中药饮片中二氧化硫残留量的快速检测方法

中国现代应用药学2016年6月第33卷第6期ChinJModApplPharm,2016June,Vol.33No.6·775·中药饮片中二氧化硫残留量的快速检测方法吴华庆1，杨华剑2，吴晓平2*(1.浙江英特集团股份有限公司，杭州310015；2.浙江省临海市食品药品检验检测中心，浙江临海317000)摘要：目的探索中药材中二氧化硫残留量的快速检测方法。方法考查碱性超声波浸提法和蒸馏法对二氧化硫提取效果的影响。无色或白色样品，采用碱浸提30min；有色样品采用蒸馏法提取。并采用检测试剂盒法测定。结果二氧化硫线性范围为1~12.0g(r=0.999)，检出限为0.21g。其中碱性超声波浸提法的重复性RSD为1.0%，样品加样回收率为91.2%~95.4%；蒸馏法的重复性RSD为1.3%，样品加样回收率90.3%~98.2%。36份不同样品测定结果与中国药典2015年版方法测定结果基本一致。结论该快速检测方法具有简便、快速、准确、经济等特点，适合在中药材收购部门、中药饮片生产经营企业、监管部门推广应用。关键词：中药饮片；二氧化硫；快速检测；检测试剂盒中图分类号：R917.105文献标志码：B文章编号：1007-7693(2016)06-0775-03DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2016.06.023RapidDetectionMethodofSulfurDioxideResidueinChineseHerbalMedicinesWUHuaqing1,YANGHuajian2,WUXiaoping2*(1.ZhejiangIntecGroupCompanyLimited,Hangzhou310015,China;2.LinhaiCenterforFoodandDrugControl,Linhai317000,China)ABSTRACT:OBJECTIVEToestablisharapiddetectionmethodofsulfurdioxideresidueinChinesemedicinalmaterials.METHODSSulfurdioxidewasextractedbytwodifferentmethodsfromthesamplesandthendetectedbythetestkit.Forthecolorlesssample,sulfurdioxidewasextractedwithaqueousalkylafter30minsonication.Forthedarkcolorsample,sulfurdioxidewasextractedwithdistillation.RESULTSThelinearityofSO2ranged112g(r=0.999).Thelimitofdetectionwas0.21g.Forthesonicationmethod,theRSDwas1.0%.Recoveriesofspikedsamplesvariedfrom91.2%to95.4%.Forthedistillationmethod,theRSDwas1.3%.Recoveriesofspikedsamplesvariedfrom90.3%to98.2%.Thirty-sixdifferentherbalsamplesweredetected.ThepresentmethodproducedsimilarresultscomparedtotheChinesePharmacopoeiaanalysis.CONCLUSIONTherapiddetectionmethodissimple,rapid,sensitive,accurate,andeconomical.It’sapplicabletothetraditionalChinesemedicineenterprisesandtheregulatoryauthorities.KEYWORDS:Chineseherbalmedicines;sulfurdioxide;quickdetection;testkit作者简介：吴华庆男主管中药师Tel:[phone]E-mail:[e-mail]*通信作者：吴晓平男副主任技师Tel:[phone]E-mail:[e-mail]硫磺熏蒸是一些中药材加工过程中的传统使用方法[1]，能够达到干燥、杀菌、防霉、防虫及漂白的作用。但硫磺熏蒸，可能改变中药材的某些有效成分[2-4]，影响药效，过量的残留可能会引起服用者诸多危害[5-7]。报道表明[8-10]，目前国内中药材及饮片二氧化硫残留超标现象普遍存在。中药材中二氧化硫残留，多以结合型的亚硫酸存在。中国药典2015年版规定的3种检测方法[11]，仪器配置要求高、检测过程繁琐、检测时间长、成本高、对检测人员技术能力要求高，不适宜中药材及饮片生产经营企业、中药材交易市场经营主体的日常质量监控。本研究依据北京普析通用仪器有限责任公司提供的检测试剂盒快检方法指南，参考GB/T5009.34-2003食品中亚硫酸盐的测定[12]及有关文献[13-16]的前处理方法，建立了快速检测中药材及饮片中二氧化硫残留量的方法，并与药典方法进行了对比，结果令人满意。1仪器与试剂T3FS-P食品安全现场快速检测仪(北京普析通用仪器有限责任公司)；AM10智能恒温金属浴(北京普析通用仪器有限责任公司)；KQ2200DA超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Neofuge18R台式高速冷冻离心机(上海力申科学仪器有限公司)；CLF-02密封型手提式粉碎机(浙江省温岭市创力药材器材厂)。中药饮片样品均来自亳州市永刚饮片厂有限公司提供的散装样品；食品中二氧化硫测定试剂盒(批号：150215，北京普析通用仪器有限责任公·776·ChinJModApplPharm,2016June,Vol.33No.6中国现代应用药学2016年6月第33卷第6期司)；亚硫酸氢钠、氯化钠、氢氧化钠、盐酸、硫酸(国药集团化学试剂有限公司)；双氧水(浙江三鹰化学试剂有限公司)；氯化汞(姜堰市环球试剂厂)；所用试剂均为分析纯；实验用水为超纯水(Milli-Q水处理系统)。2方法2.1溶液的配制2.1.1四氯汞钠溶液称取13.6g氯化汞及6.0g氯化钠，用超纯水溶解稀释至1000mL，放置过夜后过滤，得四氯汞钠溶液。2.1.2氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠用超纯水溶解稀释至1000mL，得20g·L1氢氧化钠溶液。2.1.3硫酸溶液吸取10mL硫酸溶于710mL水中，制得硫酸溶液。2.1.4二氧化硫对照品溶液称取0.5g亚硫酸氢钠，按照《GB/T5009.34-2003食品中亚硫酸盐的测定》方法配制，浓度为3.225mg·mL1，逐级稀释4.00g·mL1。2.1.5供试品溶液碱浸提法(适用于无色或白色样品)：将中药饮片分别粉碎，称取1.00g置于50mL量瓶中，加20mL水，2mL的20g·L1氢氧化钠溶液，置超声波清洗器中超声30min，加入2mL硫酸溶液，摇刀，用水定容，混刀，溶液置离心机以5000r·min1离心10min，上清液供检测用。蒸馏法(适用于有颜色样品)：将中药饮片分别粉碎，称取1.00g水不溶性固体样品，用粉碎机粉碎后，准确称取1.0g样品置于提取瓶中，用水湿润后，加水至15mL左右，加数粒沸石，放入预先加热到140~150℃的恒温金属浴加热器孔中，在小量杯中加入1mL水，调节量杯高度，使接收管插入吸收液面以下，接通冷却风扇电源，向提取瓶中加入1mL食品中二氧化硫测定试剂No.1，开始加热蒸馏。当馏出液达到9mL左右时停止加热，取下量杯，加纯水至10mL，混刀待测。2.2测定原理及方法原理：亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定化合物，再与盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物，利用吸光度法测量二氧化硫含量。方法：吸取1.00~4.00mL供试品溶液于快检仪配套的16mm比色管中，加入0.5mL食品中二氧化硫测定试剂No.2，加纯水至5mL(同时以纯水做空白)，加入5滴食品中二氧化硫测定试剂No.3，摇刀，加入5滴食品中二氧化硫测定试剂No.4，摇刀，加入0.5mL食品中二氧化硫测定试剂No.5，摇刀，20min后用食品安全现场快速检测仪检测。3结果与讨论3.1线性关系考察分别精密吸取4.00g·mL1二氧化硫对照品溶液0，0.25，0.50，1.00，2.00，3.00mL，按“2.2”项下方法测定。以吸光度(A)为纵坐标，二氧化硫值(M)为横坐标，进行线性回归。回归方程为A=0.1314M+0.0316(r=0.999)，二氧化硫值在1~12.0g内线性关系良好。3.2检测限采用基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法，按照LOD=3.33/S公式计算，方法检测限为0.21g，昀低检出浓度为10mg·kg1。3.3加样回收率试验称取山药样品9份，分别加入0.158mg·mL1二氧化硫对照品溶液1.00，1.50，2.00mL各3份，按“2.1.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下方法测定，计算回收率，结果见表1。称取陈皮样品9份，分别加入0.0790mg·mL1二氧化硫对照品溶液0.80，1.00，1.50mL各3份，按“2.1.4”项下蒸馏法制备供试品溶液，按“2.2”项下方法测定，计算回收率，结果见表2。表1山药和陈皮加样回收率试验结果Tab.1ResultsofrecoverytestofDioscoreaeRhizomaandCitriReticulataePericarpium样品取样量/g含量/mg·kg1加入量/mg·kg1实测值/mg·kg1回收率/%平均回收率/%山药1.000254.7158.0398.891.292.61.000254.7158.0400.192.01.000254.7158.0404.394.71.000254.7237.0480.895.493.61.000254.7237.0476.293.51.000254.7237.0472.591.91.000254.7316.0554.494.894.51.000254.7316.0556.195.41.000254.7316.0550.293.5陈皮1.00085.763.2142.890.392.31.00085.763.2145.194.01.00085.763.2144.392.71.00085.779.0159.893.893.91.00085.779.0161.295.61.00085.779.0158.592.21.00085.7118.5199.696.196.11.00085.7118.5197.294.11.00085.7118.5202.198.2中国现代应用药学2016年6月第33卷第6期ChinJModApplPharm,2016June,Vol.33No.6·777·3.4重复性试验取山药样品，按“2.1.4”项下碱浸提法制备6份供试品溶液；取陈皮样品，按“2.1.4”项下蒸馏法制备6份供试品溶液，按“2.2”项下方法测定，山药中二氧化硫残留量分别为257.1，259.2，256.5，252.1，256.3，254.0mg·kg1，相对标准偏差为1.0%。陈皮中二氧化硫残留量分别为86.1，85.2，86.5，84.1，87.3，85.0mg·kg1，相对标准偏差为1.3%。结果表明方法重复性较好。3.5与中国药典2015年版方法比较称取36份中药材样品(具体中药材见表2)，按“2.1.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下方法测定。同时，按中国药典2015年版第一法酸碱滴定法测定，然后进行对比试验，结果见表2。由表2可知，本方法所得数据与中国药典2015年版方法差别小，结果可信。表2样品测定结果Tab.2Resultsofsamp