火炭母药材质量标准起草研究实验工作实施方案

火炭母药材质量标准起草研究实验工作实施方案摘要：火炭母为蓼科植物的干燥全草，其功效是清热利湿，凉血解毒。火炭母提取物的研究发现，真正起主要作用的是黄酮类化合物，火炭母提取物中分离出来了黄酮苷，并对其进行含量测定，结果很好，对火炭母提取物的生产控制有可靠依据。关键词：火炭母黄酮苷质量控制标准天然药物来自植物、动物、矿物和微生物。其中以植物来源为主，占了很大的比例。火炭母中黄酮类化合物主要是：黄酮苷、芹菜素、异鼠李素、槲皮素、木犀草素等。一、概述：浸膏剂指药材用适宜的溶剂浸出（或煎出）有效成份，浓缩，调整浓度至规定标准而制成的粉状或膏状制剂。蓼科植物火炭母为多年生草本，全株均可入药。全草含蒽醌、黄酮苷。为了更好地控制该产品质量，防止伪品、混淆品流人生产中。针对其标准问题进行质量标准研究工作。二、情况分析1.火炭母火炭母是蓼科(Polygonaceae)蓼属(Polygonum)植物火炭母草(Polyg-onumchinenseLinn．)的药用全草或根，别名火炭毛、乌炭子、山荞毒草、赤地利、老鼠蔗等。广泛分布于我国南部的福建、广东、广西和贵州等地区。1.1植物形态茎近直立或蜿蜒状，高达1m，茎圆柱形，略具棱沟，光滑或被疏毛或腺毛，斜卧地面或依附而生，下部质坚实，多分枝，匍地者节处生根，嫩枝紫红色。叶互生，卵状长椭圆形或卵状三角形，长7~12cm，宽2.5~6cm；顶端渐尖，基部截形、矩圆形或近心形，全缘或具细圆齿。上表面鲜绿色或有V形黑纹；下表面主脉有毛；具柄。基部两侧常具2耳状裂片；托叶膜质，鞘状，顶部斜截形，无毛。秋季开花，头状花序，再组成圆锥或伞房花序，腋生，主轴和分枝均被腺毛；无总苞，苞片膜质，无毛，通常急尖；小花白色、淡红色或紫色；花被5深裂；雄蕊8，子房上位，花柱3裂。瘦果初为三角形，成熟时球形，黑色，具三棱，全部包藏于多汁、透明、白色或蓝色的宿存花被内，花期9月。1.2药材干燥的茎甚长，棕色至棕紫色，有纵皱纹，节间颇长，节部膨大；质脆易折断，髓部疏松。叶片皱缩，枯黄色或黄绿色，主脉两侧有紫黑色斑块，隐约可见；托叶鞘状，浅黄棕色，常破碎而不完整。气微，味淡微苦。以干燥、无杂质者为佳。1.3化学成分全草含蒽醌、黄酮苷；根和根茎含多种氨基酸，谷氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、蛋氨酸，碳水化合物有L-肌醇、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、麦芽糖以及L-鼠李糖，棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、非皂化部分含β-谷甾醇。叶中含β-谷甾醇、山奈酚（kaempferol）、槲皮素（quercetin）、鞣花酸、3-O-甲基鞣花酸、逆没食子酸（ellagicacid）、没食子酸（gallicacid）、山柰酚-7-葡萄糖苷（kaempferol-7-O-glucosi-de）、山柰酚-3-葡萄糖醛酸苷（kaempferol-3-O-glucuroside）、3-O-甲基并没食子酸（3-O-methylellagicacid）。丁香酸、芹菜素、3，3’-二甲基鞣花酸、原儿茶酸、异鼠李素、咖啡酸、木犀草素、没食子酸甲酯、广寄生苷和3，4，8，9，10-pentahydroxy–dibenzo[b，d]pyran-6-one【1】。1.4功能主治清热解毒，利湿消滞，凉血止痒，明目退翳。用于痢疾，肠炎，消化不良，肝炎，感冒，扁桃体炎，咽喉炎，白喉，百日咳，角膜云翳，霉菌性阴道炎，白带，乳腺炎，疖肿，小儿脓疱疮，湿疹，毒蛇咬伤。临床主要用于治疗各种炎症、跌打损伤和感冒等【2】。2.化学成分2.1黄酮类化合物黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。2.2现代研究情况黄酮类化合物的药理活性：心血管系统活性，抗菌及抗病毒活性，抗肿瘤活性，抗氧化自由基活性，抗炎、镇痛活性，保肝活性，此外，大量研究表明降压、降血脂、抗衰老、提高机体免疫力、泻下、镇咳、祛痰、解痉及抗变态等药理活性。黄酮，黄酮醇和黄烷酮的检测波长一般在240-280nm，及330-360nm，异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇和二氢查耳酮的检测波长一般在240-280nm。其中芹菜素的最大吸收波长为349nm；异鼠李素与槲皮素的最大吸收波长360nm；木犀草素的最大吸收波长为353nm。据报道，芹菜素通过降低肿瘤细胞侵袭能力和抑制肿瘤血管形成从而发挥抑制肿瘤生长、侵入和转移的作用。此外，芹菜素还具有抗炎症、扩血管、抗菌、抗病毒以及抗氧化作用等多方面的生物学活性[3]；异鼠李素在体内具有明显的抗肿瘤作用，其机理可能与下调PCNA和bcl一2的表达，上调caspase一3、bax的表达有关，其抑制肿瘤细胞的生长增殖，诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的主要机制之一[4]；槲皮素具有去痰止咳平喘、抗炎、扩血管、抗氧化、抗肿瘤等广泛的药理作用[5]；木犀草素具有高效的抗菌活性阎[6]。另外，它还是抗肿瘤的启动因子，对多种实体瘤、腹水癌和白血病细胞有显著抑制作用。火炭母含有这些成分，与其药理活性和临床应用相关。3.产品形式火炭母水醇提取物多制成浸膏剂，除另有规定外，多用渗漉法制备，其制备工艺程为：浸渍→渗漉→浓缩→调整含量→成品。渗漉时应先收集中药量85%的初漉液，另器保存；续漉液低温浓缩城稠膏状与初漉液合并，搅匀。若有效成分已明确者，需作含量测定及乙醇含量测定；有效成分不明确者只做含乙醇量测定，然后按测定结果将浸出浓缩液加适量溶剂稀释，或低温浓缩使其符合规定标准，静置24小时以上，滤过，即得。浸膏剂按其干燥程度可分为稠浸膏与干浸膏两种。稠浸膏是浸出液经低温浓缩至稠膏状的，含水量约为15～20%的制成品。干浸膏是浸出液浓缩成稠膏后蒸干，测定含量后，用淀粉、乳糖等稀释至规定的标准，制成干燥粉状的制品，其含水量约为5％。浸膏剂的优点是有效成分含量高，体积小，不含浸出溶媒，可久贮，有效成分较流浸膏稳定。但其缺点是易吸潮或失水后硬化。浸膏剂除少数直接用于患者外，一般多作为制备其他制剂的原料，如片剂、散剂、胶囊剂、冲剂、丸剂、颗粒剂等的原料。4.质量标准控制项目1、性状2、定量控制3、检查项目（包括外观、水分、浸出物、灰分）三、质量标准项目的研究方案1.性状与鉴定1.1火炭母该品呈藤茎状伸延，长40~150cm。茎呈扁圆柱形，直径3~6mm，棕色至紫棕色，略具纵沟，嫩枝紫红色，节处有不定根，节间较长，节部膨大，紫色；质脆。老茎质坚实，易折断，嫩枝断面髓部明显，黄白色而疏松。叶互生，多皱缩或破碎，完整叶展平后呈卵状长椭圆形或卵形，长5~10cm，宽2.5~6cm；顶端渐尖，基部截形、矩圆形或近心形，全缘或具细圆齿。两面近无毛，桔黄色或黄绿色，主脉两面隐约可见，有紫黑色或灰白色“V“形斑块纹；具柄。托叶膜质鞘状，抱茎，浅黄棕色。气微，味酸、微涩。1.2茎横切面表皮为1列细胞，略切向延长，有的含红棕色物，外被较薄的皱缩角质层。皮层外侧有的细胞角质增厚。中柱鞘纤维1-5列，断续或连续成波状环层。木质部导管单个排列成行。髓部宽阔，空隙处含棕色物。薄壁细胞含棕色物、淀粉粒或草酸钙簇晶。草酸钙簇晶直径可达50um。粉末黄绿色。叶表皮细胞表面观类多角形，有的有角质样纹理。茎表皮细胞类长方形，有的也显角质样纹理。非腺毛多细胞呈覆瓦状排列，表面有角质样纹理，内含棕色物；腺毛头部单细胞或多细胞，腺柄多为单细胞。含草酸钙簇晶众多，直径达80um，棱角多尖锐。1.3薄层色谱法鉴别取该品粉末2g，加50%甲醇30ml，盐酸1ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10ml，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂含0.5%氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点2.定量控制总黄酮含量测定方法[7]2.1.对照品溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品0．0187g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇定容、摇匀，配成浓度为0．187mg／ml的芦丁对照品溶液。2.2样品浓配液的配制精密称取1号浸膏0．1260g，加甲醇45ml；回流提取1h，放冷、滤纸过滤到5Oml量瓶中，用少量甲醇洗涤残渣，洗涤液过滤并入量瓶中，加甲醇定容，摇匀，作为样品浓配液。2.3测定波长的确定取芦丁对照品溶液4．0ml，置25ml量瓶中，加水6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液l0ml，加水定容、摇匀，放置15min后在200～700nm处扫描记录吸收图谱。确定最大吸收波长。2.4线性范围考察精密吸取芦丁对照品溶液1，2，3，4，5，6ml，分别置25ml容量瓶中，按“2.3”项下显色后，以相应试剂为空白，按照分光光度法在最大吸收波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程。2.5精密度考察精密量取对照品溶液6份，每份4ml置25ml量瓶中，按“2.3”项下方法操作，从“加水6ml”起制备样品并测定吸收度。2.6稳定性考察精密量取样品浓配液5ml，置25ml量瓶中，按“2.3”项下方法操作，从“加水6ml”起制备样品后，分别于0，10，15，20，25，30，35，40min时测定吸收度。2.7重复性考察平行精密称取1号浸膏6份，每份约0．12g，按“2.2”项下方法配制样品浓配液，精密量样品浓配液5ml置25ml量瓶中，按“2.3”项下方法操作，从“加水6ml”起制备样品并测定吸收度。2.8加样回收率实验精密称取精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品0.0189g，按“2.1”法配制成浓度为0．189mg／ml的对照品溶液。取重复性实验制备的样品浓配液，各精密量取2．0ml，置25ml量瓶中，精密加入上述芦丁对照品溶液2.0ml，按“2.3”项下方法操作，从“加水6ml”起制备样品并测定吸收度，推算总黄酮含量。2.910批样品总黄酮含量测定取10批样品约0.12g，精密称定后按“2.7”项下方法测定吸收度，推算各样品总黄酮含量测定结果。3.检查项目3.1外观浸膏棕褐色稠膏，味酸、微涩，无吸潮或失水硬化。3.2浸出物检查干浸膏浸出物测定将浸膏在100％干燥到恒重后，按《中国药典)2005版I部附录XA浸出物测定法的热浸法操作，80％乙醇为溶剂，醇溶性浸出物限度，定为不得少于5.0%。3.3灰分测定将浸膏在100％干燥到恒重后，按灰分测定法操作，总灰分限度，定为不得过8.0%。3.4注意事项①除另有规定外，浸膏剂每1g相当于原药材2～5g。②除另有规定外，浸膏剂用煎煮法或渗漉法制备。全部煎煮液或渗漉液应低温浓缩至稠膏状，加稀释剂或继续浓缩至规定的量。③浸膏剂应置遮光容器内密封贮藏。四、总结中药全浸膏制剂是现代中药制剂的主要形式，其中水醇提取法师最基本的方法，水作溶媒经提取获得中药提取液，再用不同浓度的乙醇沉淀，保留既溶于水又溶于醇的生物碱盐、苷类、有机酸等，经醇处理后的中药浸膏，特别是通过高浓度醇处理后，去除了许多水溶性成份，如粘液质，树胶、果胶、鞣质、多糖、蛋白质、氨基酸、无机盐类等亲水性成分，可有效地防止吸湿。药品质量标准是上市药品质量控制的主要依据，是保证药品质量可控的技术规范，制定质量标准要坚持质量第一，充分体现“安全有效、技术先进、针对性强、规范合理”的原则。参考文献[1]谢贤强,吴萍,林立东,等.火炭母化学成分的研究[J].热带亚热带植物学报,2