合用药：荣翱[15]使用阿霉素1.25ug+地塞米松50ug玻璃体腔内注射。结果发现，药物确实能有效地抑制玻璃体及视网膜表面的增生反应。不过，由于目前联合用药多集中在抗代谢药物与皮质类固醇、抗纤维化药物的联合用药上，而抗代谢药物有有一定的毒副作用，所以寻找安全、高效的抗PVR药物有重要的临床意义。我国生产的蛇毒降纤酶是一种从蛇毒液中分离、纯化的凝血酶样酶制剂。药理上它能激发血管内皮细胞释放组织型溶纤酶原激活物，既能使血浆中纤维蛋白原含量降低，又能降解纤维连接蛋白。由于玻璃体腔的纤维连接蛋白具有促使成纤维细胞、巨噬细胞以及其他增殖细胞向玻璃体腔迁移、增殖，导致PVR产生的作用。因此，理论上蛇毒降纤酶具有抑制PVR发展的作用。我国学者证实蛇毒制剂具有抗纤维化作用[16]。另外，在结构上,蛇毒制剂含有大量的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)[16]以及含有赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(KGD)序列[17]。OSHIKAWAK等[18]研究发现KGD序列有与RGD序列相似的去整合素作用,能通过与细胞表面的整合素结合抑制了细胞与细胞外基质的粘附。2002年，SmithJB[19]等-4-从蛇毒液分离出来去整合素ocellatusin肽，研究发现ocellatusin肽是视网膜色素上皮细胞表面糖蛋白α5β1很好的抑制剂。由此推测具有的去整合素肽的蛇毒制剂可能具有抑制PVR的发生、发展的作用。因此，本实验尝试采用具有去整合素和组织型纤溶酶原激活剂特点的蛇毒制剂联合皮质类固醇激素及抗代谢药物行兔玻璃体腔内用药，观察其对外伤性PVR的抑制效果、对视网膜的毒性作用及探索联合用药抑制PVR的机理，为临床玻璃体腔用药治疗PVR提供实验依据。与此同时，本实验还研究抗生素联合皮质类固醇激素治疗外伤性出血性眼球穿通伤后PVR、眼内炎症及感染等并发症的效果。文献报道：[1]SonodaKH,EnaidaH,UenoA,etal.Parsplanavitrectomyassistedbytriamcinolneacetonideforrefractoryuveitis:acaseseriesstudy[J].BrJOphthalmol,2003,87(8):1010–1014.[2]FurinoC,Micelli-FerrariT,BosciaF,etal.Triamcinolone-assistedparsplanavitrectomyforproliferativevitreoretinopathy[J].Retina,2003,23(6):771–776.[3]UenoA,EnaidaH,HataY,etal.Long-termclinicaloutcomesandtherapeuticbenefitsoftriamcinolone-assistedparsplanavitrectomyforproliferativevitreoretinopathy:acasestudy[J].EurJOphthalmol,2007,17(3):392–398.-5-[4]CouchSM,BakriSJ.Useoftriamcinoloneduringvitrectomysurgerytovisualizemembranesandvitreous[J].ClinOphthalmol,2008,2(4):891–896.[5].HueberA,KyjeN,EsserPJ,etal.EffectsofdaunorubicinandCD95Lonretinalfunctioninsuperfusedvertebrateretina[J].JOculPharmacolTher,2005,21(2):133–138.[6].阎晓然，董晓光，陈楠，等.兔眼玻璃体腔植入维甲酸缓释系统防治增殖性玻璃体视网膜病变的药效学研究.中华眼科杂志,2003,39（1O）:621-625.[7].胡正，杨红，胡竹林，等.维拉帕米抑制原代培养兔视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究.同济医科大学学报,200130(4)：371-374.[8].LaneRG,JumperJM,NasirMA,etal.Aprospective,open-label,dose-escalatingstudyoflowmolecularweightheparinduringrepeatvitrectomyforPVRandseverediabeticretinopathy[J].Graefe’sArchClinExpOphthalmol,2005,243(7)∶701–70.[9].YasukawaT,KimuraH,DongJ,etal.Effectoftranilastonproliferation,collagengelcontraction,andtransforminggrowthfactorbetasecretionofretinalpigmentepithelialcellsandfibroblasts[J].OphthalmicRes,2002,34(4)∶206–212.-6-[10].ZhengY,IkunoY,OhjM,etal.Platelet-derivedgrowthfactorreceptorkinaseinhibitorAG1295andinhibitionofexperimentalproliferativevitreoretinopathy[J].JpnJOphthalmo1,2003,47(2)∶158–165.[11].ScheerS,MorelC,PoissonF,etal.Preventionofproliferativevitreoretinopathyusing5-FUheparin:clinicaltoleranceandefficacy[J].JFrOphthalmol,2005,28(7):701–706.[12].张少冲，李松峰，冷云霞.等氟尿嘧啶联合低分子肝素防治增殖性玻璃体视网膜病变的临床观察.中国实用眼科杂志,200523（4）347-351.[13].CardilloJA,FarahME,MitreJ,etal.Anintravitrealbiodegradablesustainedreleasenaproxenand52fluorouracilsystemforthetreatmentofexperimentalposttraumaticproliferativevitreoretinopathy[J].BrJOphthalmol,2004,88(9)：1201–1205.[14].梅妍,袁天国,汪洁,等.组织型纤溶酶原激活剂、肝素和高三尖杉酯碱对术后增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用.中华眼底病杂志,2001；17（1）:24-25.[15].荣翱，李锦文.阿霉素联合地塞米松玻璃体内注射的临床应用.中华医学杂志，200282（8）：546-548.-7-[16].刘金华，魏厚仁，吕源淑，等.蛇毒制剂对体外培养的兔结膜下成纤维细胞的影响.中华眼科杂志，2001，37（2）：136-139.[17].樊晓晖.桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因的克隆和序列分析[J].蛇志,1996,2(5):21-24.[18].OSHIKAWAK,TERADAS.Ussuristatin2,anovelKGDbearingdisintegrinfromAgkistrodonussuriensisvenom[J].JBiolchem(Tokyo),1999,125(1):31-35.[19].SmithJB,TheakstonRDG,CoelhoALJ,etal.Characterizationofamonomericdisintegrin,ocellatusin,presentinthevenomoftheNigeriancarpetviper,Echisocellatus.FEBSLett.2002，512111–115.三、研究工作总结本研究从2006年05月开始至2009年05月结束，整个课题分为三个阶段。第一阶段查资料、提出和确定项目的总体方案大量资料表明，视网膜色素上皮细胞、胶质细胞、成纤维细胞等在细胞因子及细胞外基