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海南大学本科生毕业论文（设计）开题报告题目饲料中豆粕蛋白替代鱼粉蛋白对珍珠龙胆石斑鱼生长、肠道及肝脏组织学的影响学生姓名牟明明学号20122111310044学院海洋学院专业年级2012级水产养殖学指导教师吴小易职称副教授计划完成时间2016年5月一、选题的目的、意义（理论、现实）和国内外研究概况目的:饲料中豆粕蛋白替代鱼粉蛋白对珍珠龙胆石斑鱼生长、肠道及肝脏组织学的影响意义：珍珠龙胆石斑鱼又称龙虎斑或珍珠斑，是用龙胆石斑（公）与老虎斑（母）培育出来的杂交新种石斑鱼，其肉质细嫩、成长快速、抗病力强，有虎斑头、龙胆尾的外型,显现杂交优势，商品鱼市场价格好，也可以做为观赏鱼，市场前景广阔，珍珠龙胆石斑鱼27元/斤。鱼粉作为优质的动物性饲料蛋白源，广泛应用于水产饲料中。随着水产饲料产量的增加，对鱼粉需求的总量也随之增加。鱼粉资源日益紧张，造成鱼粉价格居高不下。为缓解鱼粉的供需矛盾，降低饲料成本，针对具有高性价比的植物性替代蛋白源的研究和开发显得十分迫切、尤为重要国内外研究概况：近些年来，使用植物蛋白源替代饲料中鱼粉的研究已有大量的报道，在不同养殖类型的水产动物中都有较好的使用效果。然而，也产生一些制约植物蛋白源大量应用的亟需解决的问题，如生长速度的降低、饲料系数的增高、蛋白质利用率的下降，以及肝脏、肠道组织病变等。现有研究表明，其中原因主要表现在适口性不佳、氨基酸不平衡和抗营养因子等。为解决上述问题，常用的方法有使用复合植物蛋白源、添加植酸酶、改良适口性及添加晶体氨基酸等参阅文献：1张璐，艾庆辉，麦康森等．植酸酶和非淀粉多糖酶对鲈鱼生长和消化酶活性的影响水产学报2姜光丽，周小秋．大豆分离蛋白对幼建鲤肝胰脏发育及消化道蛋白酶活力的影响水产学报3张帆，张文兵，麦康森，孙瑞健.饲料中豆粕替代鱼粉对大黄鱼生长、消化酶活性和消化道组织学的影响4向枭,周兴华,陈建,李代金,王文娟,周小秋.饲料中豆粕蛋白替代鱼粉蛋白对齐口裂腹鱼幼鱼生长性能、体成分及血液生化指标的影响水产学报二、本课题的理论依据、研究内容和研究方法、步骤及进度安排理论依据：动物性油脂主要含饱和脂肪酸；植物油脂主要成分是不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸易于消化，并有软化血管的作用。动物油脂多属饱和性,容易引起动脉硬化,而植物油脂多属未饱和性,可以避免动脉硬化，不饱和脂肪酸根据双健个数的不同，分为单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸二种。是食物脂肪中，单不饱和脂肪酸有油酸，多不饱和脂肪酸是亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸等。人体不能合成亚油酸和亚麻酸，必须从膳食中补充。根据双健的位置及功能又将多不饱和脂肪酸分为ω-6系列和ω-3系列。亚油酸和花生四烯酸属ω-6系列，亚麻酸、DAH、EPA属ω-3系列。不饱和脂肪酸能保持细胞膜的相对流动性，以保正细胞的正常生理功能。使胆固醇酯化，降低血中胆固醇和甘油三酯。降低血液粘稠度，该善血液微循环。研究内容：饲料中豆粕蛋白替代鱼粉蛋白对珍珠龙胆石斑鱼生长、肠道及肝脏组织学的影响研究步骤：一、实验饲料制作试验分别以豆粕替代0(对照组)、10%、20%、30%、40%、50%、60%的鱼粉蛋白设计出7种等氮等能的饲料配方,按照配方配制试验饲料(A1、A2、A3、A4、A5、A6和A6)，按照饲料配方，将所需的各种干饲料原料粉碎，经过40目筛筛选，按饲料配方中的比例称重预混合，然后放入搅拌机（A-200TMixerBenchModelunit，ResellFoodEquipmentLtd,Ottawa,Canada）中搅拌30分钟，在搅拌过程中，加入鱼油，大豆卵磷脂，同时按照每100g干物质混合物加30-50ml水的比例缓慢添加水，使原料成团；在此过程中，用6mol/L的NaOH调节饲料的pH，使pH为7.原料成团后，用双螺杆挤压式制粒机（中国，广州，华南理工大学，化学工程学院）制成直径3.0mm的实验饲料颗粒。自然风干至水分含量低于10%，然后用密封袋封存于-20℃备用。饲料按照AOAC（1985）标准方法测定粗蛋白，总脂肪和水分含量。二、试验鱼苗以及实验设计珍珠龙胆石斑鱼幼鱼来自中国海南基益丰水产养殖有限公司。实验开始，幼鱼按每池30尾的密度饲养在室内水泥池中驯化2周，驯化期间投喂商业饲料使鱼苗适应养殖环境。2W后，将初始体重为4.37g的实验鱼随机分配到12个网箱中，每箱22尾鱼。实验鱼初始体重4.73g，饲养于12个容积为0.46m³的流水网箱（1.2m×0.7m×0.5m）中，网箱每3个放置于1个6m³的水泥池（3m×2m×1m），放养密度为22尾/网箱，每三个网箱一种蛋白含量的饲料。实验鱼采用定量投喂的方法，实验周期为8周，每周称取网箱中鱼的总体重，根据每个网箱鱼总体重调整投喂量。实验第1至第8周投喂率分别为体重的9%、7%、5%、5%、4%、4%、3%、3%，每天等量投喂2次（早上8：00，下午4：00）。实验期间，每天检测水质（盐度28‰、水温28℃、溶氧6.0-6.2mg/L、氨氮0-0.20mg/L）。三、样品采集养殖实验进行8W后取样，取样前，实验鱼饥饿24h，然后对每箱鱼进行麻醉（10mg/LMS-222）、计数和称重。每箱随机抽取9条鱼，2条用于分析体组成，另外7条用肝素钠注射器抽取血液后进行称重、解剖，称量内脏重，肝重和肠系膜脂肪重。同时取背部两侧的白肌，去除皮肤留样备用。内脏以及肝脏称重后，每箱各取四份完整肠道和肝脏，放入5mlEP管中。其中两尾的肠道以及肝脏收集编号后，迅速放入液氮中冷冻保存留作酶活力分析。另两尾鱼的肠道及肝脏收集编号后加入Bouin液后常温保存。血液样品在3500g的离心力下离心分离10分钟，抽取上清液保存在液氮中。四、分析方法基本成分分析按照AOAC（1985）的标准办法：将样品置于烘干机中125℃烘至恒重得到水分含量；粗蛋白（N×6.25）测定则在进行酸消化后使用凯氏定氮法滴定获得（1030-Auto-analyzer,Tecator,Sweden）,脂肪按照索氏抽提法利用石油醚在脂肪抽提机中抽提（SoxtecSystemHT6,Tecator,Sweden）,灰分则将样品置于马弗炉中650℃3h后称量获得。五、计算公式增重率（WG）=100×(末均重(g)－初均重(g))／初均重(g)饲料效率（FE）=100×(末均重(g)－初均重(g))／饲料摄取量(g)饲料系数＝饲料消耗量(g)/增重量(g)×100%肝体比（HIS）=100×肝脏重量(g)／体重(g)肠系膜脂肪比=100×肠系膜脂肪重量(g)／体重(g)六、数据统计所有数据均以平均值±标准差的方式表示，使用统计软件SPSS12.0进行单因子方差分析（ANOVA）（n=3）。使用Turkey多重比较来分析数据之间的差异性。进度安排：查阅资料拟定论文题目1月初~1月5撰写开题报告1月5~1月12号落实实验动物、场地、器械1月12~2月初试验实施阶段2月初~4月中旬数据整理4月中旬~4月22号撰写毕业论文初稿4月22号~4月30整理调查、实验数据、毕业论文定稿5月三、本课题的重点、难点，预期结果和成果形式重点、难点：饲料的配比要称量精确，在长期的饲养过程中要严格分组，不能混淆，在后期的实验阶段，各组平行实验要分开进行，一组一组来，不要同时做，环境的同等控制。预期结果和成果形式：估计龙胆石斑鱼的生长性能最佳时豆粕蛋白替代比例为30%40%左右;随着豆粕替代鱼粉蛋白比例的增大,估计鱼体水分、粗灰分、肥满度差异不显著，根据相关原理肝体指数则随豆粕蛋白替代水平增加而增大,谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)随着豆粕替代比例增加而逐渐升高,饲料中豆粕替代一定比例的鱼粉蛋白可促进齐口裂腹鱼的生长,提高对饲料蛋白的代谢和免疫能力,适量的豆粕蛋白替代比不会对肠道及肝脏组织结构有破坏作用，但豆粕替代鱼粉蛋白比例过量应该会对肠道及肝脏组织结构有破坏作用。学生签名：年月日指导教师意见（对本课题的深度、广度及工作量等的意见）zx20za0020指导教师签名：年月日开题指导小组意见组长签名：年月日