检测方法比较

激光散射速率法：激光散射技术是指用激光作光源，在入射光方向以外，借检测散射光强度、频移及其角度依赖等而得到粒子重量、尺寸、分布及聚集态结构等信息的方法的统称，有着广阔的用途。就检测纳米材料而言，主要涉及频移及其角度依赖性的检测，这种散射技术又称动态光散射、准弹性光散射及光子相关光谱，分别以测定参数的性质、能量转移的大小及测定方法的原理而得名。散射比浊法：散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90°直角，当向样品中加入凝血激活剂后，随样品中纤维蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加。当样品完全凝固以后，散射光的强度不再变化，通常是把凝固的起始点作为0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光学的变化，将其转化为电信号，经过放大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线透射比浊测定法:是测定入射光强度由于溶液中粒子的散射而降低的程度，它并不直接测定散射的光强。这一点与分光光度测定法极为类似。用这种方法时，多用聚乙二醇（PEG）作为反应增强剂。这种非离子型聚合物可以降低抗原抗体复合物的溶解度。免疫层析法:是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。目的:评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性.方法:用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度.结果:两种方法在8～20mg/L、20～40mg/L、40～80mg/L、80～160mg/L、160～300mg/L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997,说明两种方法的相关性是良好的,而在低值1～8mg/L的测定中两方法的相关系数为0.928.结论:速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的CRP检测结果.【摘要】目的：评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性.方法：用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度.结果：两种方法在8—20mg／L、20～40mg／L、40～80mg／L、80～160mg／L、160～300mg／L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0．990、0．996、0．995、0．992、0．997．说明两种方法的相关性是良好的,而在低值1～8mg／L的测定中两方法的相关系数为0．928．结论：速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的CRP检测结果.【关键词】透射免疫比浊法散射免疫比浊法C反应蛋白在急性应急性疾病时如大手术、重度创伤、心肌梗死、严重感染、肿瘤等,血浆中某些蛋白浓度可明显增高或降低,这种现象称为急性时相反应,这些蛋白统称为急性时相反应蛋白.最具有代表性的急性时相蛋白首推C反应蛋白(CRP),CRP是目前临床上最有用的急性时相反应的一个敏感指标.CRP作为炎症标志物,本身尽管为非特异性的,但对于细菌感染、各种炎症过程及组织坏死与损伤及其恢复期的筛检、监测、病情评估与疗效判断,都具有重要的意义J.CRP的检测方法目前使用比较多的有胶乳凝集试验、免疫沉淀法、免疫浊度法和标记免疫测定法等,而其中的透射免疫比浊法和速率散射比浊法是目前公认为检测CRP较为精确的两种方法.为了评估两种方法的灵敏度和特异性,我们收集了80份血清,用免疫透射比浊法和速率散射比浊法分别进行CRP的检测,并作了结果比较.一、材料与方法1、标本来源样本血清来源于80例本院门诊和住院病人,其中骨折病员21例,确诊的恶性肿瘤病人15例,急性肺炎病员22例,冠心病病人10例,外科手术病员12例.采集空腹血后及时分离血清,并置-20℃保存备用.2、仪器日立7170型自动生化分析仪,BeckmanArray360特定蛋白检测系统.3、试剂透射免疫比浊法试剂盒及配套的校准品由上海基恩科技有限公司提供,批号为ISEP03.速率散射免疫比浊法：Beckman公司提供的C反应蛋白试剂及C反应蛋白定标卡,定标液,批号为M2070527.4、方法（1）免疫透射比浊法将标准品稀释配制成5个不同浓度的标准品--10mg／L、19mg／L、38mg／L、76mg／L、162mg／L,进行5点定标,形成标准曲线.样本为20uL,试剂1为180uL,试剂2为35uL,吸光度为340nm,5分钟后进行透射比浊.（2）速率散射免疫比浊法将该公司配备的定标卡进行校准,样本量为200l,试剂量为50,0．5分钟完成比浊测定.5、统计方法检验结果以x±s表示,以SPSS10．0软件包中Studentt检验作统计学处理.二、结果不同CRP浓度同时以两种方法检测所得结果如表1所示.三、讨论人体CRP与相应的抗血清在液相中反应,生成抗原抗体复合物,并产生浊度,其浊度的高低与标本中的CRP浓度呈正比,根据标准曲线,即可计算出标本中的CRP的浓度,这是透射免疫比浊法的测定原理[4].速率散射免疫比浊法是一种抗原抗体结合反应的动态测定法J,将各单位时间内CRP与抗血清形成复合物的速率及复合物颗粒产生的散射信号连接在一起,即形成动态动力学的速率散射免疫比浊法.实验结果表明,两种方法在8～20mg／L、20～40mg／L,40～80mg／L,80～160mg／L,160～300mg／L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0．990、0．996、0．995、0．992、0．997,说明两种方法的相关性是良好的.而在低值1～8mg／L的测定中两方法的相关系数为0．928,由于在透射免疫比浊法检测中,如果抗原抗体复合物的数量太少,对光通量的影响不大,如果复合物分子太小则阻挡不了光线的通过,在低浓度的C反应蛋白血清测定中会有所影响.而速率散射免疫比浊法是以测定单位时间内抗原抗体反应复合物形成的最快时间段的信号值,产生的散射信号最强,形成最大速率散射信号峰值.理论上讲,该测定不受本底散射信号的干扰,使检测快速,灵敏度高,对检测微量的C反应蛋白比较理想[6].在高浓度的C反应蛋白测定中,由于抗原过量,透射比浊法测定时,CRP浓度明显超出了检出限上限,发生测定结果显著低于实际含量.而在速率散射免疫比浊分析中,为保证准确性和精确度,仪器设计有抗原过量检测系统,提示应将待测样本进一步稀释,重新进行检测,以获取全部抗原的真实浓度.由此看来,在比较试验中,速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的结果.目前已有测定超敏CRP的免疫增强透射比浊法在日立7170A生化分析仪上的应用的报道,其检测范围在0．125～12．5mg／L,具有更高的灵敏度,可以参考推广应用.[参考文献][1]冯仁丰．急性相和C反应蛋白[J]．上海医学检验杂志,1999,14(5)：258—259．[2]杨振修．C反应蛋白的检测[J]．上海医学检验杂志,1999,14(5)：261—262．[3]YoungB,GleesonM,CrippsAW．C-reactiveprotein：acriticalreview[J]．Pathlogy,1991,23：118—224．[4]杨溢．免疫比浊法测定血清C一反应蛋白(CRP)的评价[J]．四川省卫生管理干部学院学报,2003,22(3)：165—166．[5]陈晓玲．速率散射比浊法与胶乳凝集法检测血清C反应蛋白的评价[J]．上海医学检验杂志,2002,17：141—145．[6]陶义训．现代医学检验仪器导论[M]．上海：上海科学技术出版社,2002．85—97．[7]胡敏．免疫增强透射比浊法测定超敏C一反应蛋白的方法学评价[J]．湖南医科大学学报,2003,28(4)：415—416．