检测梅毒螺旋体方法比较分析

检测梅毒螺旋体方法比较分析[摘要]目的比较ELISA（酶联免疫吸附试验）、TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）法诊断梅毒螺旋体感染的方法学差异。方法用目前国内最常用的诊断梅毒螺旋体感染的TRUST试剂及ELISA试剂检测722例标本，同时与TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集试验）的检测结果进行比较，从而得到各试验的假阴性率和假阳性率。结果对722份样本的检测中，ELISA和TPPA的阳性符合率为98.26%，假阴性率和假阳性率分别为0.46%和1.91%，2种方法差异无统计学意义（P0.05）；TRUST和TPPA的阳性符合率为84.39%，假阴性率和假阳性率分别为21.08%和5.10%；ELISA和TURST检出率差异有统计学意义（P0.01）。结论ELISA测定梅毒螺旋体的方法在日常大量标本检验时优于TRUST。梅毒(syphilis)是危害人类健康的性传播疾病之一，选择敏感性、特异性均高的梅毒检测方法有助于梅毒的诊断。梅毒的病原体是梅毒螺旋体(treponemapallidum，TP)，其表面抗原能刺激机体产生两类抗体，一类为抗密螺旋体的特异性抗体；另一类为非特异性抗体。TRUST试验（Toluidineredunheatedserumtest，甲苯胺红不加热血清反应素试验）所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇，检测血清中非特异抗体-抗心磷脂抗体（反应素）。梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）方法最早在1975年用于检测梅毒螺旋体IgG和IgM抗体。文献报道ELISA方法的敏感性高于FTA—ABS方法。对I期梅毒的诊断灵敏度和特异性均较高[2]。梅毒螺旋体明胶凝集试验(Treponemapallidumparticleagglutination,TPPA)作为梅毒特异性抗体检测的确证方法，有着很高的敏感度和特异性，操作较简便，结果清晰易判断，但价格昂贵且结果判断难以自动化[3]。通过该实验了解ELISA和TRUST方法在日常标本中检测梅毒螺旋体的效果，可以按照需求更加合理的选择适当的梅毒螺旋体检测方法。1材料与方法1.1材料1.1.1标本来源成都市妇女儿童中心医院检验科2011-01/12部分住院和门诊患者静脉凝集血722份。1.1.2试剂TRUST试剂购自上海荣盛公司，ELISA试剂购自北京现代高达生物技术公司，TPPA试剂购自日本富士（瑞必欧）株式会社。1.1.3仪器DNM-9602G酶标仪，PW-960洗板机，恒温水浴箱，微量振荡器。1.2方法1.2.1梅毒螺旋体检测方法TRUST、ELISA和TPPA3种试验均按试剂盒说明书要求进行，每批标本测试同时做阴性对照、阳性对照和质控血清进行质量控制。1.2.2统计学方法以TPPA的检测结果为标准，对TRUST和ELISA方法梅毒螺旋体感染检出率的比较采用X2检验。2结果TPPA是目前公认的较好的梅毒确诊试验，以TPPA为金标准比较TRUST和ELISA试验，结果见表1、表2、表3。722例标本全部3种方法检测，表1数据表明ELISA和TPPA的阳性符合率为98.26%，假阴性率和假阳性率分别为0.49%和1.91%，2种方法差异无统计学意义（X2=271.777，Kappa=0.973，P0.05）。表2数据表明TRUST和TPPA的阳性符合率为84.39%，假阴性率和假阳性率分别为21.08%和5.10%，2种方法差异无统计学意义（X2=114.627，Kappa=0.629，P0.05）。表3数据表明ELISA和TURST方法差异有统计学意义（X2=104.05，P0.01），ELISA方法在检出率上优于TRUST方法。3讨论该组资料的检测结果，ELISA方法对相同患者群体的梅毒感染检出率高于TRUST方法，与TPPA方法比较时有1.72％的假阳性率。唐跃华等对ELISA假阳性结果进行了分析，发现S／CO(样品A值／临界值)均在3以下，这提示尽管试剂说明书上标明S／CO＞1为阳性，但在临床实际工作中当1＜S／CO＜3时应该对结果进行复查，排除人为误差或通过TPPA、TPHA等确认试验给予确认[4]。TRUST检测存在的生物学假阳性可见于多种疾病，如高脂血症和抗心磷脂抗体阳性的血清，结核红斑狼疮、类风湿性关节炎等，其在无梅毒感染史的正常人群中阳性率达0.1％。由于人体感染梅毒螺旋体4-l0周左右，血清中才可产生一定数量的特异性抗体和非特异性抗体，而且特异性抗体比非特异性抗体早l周出现[5]。另外，梅毒患者治疗后，非特异性抗体可逐渐转阴，这种抗体滴度与梅毒活动有关，因此TRUST不适于一期梅毒早期、三期梅毒诊断，对潜伏期梅毒也不敏感。目前TRUST由于是一种凝集反应，主观判断结果，特异性和灵敏度都不好，但是时间较短，临床上主要用于观察疗效，复发及再感染[6]。TPPA灵敏度高，特异性强，被认为检测梅毒的金标准，但由于进口试剂价格昂贵、结果判读难以自动化等缺点而不适于大批量样本的检测。ELISA是新近用于梅毒诊断的血清学方法，随着分子生物技术的发展，现均已使用梅毒螺旋体的基因工程抗原，不但具有很好的特异性和灵敏度，且操作简便，不受样本中纤维蛋白和溶血等影响，可以自动化，适合大批样本检测，客观准确，结果便于保留及标准化管理，可以作为梅毒螺旋体感染的单一筛选试验。国内有学者认为ELISA方法是一种理想的梅毒螺旋体感染的筛选试验，但由于该试验检测值在抗梅毒治疗前后没有明显的变化，所以不适宜用于疗效观察，还不能取代TRUST方法[7]。因此3种方法扬长避短，先用梅毒非特异性试验(TRUST法)进行梅毒的常规筛查及疗效观察、判断复发及再感染，再用梅毒特异性试验(如TPPA或ELISA法)进行确认试验，用于诊断各期梅毒，可以更好的为临床诊断和疗效判断提供准确快速的依据。中国现代医生，2008，28:146-148.