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灵芝螺旋藻片免疫调节功能的研究贾福怀1邢晓伟1*袁媛1黄雪敏1（1.宁波御坊堂生物科技有限公司，浙江宁波315012）【作者简介】贾福怀，男，高级工程师，主要从事中药产品开发方面的研究【通讯作者】邢晓伟，男，助理工程师，主要从事中药产品开发方面的研究摘要：目的观察灵芝螺旋藻片增强免疫力的功能作用。方法经口给予0.083、0.83、2.5g//kgBW剂量的灵芝螺旋藻片30d，测定迟发型变态反应、抗体生成细胞数、半数溶血值和单核—巨噬细胞廓清影响试验。结果灵芝螺旋藻片能提高小鼠的半数溶血值、小鼠抗体生成细胞数，即能增加体液免疫功能，能增强小鼠的迟发型变态反应，及增加细胞免疫功能；能提高小鼠单核—巨噬细胞的碳廓清能力，增强非特异性免疫功能。结论御坊堂牌灵芝螺旋藻片具有免疫力调节功能作用。关键词：破壁灵芝孢子粉；螺旋藻；免疫调节ExperimentalresearchofGanodermalucidumspirulinatabletsonimmunizationFunctionFuhuaiJia1XiaoweiXingYuanyuanXueminHuang(NingboYuFangTangBiologicalScienceandTechnologyCo.,Ltd.NingboZhejiang315012)【Abstract】Objective：ToobservetheimmunemodulationeffectofGanodermalucidumspirulinatabletsinmice．Methods：AfteradministrationofGanodermalucidumspirulinatabletsfor30daysconscutivelywiththedoseof0.083、0.83、2.5g/kgBW，immunologicalindexesweremeasured，whichweredelayedhypersensitivity，antibodysecretingcell，HC50andMononuclearMacrophage.Results：thenumberofantibody-producingcellsandthelevelofserumhemolysinandthephagocytosisofmacrophageinabdominalcavitywereraised．Proliferationandtransformationofspleenlymphocytesinthemicewerealsoincreased，delayedanaphylacticreactionwasintensified.Conclusion：Ganodermalucidumspirulinatabletscanstrengthentheimmunofunctionofmice．【KeyWords】Ganodermalucidumkarstspores；spirulina；immunofunction；前言：灵芝药用在我国已有2000多年的历史，具有益气血、安心神、健脾胃的功效，主虚劳，心悸，失眠，头晕[1]。古今皆以为瑞草，仙草。灵芝含有122种三萜类成分，另外还含有灵芝多糖、核苷酸类、生物碱类等活性成分[3]。灵芝孢子粉是灵芝在生长成熟期，从灵芝菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞即灵芝的种子，是灵芝的精华部分，集中了灵芝的全部有效成分，具有抗癌、增强免疫力、降血脂、降血糖、清除自由基、抗衰老等作用。螺旋藻属于蓝藻门中的螺旋藻属，含有丰富的蛋白质、多糖类、β-胡萝卜素、维生素、微量元素、矿物质。据报道，螺旋藻具有明显提高抗应激能力促进造血功能、升高白细胞及增强免疫功能作用[4]。本试验根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）规定的增强免疫力功能检验方法，使用御坊堂牌灵芝螺旋藻片通过小鼠迟发型变态反应（DHT）验证增强细胞免疫功能；通过小鼠半数溶血值（HC50）测定和抗体生成细胞数检测验证增强体液免疫功能，通过单核-巨噬细胞廓清实验验证非特异性免疫功能的强弱，来观察灵芝螺旋藻片增强免疫的功能作用。1材料与方法1.1样品：灵芝螺旋藻片，灰绿色片，破壁灵芝孢子粉、螺旋藻及少量辅料压制而成。由宁波御坊堂生物科技有限公司提供，批号20091201。1.2实验动物：吉林大学基础医学院动物实验中心提供的清洁级ICR雄性小鼠，生产许可证号：SCXK-（吉）2007003。1.3实验剂量与分组：各选健康雄性小鼠192只，体重18g—22g，分16组，每组12只，分别4组做一个实验，分别是迟发型变态反应、抗体生成细胞数、半数溶血值、单核—巨噬细胞廓清影响试验。灌胃剂量按人体推荐摄入量的1倍、10倍、30倍为0.083、0.83、2.5g//kgBW。1.4主要仪器设备电子天平（0.1g），分析天平、游标卡尺、722分光光度计。1.5实验方法1.5.1迟发型变态反应（足跖增厚法DTH）取羊血，生理盐水洗涤3次，小鼠用2%（V/V）SRBC腹腔免疫，每只鼠注射0.2ml（约1×108个SRBC）。在免疫后4天，测量左后足跖厚度，然后再测量部位皮下注射20%（V/V）SRBC，每只鼠20ul（约1×108个SRBC），注射后24h测量左后足跖厚度。同一部位测量三次，取平均值。1.5.2抗体生成细胞数（Jerne改良玻片法）绵羊颈静脉取血对小鼠进行腹腔注射，然后，按试验规程处理后肉眼观察玻片上的空斑，计数溶血空斑数。1.5.3半数溶血值测定取羊血，对小鼠进行腹腔注射，然后，按试验规程处理后在540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值（HC50）表示，按下式计算。1.5.4单核—巨噬细胞碳廓清影响试验小鼠尾静脉注射1:4倍稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁2、10min，分别从内眦静脉丛取血20ul，并立刻将其加到2ml0.1%碳酸钠溶液中。用722分光光度计在600nm波长处光密度值（OD），以碳酸钠溶液做阴性对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重，按下式计算吞噬指数α：2结果2.1灵芝螺旋藻片对小鼠体重和迟发型变态反应（DTH）的影响由表1可见，经口给予灵芝螺旋藻片30天，各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异（P＞0.05）；其足趾肿胀度在低剂量组与阴性对照组间无显著性差异（P＞0.05），在中剂量组与阴性对照组间比较有显著性差异（P＜0.05），在高剂量组与阴性对照组间比较有高度显著性差异（P＜0.01），及中、高剂量组的灵芝螺旋藻片能增强小鼠的迟发型变态反应。表1.灵芝螺旋藻片对小鼠体重和迟发型变态反应（DHT）的影响组别动物数（只）始重（g）终重（g）增重（g）P1足趾肿胀度（mm）P2阴性对照1219.2±1.236.3±1.317.0±1.6----0.50±0.09----低剂量组1219.1±0.936.6±1.117.5±1.50.4570.55±0.070.166中剂量组1219.3±0.836.7±0.917.4±1.10.5700.57±0.09*0.036高剂量组1219.4±1.137.1±1.317.7±1.50.2650.61±0.06**0.002P1：各实验组与阴性对照组比较；P2：各实验组与阴性对照组比较*：与阴性对照组比较P＜0.05**：与阴性对照组比较P＜0.012.2灵芝螺旋藻片对小鼠抗体生成细胞数的影响由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片30天，经统计学处理，其抗体生成细胞数在低、中剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异（P＞0.05）；高剂量组与阴性对照组比较有高度显著性差异（P＜0.01），即高剂量组的灵芝螺旋藻片对小鼠的抗体生成细胞数有明显的影响。表2.灵芝螺旋藻片对小鼠抗体生成细胞数的影响组别动物数（只）溶血空斑数（×103/全脾）P阴性对照12179.5±9.9----低剂量组12182.7±12.70.461中剂量组12186.0±10.00.134高剂量组12192.0±8.7**0.005P：各实验组与阴性对照组比较；*：与阴性对照组比较P＜0.012.3灵芝螺旋藻片对小鼠半数溶血值（HC50）的影响由表3可见经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片30天，经统计学处理，其半数溶血值在低、中剂量与阴性对照组间比较无显著性差异（P＞0.05），在高剂量与阴性对照组比较有显著性差异（P＜0.05），即高剂量组的灵芝螺旋藻片能提高小鼠半数溶血值。表3.灵芝螺旋藻片对小鼠半数溶血值（HC50）的影响组别动物数（只）溶血空斑数（×103/全脾）P阴性对照12166±8----低剂量组12172±100.579中剂量组12177±130.332高剂量组12189±11*0.0422.4灵芝螺旋藻片对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片30天，经统计学处理，其碳廓清功能在低剂量组与阴性对照组比较无显著性差异（P＞0.05），在中剂量组与阴性对照组间比价有显著性差异（P＜0.05），在高剂量组与阴性对照组比较有高度显著性差异（P＜0.01），及中、高剂量组的灵芝螺旋藻片能提高小鼠单核—巨噬细胞的碳廓清能力。表4.灵芝螺旋藻片对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响组别动物数（只）吞噬指数（a）P阴性对照126.38±0.33----低剂量组126.68±0.500.078中剂量组126.75±0.45*0.031高剂量组126.84±0.32**0.007P：各实验组与阴性对照组比较；*：与阴性对照组比较P＜0.05**：与阴性对照组比较P＜0.013讨论研究表明，中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种功能[5]；螺旋藻中含有的藻蓝蛋白、多糖等，也有提高免疫力[6]。江振友[7]等用灵芝多糖喂药后2周，高、中、低3个剂量组小鼠抗体生成细胞、高剂量组小鼠血清溶血素(抗体积数)和对照组比较均有显著性差异，表明灵芝多糖对小鼠的体液免疫功能具有一定的调节作用，并且与其剂量有密切关系。本试验经口给予小鼠不同剂量的灵芝螺旋藻片30天，能提高小鼠的半数溶血值、小鼠抗体生成细胞数，即能增加体液免疫功能，能增强小鼠的迟发型变态反应，及增加细胞免疫功能；能提高小鼠单核—巨噬细胞的碳廓清能力，即增强非特异性免疫功能。说明御坊堂牌灵芝螺旋藻片具有增强免疫力功能作用。[参考文献][1]国家中医药管理局.中华本草.上海科学技术出版社.1999[2]卫生部，保健食品检验与评价技术规范.2003[3]曾祥丽，包海鹰.灵芝三萜类成分与药理学研究进展[J].菌物研究,2004,2(1):68.[4]陈伟平，王汝俊等.螺旋藻的化学成分分析及其药效学研究[J].中药材，2000,23(8):470-473.[5]何朝勇，王立为.多糖的免疫调节作用综述[J].安徽中医学院学报，2002，21（4）：62-64.[6]王文博等.螺旋藻的营养保健价值及其在预防医学中的应用[J].中国食物与营养，2009,1:48-51.[7]江振友，林晨等.灵芝多糖对小鼠体液免疫功能的影响[J].暨南大学学报（医学版），2003，24（2）：51-53.