实验方案1、试验方法挑选籽粒饱满、大小一致的玉米种了,用10%次氯酸钠消毒10min,25℃浸种24h,挑选发芽一致的种子培养,培养桶外裹双层黑遮光布。水培至一叶一心,后用1/2浓度Hongland营养液培养,昼夜温度分别为28℃和20℃,每天光照16h,每3d换一次营养液。幼苗三叶一心时进行如下处理然后分别加入如下处理溶液:(1)T1:Hoagland;(2)T2:Hoagland+150mmol/LNaCl;(3)T3:Hoagland+150mmol/LNaCl+2mmol/LCaCl2;(4)T4:Hoagland+150mmol/LNaCl+4mmol/LCaCl2。(5)T5:Hoagland+150mmol/LNaCl+6mmol/LCaCl2。处理期间每2d换一次营养液,营养液pH=6.2,全天通气培养。处理6d后采样测定各项指标,每个处理至少重复3次。2、生理指标测定叶片可溶性糖含量的测定采用蒽酮法;叶绿素含量的测定采用丙酮-乙醇混合浸提法;游离丙二醛(MDA)的测定采用硫代巴比妥酸(TBA)法;SOD。2.1可溶性糖含量的测定将样品剪碎混匀,称取0.10g置于研钵中,加液氮研磨至粉末状,加5-10ml蒸馏水转移至20ml刻度试管中,于沸水中提取20min,提取液过滤入25ml容量瓶,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。吸取1ml样品液于20ml刻度试管中(重复2次),加蒸馏水1ml(对照加2ml蒸馏水),同制作标准曲线的步骤,按顺序分别加人蒽酮,浓硫酸溶液,显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量,按下式计算样品中糖的含量。可溶性糖含量(%)二C×V/a×n/w×10-6C-标准方程求得糖量(μg):a-吸取样品液体积(ml);V-提取液量(ml);n-稀释倍数;W-组织重量(g)。标准曲线制作:配制浓度为20、40、60、80、100μg/ml5个系列的葡萄糖标准溶液。取标准溶液2ml(参比液为2ml水)和0.5ml蒽酮乙酸乙酯,5ml浓硫酸沸水浴反应10min,冷却至室温,比色(λ=620nm),最后绘制标准曲线。2.2叶绿素含量的测定称取0.2g剪碎的叶片于50ml三角瓶内,加入10ml浸提液,于黑暗处放置16h。当叶片被浸提为白色时,取0.2ml浸提液于小瓶中,加入4.8ml浸提液混匀后于紫外分光光度计上663nm、645nm下比色。浸提液:丙酮:乙醇:水=4.5:4.5:1结果计算:Ca(mgL-1)=12.71OD663-2.59OD645Cb(mgL-1)=22.88OD645-4.67OD663叶绿素含量(mgg-1)=C×V×稀释倍数/FW其中,C为上式中计算出来的叶绿素浓度,V为测定时溶液的体积,FW为称取的叶片的鲜重。2.3MDA含量的测定称取样品0.1g,加液氮研磨至粉末状,加人2ml10%TCA,研磨至匀浆,转移至5ml刻度离心管中,将研钵用3ml10%TCA冲洗,并转入5ml刻度离心管中,匀浆在4000×g4℃离心10min,上清液为样品提取液(测量提取液体V)。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml10%TCA)于5ml刻度离心管中,加入2ml0.6%TBA溶液,混匀物于沸水浴上反应15min(自试管内溶液中出现小气泡开始计时),迅速冷却后4000×g4℃离心10min。取上清液测定532nm,600nm和450nm波长下的消光度。根据样品的重量计算测定样品中MDA的含量:MDA(μmol/gFW)=MDA浓度(μmol/L)×提取液体积(ml)/样品鲜重(g)2.4SOD含量的测定称取植物组织0.5g,先加入2.5mlpH7.8PBS研磨匀浆后,再加入2.5mlpH7.8PBS混匀,4℃下10000rmin-1离心15min,上清液即为粗酶液。同时还可用于丙二醛含量的测定。吸取上清液0.5ml,加入3ml核黄素溶液,3mlNBT溶液,3ml蛋氨酸溶液10.5ml磷酸缓冲液,混匀后,置于4000lux日光灯下反应20min,然后在560nm测定反应液的光密度。以不照光的对照烧杯作参比,分别测定其它各管的光密度。结果计算:已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示,按下式计算SOD活性。SOD总活性=(ACK-AE)×V/(0.5×ACK×W×Vt)SOD比活力=SOD总活性/蛋白质含量其中,SOD总活性以鲜重酶单位每克表示;比活力单位以酶单位×每毫克蛋白表示。ACK为照光对照管的吸光度;AE为样品管的吸光度;V为样品液总体积(ml);Vt为测定时样品用量(ml);W为样品鲜重(g);蛋白质含量单位为mg/g-1。