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日立L-2000高效液相色谱仪操作规程一、准备工作1）色谱条件的选择：选择色谱柱、流动相、检测器2）流动相配制：采用“HPLC”级溶剂，水采用纯化水。配制方法见相关质量标准，使用前用0.45μm有机系滤膜过滤。流动相进行超声波脱气（或真空脱气、氦脱气），脱气不少于15min，除去溶解的气体。然后将泵上末端带有吸滤头的输液管插到处理好的流动相贮液瓶中。3）样品配制：要采用0.45μm或更小孔径滤膜过滤，装于样品瓶中，然后放于进样器的样品架上准备测定。二、启动仪器1）打开组织器（最上面模块）的电源开关，按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开LC各模块电源开关及PC电源。2）双击桌面上图标，启动软件。3）点击“系统状态”按钮，点击“初始化”，状态由“待机”转为“连接中”，确认各模块的连接状态。三、净化流路1）打开泵排液阀（下面模块左侧圆形阀门，逆时针旋转约180°）。2）单击“净化”按钮，送液约2分钟后，单击“关闭净化”按钮，并关闭泵排液阀（下面模块左侧圆形阀门，顺时针，不要拧太紧！）。四、建立方法文件建立样品表1）在“文件”菜单中选择“新建”“方法”。在“方法”中，经常需要调整的测量方法部分：梯度模式、流动相比例、柱温、采集时间、定量计算方法等。点击“更新方法文件”按钮。完成方法设置，保存。2）在“文件”菜单中选择“新建”“样品表”。填入样品瓶放置位置的编号，进样体积，样品名称，方法名称等，完成对样品表的编辑，保存。五、样品测定点击“数据采集”按钮，弹出开始分析界面，仪器开始按照“方法”中设定的流动相和波长开始走基线，当基线平稳，压力稳定（通常在同一流动相平衡半小时以后）后，点击“单分析的开始”或“系列开始”按照样品表编制的顺序测定样品。六、数据的处理和报告的生成1）点击“数据处理”图标，选择记录的数据，双击或单击“显示”。选择合适的报告形式，可以让数据按要求呈现在我们面前，并且保存到常用的格式中去。2）常用的两种报告形式：一种比较全面的报告（详细版）；一种是简明报告（简明版）。这两种报告可以根据要求自己编辑。点击“打印”按钮，可以生产PDF文档，方便查阅。七、关机1）实验结束后，首先关闭检测器开关。2）然后用90%的甲醇或乙腈以1mL/min的流速冲洗色谱柱及管路30分钟。若流动相中有缓冲溶液，实验完毕后应先用纯水以1mL/min的流速冲洗色谱柱30分钟，再用90%的甲醇冲洗。3）依次关闭柱温箱、进样器、泵、计算机的电源开关。4）登记仪器使用情况，做好整理和清洁工作。注意事项：1）柱压异常升高时，考虑在线过滤器堵塞，可将其拆下，超声清洗（可使用纯净水或者5%-10%硝酸溶液）。2）柱压异常降低时，考虑系统漏液。3）柱压不稳定时，考虑入口单向阀、出口单向阀堵塞，可在专业人员指导下，拆下超声清洗。4）输液管持续出现气泡时，考虑流动相滤头污染，可将其拆下，超声清洗（可使用纯净水或者5%-10%硝酸溶液）。5）当仪器报警，同时仪器屏幕显示【LEAKERROR】时，考虑漏液传感器处有液体或灰尘存在，目视检查并小心擦拭。6）仪器长时间不用时，柱子及管路内部应充满甲醇。7）使用中注意流动相瓶中溶液情况，不要流尽，切忌使泵空转。