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1.目的为确定本公司水质中菌落总数、大肠菌群测定使用方法，明确菌落总数、大肠菌群检测相关细则，指导人员正确作业，确保检测工作正常开展，根据《生活饮用水标准检验方法》GB5750.12-2006制订本方法作业指导书。2.适用范围适用于水质中菌落总数、大肠菌群的测定。3.职责检测人员严格按照本指导书要求开展检测工作。4.检测依据标准及检测方法《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006《生活饮用水标准检验方法》GB5750.12-20065.标准值表1二次供水菌落总数、大肠菌群序号指标限值01菌落总数100CFU/mL02大肠菌群不得检出6.检验仪器及设备高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、冰箱、显微镜、PH试纸。7.试剂和材料营养琼脂培养基，三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液，伊红美兰琼脂，革兰氏染色液。8.检测程序8.1菌落总数：取采集的样品1mL于灭菌平皿内，倾入已融化冷却至45℃的营养琼脂15mL，同时做一个平行样和一个空白对照平皿，并立即摇匀。冷却后，翻转平板，置于35℃～37℃恒温箱中，培养48h。计数每个平板上的菌落数。8.2大肠菌群：在5支装有10mL双料乳糖蛋白胨培养液的试管各加水样10mL；在5支装有10mL单料乳糖蛋白胨的试管各加水样1mL，在5支装有10mL单料乳糖蛋白胨的试管各加稀释后的水样（1:10）1mL。轻摇试管，是液体充分混匀，置35℃～37℃培养箱中24h。观察是否产酸产气，若有，需进一步做证实试验。8.3取一环阳性管中的溶液接种到伊红美兰琼脂平板上，置35℃～37℃培养箱中18h～24h，观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。8.4挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36℃±1℃培养箱中，培养24h。8.5凡乳糖发酵管最终产酸、产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，为大肠菌群阳性。记下证实试验的阳性管数，查总大肠菌群（MPN）检索表得出100mL水样中总大肠菌群的MPN值。9.计算菌落总数计算见式（1）：a=b×n………………………………(1)式中：a—表示菌落总数，cfu/mLb—平均菌落数n—表示稀释倍数10.表格样式附录A水质中菌落总数、大肠菌群检测原始记录样式附录A：水质中菌落总数、大肠菌群检测原始记录样式二次供水检测原始记录受理编号：中坚（）检[20]号检测项目：细菌总数、大肠菌群检验日期：年月日依据：《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750.12-2006一、实验条件：1、实验室温度：℃；实验室湿度：%；2、仪器设备：恒温培养箱(仪字第号)；生物显微镜(仪字第号)3、培养基：厂家：批号：厂家：批号：厂家：批号：二、结果：1、细菌总数：放置时间：取出时间：检验者：复核者：日期：年月日日期：年月日样品编号菌落数(cfu/皿)(℃h)结果(cfu/mL)平皿1平皿22、总大肠菌群：放置时间：取出时间：样品编号培养温度及时间接种样品量结果(MPN值/100mL)10mL（原样）×5管1.0mL（原样）×5管1mL（1:10）×5管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管检验者：复核者：日期：年月日日期：年月日