柴胡检验标准操作规程

共8页第1页柴胡检验标准操作规程文件编码：S0P-QC-ZJ-3013-02题目柴胡检验标准操作规程制定部门：质量检验中心颁发部门：质量管理部分发部门：质量管理部、质量检验中心制定人：日期:年月日审核人：日期:年月日批准人：日期：年月日生效日期:年月日变更历史：1.2003年3月制定；2.2005年7月执行《中国药典》2005年版第一次修订；3.2010年10月执行《中国药典》2010年版第二次修订。目的：建立柴胡检验标准操作规程。规范检验操作，确保柴胡质量。适用范围：适用于柴胡的检验。责任者：质量管理部经理、质检中心主任、质量检验员。内容：1品名：柴胡2取样：按药材和饮片取样标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6065）取样3检验依据：柴胡内控质量标准（STP-QS-ZJ-3124）4性状4.1北柴胡：取本品，在明亮处用肉眼观察，呈圆柱形或长圆锥形，尺量，长6~15cm，直径0.3~0.8cm，根头膨大，顶端残留3~15个茎基或短纤维状叶基，下部分枝。表面黑褐色或浅棕色，具体纵皱纹、支根痕及皮孔。质硬而韧，不易折断，断面显纤维性，皮部浅棕色，木部黄白色。气微香，味微苦。共8页第2页4.2南柴胡：取本品，在明亮处用肉眼观察，根较细，圆锥形，顶端有多数细毛状枯叶纤维，下部多不分枝或稍分枝。表面红棕色或显黑棕色，靠近根头处多具细密环纹。质稍软，易折断，断面略平坦，不显纤维性。具败油气。5鉴别5.1仪器：超声波清洗机、电子天平、薄层喷雾气压泵、三用紫外分析仪5.2试剂与试液5.2.1试剂：甲醇、乙酸乙酯、乙醇。5.2.2试液2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液：量取28.8ml98%浓硫酸，缓缓加入77ml水中，边加边搅拌，放冷后即为40%硫酸溶液；再将称取的2g对二氨基苯甲醛加入，搅拌使溶解成100ml即得。5.3对照品与对照药材：柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷d对照品、柴胡对照药材5.4操作方法5.4.1取本品粉末0.5g，置50ml具塞锥形瓶中加甲醇20ml，密塞，超声处理10分钟，滤过，滤液置蒸发皿中浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取北柴胡对照药材0.5g，置50ml具塞锥形瓶中加甲醇20ml，密塞，超声处理10分钟，滤过，滤液置蒸发皿中浓缩至约5ml，同法制成对照药材溶液。再取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。按《薄层色谱法标准操作规程》（SOP-QC-ZJ-6039）试验，吸取上述三种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，置已升温至60℃电热恒温烘箱中，加热至斑点显色清共8页第3页晰，分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。6检查6.1水分：按水分测定法标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6020）烘干法测定，不得过10.0%。6.1.1仪器：鼓风电热恒温干燥箱、电子天平。6.1.2操作方法：接通电子天平电源，启动电子天平，使电子天平预热30分钟。取洁净的称量瓶，置烘箱内100～105℃干燥5小时，取出，置干燥器中室温放置30分钟，精密称定重量，再置烘箱内100～105℃干燥1小时，取出置干燥器中室温放置30分钟，精密称定重量，直至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下为止。供试品适量迅速粉碎为最粗粉，取约2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm。精密称定，记录数据；打开瓶盖置热风循环烘箱中，在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定；再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，并记录数据，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算出供试品中含水量(%)。%100--%称量瓶称量瓶）（干燥前样品称量瓶）（干燥后样品称量瓶）（干燥前样品水分6.2总灰分：按灰分测定法标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6016)总灰分测定法测定，不得过8.0%。6.2.1仪器：节能电阻炉、电子天平、坩锅。6.2.2操作方法：接通电子天平电源，启动电子天平，使电子天平预热30分钟。取洁净的坩埚，置节能电阻炉内，将坩埚盖斜盖于坩埚上，经加热至600℃炽灼约1小时，停止加热，待节能电阻炉温度冷却至约300℃，取出坩埚，置干燥器内，盖好坩埚共8页第4页盖，放冷至室温，精密称定重量，再以同样条件重复操作，直至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下为止。取本品粉碎，能通过二号筛并混合均匀的粉末3～5g，置炽灼至恒重的坩埚中，在电子天平上精密称定，放入节能电阻炉内，缓缓炽热，至完全炭化呈黑色，逐渐升高温度至500～600℃，停止加热，待节能电阻炉温度冷却至约300℃，取出观察，直至完全灰化，取出坩埚，置干燥器内，盖好坩埚盖，放冷至室温，精密称定重量；再以同样条件重复操作，直至连续两次炽灼后称重的差异在0.3mg以下为止。并记录数据。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量。%100--%空坩埚坩埚）（样品空坩埚坩埚）（灰分总灰分6.3酸不溶性灰分：按灰分测定法标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6016)酸不溶性灰分测定法测定，不得过3.0%。6.3.1仪器：节能电阻炉、电子天平、坩锅6.3.2试液稀盐酸：取盐酸234ml,加水稀释至1000ml，即得。（含盐酸应为9.5%～10.5%）稀硝酸：取硝酸105ml,加水稀释至1000ml，即得。（含硝酸应为9.5%～10.5%）硝酸银试液：取用硝酸银滴定液（0.1mol/L）。6.3.3取上项所得灰分，在坩埚中加入稀盐酸10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，向坩埚内加入热水，洗涤坩埚内的残渣，洗液用上述无灰滤纸滤过，如此反复，直至坩埚内无可见残渣。取最后一次洗液1ml，置小试管中，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，若不生成白色凝乳状沉淀，滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，放入节能电阻炉内，缓缓炽热，至完全炭化呈黑色，逐渐升高温度至500～600℃，停止加热，待节能电阻炉温度冷却至约300℃，取出观察，直至完全灰化，取出坩埚，置干燥器内，盖好坩埚盖，放冷至室温，精密称定重量，再以同样条件重复操作，直至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下为止。并记录数据。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（%）。共8页第5页%100-%坩埚重坩埚重）（炽灼前样品坩埚重坩埚重）（残渣酸不溶性灰分6.4浸出物：按浸出物测定法标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6015）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于11.0%。6.4.1仪器：鼓风电热恒温干燥箱、电子天平、电子恒温水浴锅。6.4.2试剂：乙醇6.4.3操作方法：接通电子天平电源，启动电子天平，使电子天平预热30分钟。取洁净的蒸发皿，置烘箱内100～105℃干燥1小时，取出，置干燥器中室温放置30分钟，精密称定重量，再置烘箱内100～105℃干燥1小时，取出置干燥器中室温放置30分钟，精密称定重量，直至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下为止。取样品适量粉碎能通过二号筛并混合均匀的供试品约4g，置250ml的磨口锥形瓶中，精密加乙醇100ml，密塞，称定重量，静置1小时后连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于100～105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。并记录数据。除另有规定外，以干燥品计算供试品浸出物的含量。%10025%1100])[%）水分（供试品重量蒸发皿蒸发皿（浸出物浸出物6.5二氧化硫残留量：按二氧化硫残留量测定法标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6062）测定，不得过150mg/kg。6.5.1仪器：SO2测定装置（1000ml）、电热套、10ml棕色滴定管、250ml锥形瓶、磁力搅拌器、100ml量筒。6.5.2试液共8页第6页6mol/L盐酸溶液：取盐酸54ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。淀粉指示液：本液应临用新制。取可溶性淀粉0.5g，加水5ml搅匀后，缓慢倾入100ml沸水中，随加随搅拌继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。0.01mol/L碘滴定液：6.5.3仪器装置：A为1000ml两颈圆底烧瓶；B为竖式回流冷凝管；C为（带刻度)分液漏斗；D为连接氮气流入口；E为二氧化硫气体导出口；6.5.4操作方法：取药材细粉约10g，精密称定W，置两颈圆底烧瓶中，加水300～400ml（应加水至没过氮气导气管的下端），取6mol/L盐酸溶液10ml加入带刻度分液漏斗中。锥形瓶里加入水125ml和淀粉指示液1ml作为吸收液，置于磁力搅拌器上不断搅拌。打开冷凝管，将冷凝管的上端口处连接一橡胶导气管置于锥形瓶内液面以下。连接导气管入口。开通氮气，调节适宜的气体流量（氮气流速约为0.2L/min,至蒸馏瓶内有气泡均匀排出）。打开带刻度分液漏斗的活塞，使盐酸溶液10ml流入烧瓶中。给两颈烧瓶内的溶液加热至沸，并保持微沸约3分钟后开始用碘滴定液（0.01mol/L）滴定，吸收液置于磁力搅拌器上不断搅拌，至吸收液显蓝色或蓝紫色持续30秒钟不完全消褪，记录样品消耗滴定液体积A；并用空白试验校正，记录消耗滴定液体积B。每1ml的碘滴定液（0.01mol/L）相当于0.6406mg的SO2。C为碘滴定液浓度的校正因子共8页第7页10006406.0100)(mg/kgWCBA量供试品中二氧化硫残留7含量测定：北柴胡按高效液相色谱法标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6041）测定。7.1仪器：高效液相色谱仪、电子天平、超声波清洗机。7.2试剂与试液：7.2.1试剂：乙腈、甲醇7.2.2试液5%浓氨试液：取浓氨溶液5ml，加水使成1000ml，即得。7.3对照品：柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品7.4操作方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈为流动相Α，以水为流动相Β，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为210nm。理论板数按柴胡皂苷a峰计算应不低于10000。时间(分钟)流动相A(%)流动相B0~5025→909050~559010对照品溶液的制备取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷d对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a0.4mg（C对a）、柴胡皂苷d0.5mg（C对d）的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25ml，密塞，30℃水温超声处理（功率200W，频率40kHZ）30分钟，滤过，用甲醇20ml分两次洗涤容器及药渣，洗液与滤共8页第8页液合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液20µl与供试品溶液10~20µl，注入液相色谱仪，测定测定，对照品溶液峰面积A对a、A对d，供试品溶液峰面积A样a、A样d。本品按干燥品计算含依下式计算，即得：%10011105%3水分）（）（总量苷按干燥品计，含柴胡皂样对对样对对样WCAACaAAdadddaa本品按干燥品计算，含柴胡皂苷a（C42H68O13）和柴胡皂苷（C42H68O13）的总量不得少于0.33%。