熊果苷对黑素细胞影响的研究

附件未来学术之星大学生课外科研课题项目申报书课题名称：熊果苷对黑素细胞影响的研究课题负责人：莫景菊学院、年级、班别：基础医学院104班联系电话：[phone]课题类别：□√基础医学类公共卫生学类口腔医学类药学类护理类人文社科类共青团广西医科大学委员会二〇一二年制课题名称熊果苷对黑素细胞影响的研究类别A基础医学类B公共卫生学类C口腔医学类D药学类E护理类F人文社科类申请金额1500元起止年月2012年12月至2013年6月指导教师姓名性别专业技术职称所在部门签名（手写）陈维平男细胞培养及研究组织学与胚胎学教研室课题申请人姓名年级班别性别专业在课题中的作用莫景菊104女七年制临床医学项目负责人石宛灵104女七年制临床医学实验操作、查找文献林雨104女七年制临床医学实验操作、查找文献石诗玮104女七年制临床医学实验操作、实验分析肖雄112男七年制临床医学实验操作、数据分析汪梦寰112男七年制临床医学实验操作、实验分析课题经费预算支出科目金额（元）计算根据及理由实验动物300购置实验动物小白鼠实验试剂1000购置实验用试剂、溶液、培养基等等资料复印、查阅100文献资料检索、查新、论文复印、打印等实验器材100实验消耗器材，如玻璃器皿、离心管等。立论依据：1．本课题国内外研究现状述评及选题的价值。2．本课题所要解决的主要问题、研究的主要内容和拟解决的关键问题。3．本课题研究的主要思路、研究方法技术路线、实验方案及可行性分析和预期目标。1、本课题国内外研究现状述评及选题的价值对于大多数亚洲女性来说，“美白”是一个不老的话题。皮肤黑素主要由位于表皮基底层的黑素细胞产生，皮肤颜色的深浅是由黑素细胞合成黑素数量的多少决定。黑素的合成主要在黑素细胞内进行，酪氨酸经酪氨酸酶催化羟化为多巴并进而形成多巴醌，并经DHI氧化酶和DHICA氧化酶的作用，生成真黑素，所以酪氨酸酶是黑素生成的起始限速酶[1]。熊果苷作为化妆品界有名的美白原料之一，自20世纪90年代被推出，广泛应用于国内外众多化妆品，作于其中主要的增白剂。美白剂应该符合两个标准，一是对酪氨酸酶活性有较高的抑制率，能显著的减少黑色素的生成；二有较高的安全性，对人体皮肤无毒无刺激[2-3]。熊果苷从植物中提取，一直以安全性高、无毒、美白效果佳等备受推崇，但近年来，相关研究表明，对于其对黑素细胞的影响存在着不同的看法和结论。国内外大多数的研究都以黑素瘤细胞作为研究的对象，但极少以更贴近于人体的生理状况——黑素细胞和角质形成细胞共培养模型[4-5]为研究对象；其次，关于熊果苷对黑素细胞的影响研究较少，并没有其影响黑素细胞形态结构、功能方面的相关报道。我们课题组旨在探究熊果苷对黑素细胞的影响，更客观地指导熊果苷的应用。2、本课题所要解决的主要问题、研究的主要内容和拟解决的关键问题（1）要解决的主要问题成功制作黑素细胞(A375细胞)与角质形成细胞(HACAT)共培养模型、黑素细胞(A375细胞)单培养模型和角质形成细胞(HACAT)单培养模型，需要了解熊果苷的美白效果及相应浓度时的细胞毒性，并在美白效果最佳的基础上探究细胞保护方案。（2）研究的主要内容成功建立黑素细胞(A375细胞)与角质形成细胞(HACAT)共培养模型、黑素细胞(A375细胞)单培养模型和角质形成细胞(HACAT)单培养模型，观察各模型中熊果苷对黑素细胞形态结构、功能、增殖、酪氨酸酶活性、黑色素生成量及乳酸脱氢酶（LDH）的影响。（3）拟解决的关键问题单培养细胞模型及共培养细胞模型无法成功养活细胞，解决方案：①排除人为因素的干扰；②向有经验的老师及学者请教；③更换更为合适的培养基。3、本课题研究的主要思路、研究方法技术路线、实验方案及可行性分析和预期目标主要思路成功建立黑素细胞(A375细胞)与角质形成细胞(HACAT)共培养模型、黑素细胞(A375细胞)单培养模型和角质形成细胞(HACAT)单培养模型，观察各模型中熊果苷对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑色素生成量及乳酸脱氢酶（LDH）的影响。研究方法技术路线查阅相关国内外文献，发现矛盾和区别确立主要研究内容研究方法、实验方法的讨论和确立购买相关研究用品进行试验讨论、总结试验过程及结果参比国内外论文、分析区别与原因结题、攥写论文可行性分析（1）查阅国内外相关资料，相关技术较成熟。（2）具备一定物质基础条件材料、试剂：黑素细胞(A375细胞)、角质形成细胞(HACAT)、培养基、熊果苷等可购买。仪器：离心机、酶标仪、Olympus倒置显微镜、生物洁净工作台、小容量恒温培养振荡器、等相关仪器，学校实验室有。实验技术支持：组培教研室长期做细胞的研究，相关的细胞培养、观察等方法较齐全，科研实力雄厚，有较强的带领科研团队的能力和丰富的经验。（3）课题团队能力较强团队由大二、大三的学生组成，知识层面上可以互补提升。团队里有4个双语班学生，外语水品较强，有较强的外国文献的查阅能力。大二、大三的课余时间有所互补和交叉，可以更方便交流沟通、按时按质进行实验，保证实验的顺利进行。男女生搭配，思维逻辑方面可互补。由多年从事细胞研究的陈维平老师带领团队，能得到更全面的指导。预期目标（1）学习并完成综述一篇（2）科研总结报告一篇（3）学习并完成撰写科研论文一篇（4）体验“早期接触科研”活动的感悟文章一篇参考文献[1]梁勇,羊裔明,袁淑兰.丹参酮药理作用及临床应用研究进展[J].中草药,2000,31(4):304.[2]QiuL，ZhangM，RickAS，eta1．Inhibitionofmelaninsynthesisbycystamineinhumanmelanomacells[J]．JInvestigativeDermatology，2000，114(1)：21．27．[3]张春香，尹鸿萍，王曼.几种美白活性物质对酪氨酸酶活性的体外抑制作用及细胞毒性[J].中国生化药物杂志,1005-1678(2005)02-0072-04.[4]王兴焱,王天晔,陈巧云，张宁，李绍民，陈景华.熊果苷对A375细胞与HACAT共培养模型中黑素合成的影响.中国美容医学[J].1008-6455（2010）09-1321-03.[5]LeiTC，ViradorVM，VieiraWD，eta1．Amelanocyte—keratinocytecoculturemodeltoassessregulatorsofpigmentationinvitro[J]．AnalyticalBiochemistry，2002，305：260—268．指导老师或专家意见：该课题组同学系统地经历了文献复习、立题讨论和课题的确定等前期准备，初步确定了一个研究的课题，希望同学们明白这次活动的意义：通过细胞培养的实验室工作，将所学的基础课程知识整合，体验研究式学习的模式；在学习撰写科研论文的基础上，体验并总结科学研究过程的感悟，对促进后续的学习过程非常有价值和意义。同意该课题组立题。我愿意和我的研究生小组一道指导他们开展细胞培养的体验活动，如经费不足，我愿意适当给予资助。签字：年月日学院意见：签字：年月日校团委意见：签字：年月日校大学生课外科技学术活动指导委员会意见及评定：分数：签字：年月日申请者承诺：我保证上述内容的真实性。如果获得校长基金资助，我与本项目组成成员将严格遵守学校的有关规定，切实保证研究工作时间，按计划认真开展研究工作，按时报送有关材料。申请者：（签章）年月日注：此申报书需在11月18日前上交校团委，一式三份，请预留底稿。