临床检验方法确认与性能验证解读

临床检验方法确认与性能验证贵阳市第二人民医院检验科张正君临床检验方法确认与性能验证概念目的具体操作其他一.概念确认（validation）验证（verification）确认（validation）在实验室当前条件下，证实所得检验结果是否可以满足临床需要，能为患者提供可靠的的临床结果过程。本质上实际就是误差评价（errorassessment），如果误差太大将会造成结果不正确的解释！确认的手段应是是实际的或是模拟的！验证（verification）实验室按厂商说明的方法能否得到预期结果验证的手段可以是下述活动，如：变换方法进行计算；将新设计规范与已证实的类似设计规范进行比较；进行试验和演示；发布文件前的评审。ISO15189的概念确认（validation）通过提供客观证据对特定的预期用途或应用要求已得到满足的认定。注：①“已确认”一词用于表示相应的状态。②确认所使用的条件可以是实际的或是模拟的。验证（verification）通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定注：①“已验证”一词用于表示相应的状态。②认定可包括下述活动，如：变换方法进行计算；将新设计规范与已证实的类似设计规范进行比较；进行试验和演示；发布文件前的评审。二.目的结果互认医院实验室管理办法CLIA’88CNAS-CL02三.具体操作（一）统计学基础知识（二）检验方法分类（三）方法的选择（四）常用物质（五）一些基本术语（六）质量规范（七）具体操作（一）统计学基础知识概述临床检验结果质量检验数据的分类统计方法的分类随机变量及其分布正态分布抽样分布大数定律和中心极限定律平均数与标准差均数的抽样误差与t分布两均数差别的统计学意义检验方差分析直线回归与相关观察值一致性（二）检验方法分类决定性方法（definitivemethod）：经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法；参考方法（referencemethod）：经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法；常规方法（routinemethod）：可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。（三）方法的选择足够特异、灵敏、精密度好校准可溯源有实验证据（杂志、自）与其他检验项目相比有点何在（四）常用物质1.标准物质/参考物质（referencematerial）2.校准品（calibrator）3.质控物/控制品（controlmaterial）1.标准物质概念：又称参考物质（referencematerial），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质，标准物质的定值结果一般表示为：标准值±总不确定度。“标准物质证书“是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质（certifiedreferencematerial,CRM），其特性值由建立了溯源性的程序确定，可溯源至准确复现该特性值的计量单位，且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。作用：校准仪器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值分类：一级标准物质（primaryreferencematerial）：稳定、均一，采用高度准确、可靠的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。在我国，一级标准物质是测量准确度达到国内最高水平的有证标准物质，由国家技术监督局批准、颁布并授权生产。如：人血清无机成分分析标准物质（GBW09135）和血清胆固醇标准物质（GBW09138）。二级标准物质（secondaryreferencematerial）：用一级标准物质校准，参考方法定值。如：红细胞微粒标准物质—GBW（E）090001、胆红素标准物质—GBW（E）090002、氰化高铁血红蛋白溶液标准物质—GBW（E）090004和纯化血红蛋白标准物质—GBW（E）090011。2.校准品3.质控品概念：分类：定值质控品非定值质控品检测系统配套的控制品正确度控制品质控品概念具有与检测过程相适应的特性，其成份与检测样本的基质相同或相似。应使用充分均一和稳定的质控物，其瓶间变异必须小于监测系统预期的变异，其常规检测应有助于确认报告范围。定值质控品定值质控品但是公司的定值是从保护自己利益出发的。它标示的预期范围只是想告诉用户，只要你的测定值在范围，说明它的控制品是好的。因此不要将预期范围认为是控制的允许范围！！！不定值控制品质量和定值的一样，只是厂商没有邀请实验室为控制品定值，在说明书上除定值内容外，其余都有，还告诉了用户高值或低值，当然更便宜！！但无论定值或不定值，用户在使用时，须使用自己的检测系统建立自己的均值和标准差！！只是定值控制品有一个预期的范围便于用户对照！！但仅为对照，若两者相似不能说明用户结果准确，不相似也不说明结果有问题。国内限于条件国产控制品很少，由经销商推出的国外控制品真正属于定值的也不多，定值控制品因为价格贵，用户不接受，但用户又要求是定值的控制品，因此不少经销商要求生产厂商提供一个公司自己检测的值，附在不定值控制品上，变成用户可接受的“定值”控制品！！！！至于定值所用的检测系统，方法学原理、仪器、试剂盒来源、操作程序都无可奉告！！！此时如果用户的靶值和“所为定值”相差甚远，我们应该可以理解，并不是控制品质量有问题造成的！！！检测系统配套的控制品为了使用户及时了解检测系统的质量状况，大的诊断产品厂商（国际上六大），除提供仪器、试剂、校准品外，还提供检测系统专用的控制品，必要时还为使用相同检测系统的用户提供相同批号的控制品，同时组织质量服务！！此类控制品专用性强。如罗氏的正常与病理控制品Precinorm/Precipath，它的控制品定值完全按照校准品定值程序获得！！！而且定值一旦发现中间环节出错，还在网上为用户提供更新！！正确度控制品为了随时保证检测系统对病人样本的检测结果具有溯源性，此时引入了正确度控制品，ISO17511标准定义正确度控制品为：用于评估检测系统检测偏倚的参考物质。而且有专门的定值过程，该定制过程比校准品定值还要严格，与定值控制品的定值属于相同检测系统测定值的简单统计处理一定要分开！！（五）一些基本术语准确度正确度精密度溯源性a.准确度与误差准确度（accuracy）的完整表达应是检测准确度（accuracyofmeasurement）：检测结果与被测量真值或约定真值（可接受参照值）之间的一致程度（GB/T3358.1、GB/T6379）.可接受参照值：用来做比较的经协商同意的值，它可以是理论值（真值），赋值，公认值或由程序确定的值。准确度不能直接得出，只能用偏离（deviation）也就是误差从反面衡量误差：测量值与真值之间的偏离，包括RE和SE。误差是用来度量不准确度的。这样对于检测结果只做一次时，结果的偏离即不准确度=分析过程的不正确度+分析过程的不精密度也即不准确度=总误差=分析过程的随机误差+分析过程的系统误差b.正确度与偏倚正确度（trunees）即真实度，完整表达检测真实度：大量检测结果得到的均值与可接受参考值之间的一致程度（GB/T6379），用偏倚（bias）来表示,即测试结果的期望与真值（可接受参考值）之差。（GB/T6379）系统误差：在可重复的条件下，大量检测结果的均值与真值之差偏倚表示的是一种系统误差。c.精密度和标准差精密度（precision），完整表达检测精密度：在规定条件下独立测试结果之间一致程度（GB/T6379）。用标准差或变异系数来表示。分为两种，“重复性（repeatability）”相同条件下执行连续测量结果之间的一致性程度，又称为序列内精密度和批内精密度。“再现性（reproducibility）”在改变测量条件下执行测量结果之间的一致性程度。随机误差（randomerror）：在可重复的条件下，对相同的被测量无数次检测结果的均值，与检测结果的差异。用标准差和变异系数度量。d.总误差总误差（totalerror,TE）:能影响分析准确度的确定误差的组合【CLSIEP15-A2】,即偏倚和不精密度的和。基于科学原理的理论或确定值基于一些国家或组织的实验工作的指定值或认证值基于科学或工程组织赞助下合作实验工作中的同意值或认证值。以上三点不能获得时，则用可获得的期望，即规定测量总体的均值。溯源性通过一条连续的比较连，使FPS检测结果与国际或国家的参考系统（在参考实验室，使用参考方法，参考品得到的结果）联系起来的特性（六）质量规范质量规范简史1963年加拿大临床化学家DavidTonks建议用参考区间的宽度1/4表示允许误差。1968年临床化学家RoyBarnett博士提出标准差表示允许误差。1976年CAP举办的分析目标讨论会议，Westgard提出了以“允许总误差”作为规定质量的最佳形式，一直沿用至今。1999年斯德哥尔摩协商大会汇集了临床检验领域的许多专家协商一致的“建立全球分析质量规范”，其结果提出了“质量规范（qualityspecifications）”的层次结构：1.评价在特定情况下分析性能对临床结果的影响2.评价在一般情况下分析性能对临床决策的影响3.基于生物学变异的规范4.基于临床医生观点的分析5.已发表专业推荐来自国家和国际的专家组来自地方组织或某个国家6.基于法规和EQA的质量规范法规机构能力验证（PT）和（或）室间质评计划（EQAS）组织者7.基于当前分析技术的目标有时间质量质量评价或能力验证计划数据证实由当前发表方法学性能文章3.基于生物学变异的规范。用法CVA1/2CVIBA1/4（CVI2+CVG2）1/2CV仪器之间1/3CVITE1.65CVA+BA(α0.05)TE2.33CVA+BA(α0.01)不精密度CV：用于室内质控精密度分析用于方法学性能验证：1.与客观比较2.与厂家比较偏差Bias：用于方法学比较，即考核真实度。允许总误差Tea：用于EQA5.已发表专业推荐6.基于法规和EQA的质量规范（七）具体操作内容常用的方案具体方案方法确认内容：总是包括可报告范围、精密度、准确度和参考区间。某些研究还应包括检出限（或灵敏度）、特异度、干扰和回收以及校准品确认。CLIA规则规定对不同复杂程度分类的方法需要确认不同的特征。对不太复杂的方法，要求很少的研究。对于自建检测系统或实验室修改的方法需要更多的实验。方法验证除应验证仪器的安装和检验程序的操作外对于定量方法应验证：测量精密度：包括重复性和再现性、患者结果与以前方法或参考程序之间的一致性、在整个分析测量范围内被测量的回收、高浓度的携带污染、干扰或非特异性（溶血、脂血、黄疸、容器添加剂、药物）、参考区间。对于定性方法应验证阳性和阴性及临界值上和下标本的再现性和重复性、患者结果的一致性、携带污染、干扰或非特异性。常用的方案1.相关机构：NCCLA/CLSI、CLIA2.具体方案定量实验室方法的初步评价:CLSIEP10定性测试性能评估：CLSIEP12基质效应的评价：CLSIEP14精密度和正确度性能的用户验证：CLSIEP15-A使用ROC曲线实验室试验临床准确度评价：CLSIGP10总误差估计:CLSIEP21-A：临床实验方法总分析误差的估计精密度评价:EP5-A，临床化学设备精密性能的评价准确度评价：方法比较试验EP9-A，使用病人样本进行方法比较和偏倚估计回收实验干扰试验EP7-P，临床化学干扰试验总误差估计:CLSIEP21-A：临床实验方法总分析误差的估计患者结果可报告范围（即线性范围）的验证：EP6-A：定量分析方法线性的评价临床可报告范围的确立参考范围：NCCLS/CLSIC28-A：临床实验室如何定义和确定参照区间交叉污染:NCCLS/CLSIEP10-A分析灵敏度:CLSIEP17-A：检出限和定量下限确定方案分析特异性:NCCLA/CL