氯芬黄敏片(薄膜衣)检验方法验证记录

氯芬黄敏片（薄膜衣）检验方法验证记录【依据】WS-10001-（HD-1030）-2002、《中国药典》2010年版二部仪器：高效液相色谱仪型号：电子天平型号：马来酸氯苯那敏对照品中国药品生物制品检定所批号：100047-200305双氯芬酸钠对照品中国药品生物制品检定所批号：100334-2003021色谱条件色谱条件与系统适用性试验色谱柱填充剂：用十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：庚烷磺酸钠溶液(庚烷磺酸钠15.2mg,加三乙胺0.8ml,加水800ml,用冰醋酸调pH值至3.3±0.1,加水至1000ml)-甲醇-乙腈（25∶30∶18）检测波长：为262nm2线性关系考察对照品贮备液的制备：精密称取马来酸氯苯那敏对照品g，置50ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液⑴，（每1ml中含0.25mg）；精密称取双氯芬酸钠对照品g，置25ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液⑵，（每1ml中1.5mg）。线性测定1、精密量取对照品贮备液⑴、⑵各0.5mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；2、精密量取对照品贮备液⑴、⑵各1mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；3、精密量取对照品贮备液⑴、⑵各3mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；4、精密量取对照品贮备液⑴、⑵各5mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；5、精密量取对照品贮备液⑴、⑵各10mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；按以上述色谱条件,分别精密量取20ul，注入色谱仪，记录色谱图。马来酸氯苯那敏12345对照品稀释浓度（mg/mL）对照品进样量（ug）对照品谱图主成分面积平均结果以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程为：Y=X+r=结果显示：。双氯芬酸纳12345对照品稀释浓度（mg/mL）对照品进样量（ug）对照品谱图主成分面积平均结果以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程为：Y=X+r=结果显示：。3稳定性试验取上述线性关系项下的每1ml中含马来酸氯苯那敏0.05mg与双氯酚酸钠0.3mg对照品溶液；按以上述色谱条件,分别于样品制备后0、2.5、5、7.5、10小时，精密量取20ul，注入色谱仪，测定峰面积.记录色谱图。马来酸氯苯那敏进样时间0h2.5h5h7.5h10h平均RSD结果显示：双氯芬酸纳进样时间0h2.5h5h7.5h10h平均RSD结果显示：4重复性试验对照品溶液的制备：精密称取马来酸氯苯那敏对照品g，置50ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，（每1ml中含0.5mg）。精密称取双氯芬酸钠对照品g，置50ml量瓶中，加流动相使溶解，并精密量入上述马来酸氯苯那敏对照品贮备液5ml，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1ml中含双氯酚酸钠0.3mg与马来酸氯苯那敏0.05mg）。重复性试验:取氯芬黄敏片（批号：070401）20片，精密称定：g，平均片重：g/片，研细，精密称取6份，⑴：g，⑵：g，⑶：g，⑷：g，⑸：g，⑹：g，(约相当于双氯芬酸钠15mg)，分别置50ml量瓶中,加流动相适量,超声使溶解,加流动相至刻度,摇匀,滤过,即得。）测定法精密量取上述溶液各20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；计算，即得。马来酸氯苯那敏供试样品序号峰面积平均峰面积样品进样浓度（mg/ml）对照品溶液供试样品1供试样品2供试样品3供试样品4供试样品5供试样品6计算：平均含量为%，RSD为%。结果显示：。双氯芬酸纳供试样品序号峰面积平均峰面积样品进样浓度（mg/ml）对照品溶液供试样品1供试样品2供试样品3供试样品4供试样品5供试样品6计算平均含量为%，RSD为%。结果显示：。5加样回收率试验对照品溶液的制备：取重复性试验项下的对照品溶液；加样回收率试验：取已知含量的氯酚黄敏片适量，精密称取9份⑴：g，⑵：g，⑶g，⑷：g，⑸：g，⑹：g，⑺：g，⑻：g，⑼：g，分别置50mL量瓶中，分别精密加入马来酸氯苯钠敏对照品⑴：mg，⑵：mg，⑶：mg，⑷：mg，⑸：mg，⑹：mg，⑺：mg，⑻：mg，⑼：mg；再分别精密加入双氯芬酸钠对照品⑴：mg，⑵：mg，⑶：mg，⑷：mg，⑸：mg，⑹：mg，⑺：mg，⑻：mg，⑼：mg，照重复性试验项下方法制成每1mL含马来酸氯苯钠敏约0.04mg、0.05mg、0.06mg、含双氯芬酸钠约0.24mg、0.3mg、0.36mg的溶液各3份，按重复性试验项下方法测定，马来酸氯苯那敏供试样品序号峰面积平均峰面积进样浓度（mg/ml）对照品溶液低浓度供试样品1供试样品2供试样品3中浓度供试样品1供试样品2供试样品3高浓度供试样品1供试样品2供试样品3按计算，底、中、高3种浓度的回收率、RSD值供试品序号称样量称样含量加样量实测含量回收率RSD值低浓度供试样品1供试样品2供试样品3中浓度供试样品1供试样品2供试样品3高浓度供试样品1供试样品2供试样品39份溶液的回收率平均值为%，RSD为%。双氯芬酸钠供试样品序号峰面积平均峰面积进样浓度（mg/ml）对照品溶液低浓度供试样品1供试样品2供试样品3中浓度供试样品1供试样品2供试样品3供试样品1高浓度供试样品2供试样品3按计算，底、中、高3种浓度的回收率、RSD值供试品序号称样量称样含量加样量实测含量回收率RSD值低浓度供试样品1供试样品2供试样品3中浓度供试样品1供试样品2供试样品3高浓度供试样品1供试样品2供试样品39份溶液的回收率平均值为%，RSD为%。6破坏试验辅料干扰试验按处方量制备不含马来酸氯苯那敏和双氯芬酸钠原料药的样品，照上述实验条件，保留至样品峰保留时间的2倍，记录色谱图。热稳定性试验取本品适量，置120℃加热6h，取出放冷，研细，精密称取，置50ml量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得（每1ml约双氯芬酸钠0.3mg），照上述试验件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱图。光照试验取本品适量，置5000Lx光照24h，取出放冷，研细，精密称取，置50ml量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得（每1ml约双氯芬酸钠0.3mg），照上述试验条件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱图。强酸破坏试验取取本品适量，加1mol•L-1盐酸溶液5mL溶解，放置2h，用1mol•L-1氢氧化钠溶液中和，用流动相转移稀释至一50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，同法做空白试验，照上述试验条件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱图。强碱破环试验取本品适量，加1mol•L-1氢氧化钠溶液5mL溶解，放置2h，用1mol•L-1盐酸溶液中和，用流动相转移稀释至一50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，同法做空白试验，照上述试验条件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱图。结论：。7有关物质方法学研究参考双氯芬酸钠原料项下的【有关物质】制定如下：取本品10片，除去包衣后,研细,精密称取g(约相当于双氯芬酸钠0.1g)，加乙醇20ml，超声处理10、20、30分钟或加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液（1ml中约含10mg的溶液）精密量取适量，加乙醇稀释制成每1ml中含0.1mg、0.2mg、0.4mg、1mg的溶液作为对照溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取上述溶液各10ul，分别点于硅胶GF254薄层板上以乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸(25：25：0.2)为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯（254nm）下检视，供试溶液如显杂质斑点与对照溶液的主斑点比，不得更深。序号样品处理方法试验结果备注1超声处理10分钟2超声处理20分钟3超声处理30分钟4加热回流30分钟结论：。空白试验称取干预胶化淀粉5.0g、干淀粉8.0g、硬脂酸镁0.1g分别过80目筛网，得空白样品。（辅料比例同处方）分别取氯芬黄敏片样品10片和上述空白样品0.5g，按上述确定的样品处理方法进行试验，分别吸取上述溶液（空白样品溶液、供试品溶液和对照溶液）各10ul、并以样品处理所用的试剂乙醇作为空白试剂，分别点于硅胶GF254薄层板上以乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸(25：25：0.2)为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯（254nm）下检视，结果见下表：样品名称试验结果备注空白样品供试品溶液对照溶液空白试剂试验结论：。