灵芝药材、饮片检验操作规程(30)

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资源描述

第1页共6页灵芝药材及饮片检验操作规程1、目的:规定了灵芝药材及饮片的检测方法和操作要求。2、范围:适用于灵芝药材及饮片的质量检测。3、职责:3.1、QC质检员严格执行本操作。3.2、QC负责人监督执行。4、内容:4.1、物料编码:Y30、YP304.2、引用标准:《中华人民共和国药典》(2010年版第三增补本)及《灵芝绞股蓝口服液标准转正申报资料》(灵芝药材质量标准)。4.3、标准:指标名称药材标准饮片标准性状应符合规定不规则厚片鉴别鉴别(1)、(2)、(3)应符合规定----检查杂质——不得过3.0%水分不得过17.0%不得过13.0%总灰分不得过3.2%----二氧化硫残留量不得过150mg/kg----浸出物不得少于3.0%----含量多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计,不得少于0.90%----三萜及甾醇以齐墩果酸(C30H48O3)计,不得少于0.50%----腺苷含腺苷(C10H13N5O4)不得少于0.01%----4.4、操作步骤:4.4.1外观:洁净、无霉变、无污染。4.4.2性状:符合《中华人民共和国药典》(2010年版第三增补本64页)灵芝“性状”项下规定。4.4.3鉴别:4.4.3.1照显微鉴别操作规程《SOP•JC•030•04-00》检查,本品粉末浅棕色、棕褐色至紫褐色。菌丝散在或粘结成团,无色或淡棕色,细长,稍弯曲,有分枝,直径2.5~6.5μm。孢子褐色,卵形,顶端平截,外壁无色,内壁有疣状突起,长8~12μm,宽5~8μm。4.4.3.2取本品粉末2g,加乙醇30ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g,同法制成对照药材溶液。照《SOP文件名称灵芝药材及饮片检验操作规程版本号04文件编码SOP•QC•030•04-00修订号00第2页共6页•JC•013•04-00》薄层色谱法标准操作规程试验,吸取上述两种溶液各4ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。4.4.3.3取本品粉末1g,加水50ml,加热回流1小时,趁热滤过,滤液置蒸发皿中,用少量水分次洗涤容器,合并洗液并入蒸发皿中,置水浴上蒸干,残渣用水5ml溶解,置50ml离心管中,缓缓加入乙醇25ml,不断搅拌,静置1小时,离心(转速为每分钟4000转),取沉淀物,用乙醇10ml洗涤,离心,取沉淀物,烘干,放冷,加4mol/L三氟乙酸溶液2ml,置10ml安瓿瓶或顶空瓶中,封口,混匀,在120℃水解3小时,放冷,水解液转移至50ml烧瓶中,用2ml水洗涤容器,洗涤液并入烧瓶中,60℃减压蒸干,用70%乙醇2ml溶解,置离心管中,离心,取上清液作为供试品溶液。另取半乳糖对照品、葡萄糖对照品、甘露糖对照品和木糖对照品适量,精密称定,加70%乙醇制成每1ml各含0.1mg的混合溶液,作为对照品溶液。照《SOP•JC•013•04-00》薄层色谱法标准操作规程试验,吸取上述两种溶液各3ul,分别点于同一高效硅胶G薄层板上,以正丁醇-丙酮-水(5:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以对氨基苯甲酸溶液(取4-氨基苯甲酸0.5g,溶于冰醋酸9ml中,加水10ml和85%磷酸溶液0.5ml,混匀),在105℃加热约10分钟,在紫外光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点。其中最强荧光斑点为葡萄糖,甘露糖和半乳糖荧光斑点强度相近,位于葡萄糖斑点上、下两侧,木糖斑点在甘露糖上,荧光斑点强度最弱。4.4.4检查:4.4.4.1杂质:照杂质检查法操作规程《SOP•JC•026•04-00》测定,不得过3.0%。按下式计算:M1杂质(%)=———×100%M式中:M:供试品的取样量(g),M1:检出的杂质量(g)。4.4.4.2水分:照水分测定法标准操作规程(《SOP•JC•003•04-00》第一法)测定,药材水分不得过17.0%;饮片水分不得过13.0%。按下式计算:(M+M1)-M2水分(%)=————————×100%文件名称灵芝药材及饮片检验操作规程版本号04文件编码SOP•QC•030•04-00修订号00第3页共6页M式中M1:干燥前已恒重的称量瓶的重量(g);M2:干燥后称量瓶+供试品的重量(g);M:供试品的取样量(g)。4.4.4.3总灰分:照总灰分检查法操作规程《SOP•JC•027•04-00》测定,总灰分不得超过3.2%。按下式计算:M2-M1总灰分(%)=————×100%M式中M1:灼烧前已恒重的坩埚的重量(g);M2:灼烧后坩埚+残渣的重量(g);M:供试品的取样量(g)。4.4.4.4二氧化硫残留量:照《SOP•JC•021•04-00》二氧化硫残留量测定法测定,二氧化硫残留量不得过150mg/kg。计算公式:(V1-V0)×C×0.032×1000二氧化硫残留量(mg/g)=————————————WV1为供试品消耗碘滴定液的体积(ml);V0为空白消耗碘滴定液的体积(ml);C为碘滴定液的浓度(0.01mol/L);W为供试品的重量(g);0.032为每1ml碘滴定液(0.01mol/L)相当的二氧化硫的重量(g)。4.4.4.5浸出物:照浸出物测定法标准操作规程(《SOP•JC•028•04-00》水溶性浸出物测定法项下的热浸法测定,不得少于3.0%。按下式计算:(M2-M1)×N含量CX(%)=————————×100%M-[M×水分%]式中M1:蒸发皿恒重的重量(g);M2:蒸发皿+浸出物干燥后重量(g);M:取样量(g);N:稀释倍数。4.4.5含量测定:4.4.5.1多糖:照紫外-可见分光光度法标准操作规程《SOP•JC•014•04-00》测定。对照品溶液的制备:取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含0.12mg文件名称灵芝药材及饮片检验操作规程版本号04文件编码SOP•QC•030•04-00修订号00第4页共6页的溶液,即得。标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml,分别置10ml具塞试管中,各加水至2.0ml,迅速精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g,加硫酸100ml使溶解,摇匀)6ml,立即摇匀,放置15分钟后,立即置冰浴中冷却15分钟,取出,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法标准操作规程《SOP•JC•014•04-00》在625nm波长处侧定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。供试品溶液的制备:取本品粉末约2g,精密称定,置圆底烧瓶中,加水60ml,静置1小时,加热回流4小时,趁热滤过,用少量热水洗涤滤器和滤渣,将滤渣及滤纸置烧瓶中,加水60ml,加热回流3小时,趁热滤过,合并滤液,置水浴上蒸干,残渣用水5ml溶解,边搅拌边缓慢滴加乙醇75ml,摇匀,在4℃放置12小时,离心,弃去上清液,沉淀物用热水溶解并转移至50ml量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,取溶液适量,离心,精密量取上清液3ml置25ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。测定法:精密吸取供试品溶液2ml,置10ml具塞试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“迅速精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起,同法操作,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg),计算,即得。计算公式:AX×N含量CX(%)=CR————————————×100%AR×(M×水分%)×1000式中:AX为供试品峰面积;CX为供试品的浓度(%);AR为对照品的峰面积;CR为对照品的浓度(mg/ml);M:取样量(g);N:稀释倍数。本品按干燥品计算,含灵芝多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计,不得少于0.90%4.4.5.2三萜及甾醇:照紫外-可见分光光度法标准操作规程《SOP•JC•014•04-00》测定。对照品溶液的制备:取齐墩果酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,即得。标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml,分别置15ml具塞试管中,挥干,放冷,精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液(精密称取香草醛0.5g,加冰醋酸使溶解成10ml,即得)0.2ml、高氯酸0.8ml,摇匀,在70℃水浴中加文件名称灵芝药材及饮片检验操作规程版本号04文件编码SOP•QC•030•04-00修订号00第5页共6页热15分钟,立即置冰浴中冷却5分钟,取出,精密加入乙酸乙酯4ml,摇匀,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法标准操作规程《SOP•JC•014•04-00》在546nm波长处侧定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。供试品溶液的制备:取本品粉末约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加乙醇50ml,超声处理(功率140W,频率42kHZ)45分钟,滤过,滤液置100ml量瓶中,用适量乙醇,洗涤滤器和滤渣,洗液并入同一量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,即得。测定法:精密量取供试品溶液0.2ml,置15ml具塞试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“挥干”起,同法操作,测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液齐墩果酸的含量,计算,即得。本品按干燥品计算,含三萜及甾醇以齐墩果酸(C30H48O3)计,不得少于0.50%计算公式:AX×N含量CX(%)=CR——————————————×100%AR×(M-[M×水分%])×1000式中:AX为供试品峰面积;CX为供试品的浓度(%);AR为对照品的峰面积;CR为对照品的浓度(mg/ml);M:取样量(g);N:稀释倍数。4.4.5.3腺苷:照高效液相色谱法标准操作规程《SOP•JC•001•04-00》测定,色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲溶液(PH6.5)[取0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合(PH6.5)]-甲醇(91:9)为流动相;检测波长为260nm。理论板数按腺苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备:取腺苷对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液,摇匀,即得。供试品溶液的制备:取本品粉末(过二号筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇10ml,密塞,摇匀,称定重量,放置过夜,超声处理1小时,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。计算公式:AX×N含量CX(%)=CR——————————————×100%AR×(M-[M×水分%])×1000文件名称灵芝药材及饮片检验操作规程版本号04文件编码SOP•QC•030•04-00修订号00第6页共6页式中:AX为供试品峰面积;CX为供试品的浓度(%);AR为对照品的峰面积;CR为对照品的浓度(mg/ml);M:取样量(g);N:稀释倍数。结果:本品按干燥品计算,含腺苷(C10H13N5O4)不得少于0.01%。4.5、结果判断:按上述标准检测,结果相符,判为符合规定。

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