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显微技术包括哪些部分内容？显微技术：利用光学系统或电子光学系统设备，观察肉眼所不能分辨的微小物体形态结构及其特性的技术。包括1各种显微镜的基本原理操作和应用的技术2显微镜样品的制备技术3观察结果的记录分析和处理的技术。固定时应注意事项1注意固定材料本身的结构性质，选用适合的固定液，固定时间根据材料特点增减2固定微小材料直接投入固定液中，对于较大材料先将其解剖成较小材料迅速投入固定液，完成杀生固定作用3固定体积较大材料时，会出现外部固定过度，而内部未固定好，考虑选用渗透快的固定液（乙酸乙醇或苦味酸乙醛混合液），加用超声波发生器能达到迅速固定目的4对多毛的芽或根茎的固定时，先投入乙酸乙醇液浸泡数分钟，然后再入纳瓦申固定液或其他固定液完成固定。同时，要进行抽气，另可用超声波发生器进行固定抽气5一般固定液多为酸性固定影像，盐基性固定影像较少，除考虑影像外，还应在脱水剂、渗入剂方面进行观察6固定剂的浓度不可忽视7固定材料的记录：固定标本瓶上必须贴上标签，用笔书写以下内容：编号，采集时间、地点、处理者的姓名简写，固定液的名称，保存液的名称等常用的染色剂类型根据来源：天然染料和人工染料根据化学性质：碱性染料酸性染料中兴染料根据染色性能：核染料细胞质染料细胞壁染料组织化学染料荧光染料活体染料注意事项1应根据观察目的、样品结构、性质选择适当的染色方法2材料从某一溶液进入染色液时，两种溶液的浓度必须相同3酸性染料着色速度快于碱性染料，双重染色时，先用碱性染料染色，再用酸性4染色宁可深，因为水洗和脱水会使颜色变浅5用分色剂时，要在低倍显微镜下随时观察，分色适度即彻底洗净6染色的时间不是一成不变，要根据染色剂的性质，配方，切片的厚薄，材料的结构等在使用时灵活掌握常用的透明剂透明剂都是石蜡溶剂，不能与水混合例如：二甲苯氯仿冬青油浸蜡1浸蜡瓶放在温箱中过夜时，材料不能太多2浸蜡一般从低温到高温，从低浓度到高浓度，使石蜡慢慢渗入组织内，将透明剂替代出来包埋1注意安全防火防烫伤2包埋速度不能太慢以免石蜡凝固3包埋石蜡温度不能太高以免损伤材料4蜡中出现气泡可将镊子烧热烫去5未冷却前不能将蜡盒移入水中6应注意包埋材料的位置、方向，要有利于切割切片及研究7熔蜡时人不能离开，如果石蜡出现冒烟情况时，不要揭开蜡杯盖，要及时切断电源徒手切片方法制片过程。取样—固定—水洗—切片—染色—脱水—透明—封藏1取材：用FAA固定或不固定2徒手切片的步骤a取一套小培养皿，皿内盛有清水b切片c挑选好的切片3染色与保存a临时装片：加1d1%番红水溶液，短期保存则加1d10%的甘油使切片更透明，避免失水变干变黑b永久存片：染色滑走切片法制片过程特殊步骤过程1固定切片2固定样品3调整材料的高度4调节切片的厚度5切片6每次切片结束后，要用软布将切片机擦拭干净，滑槽内切下的碎屑也需清除，将切片刀取下擦干净并滴注机油后放入刀盒保存特殊步骤：材料若太坚硬，需经过软化处理压片法制片过程1取材和前处理：种子萌发后待初生根长到1cm长左右，切取根尖前端5mm置于装有前处理液（秋水仙素、对二氯苯、a-溴代萘、8-羟基喹啉）的指形瓶中，处理3~5h2固定：将材料固定于乙醇：乙酸（3:1）固定液0.5h以上3水洗：将材料用自来水浸泡、清洗20min以上，期间要换水4酶解：用纤维素酶和果胶酶各2.5%的混合酶液对材料酶解30min5水洗：用自来水短暂冲洗，洗去酶液6酸解：将材料用1mol/LHCl在60摄氏度水浴中酸解10min7水洗、压片：弃去盐酸，加清水于材料中，浸泡20min以上，卡宝品红染色，压片镜检倒置显微镜的特点1物镜与照明系统颠倒2用于观察培养的活细胞，通常具有相差或DIC物镜，有的还具有荧光装置透射电镜中样品处理方法1加入物镜光阑2提高样品中某些部分的原子序数Z3选用较低的加速电压4暗场显微法5适当的切片厚度蜡带不直，成弯曲状：主要原因是蜡块切面的上下边缘不平行，将蜡块边缘修片即可2切片纵裂：主要原因是刀有缺口或者劈刀时间太短，组织软化不够等。可移动刀刃位置或者劈刀、软化组织（取下台木，将蜡块倒放在有水的培养皿中浸泡半天，使组织软化）后再切片3材料破碎：主要原因是脱水不彻底，浸蜡不完全，石蜡没有完全填充植物组织而形成空洞，须重做材料石蜡切片法的优点1易操作2能把材料切均匀，极薄（1~12mm）的切片3切下的单个蜡片可以连接形成蜡带，有利于作连续切片，是其他制片法难以达到的4可永久保存解离法制片的过程1解离：将被检查的木质部切成火柴梗粗细，长约1~2cm的小条2水洗：尼龙纱网滤去酸液，换水浸泡数次至酸液除尽3保存：用玻璃棒捣散组织，转入离心管离心，弃去上清液，加入50%乙醇保存4染色：取少量木质部解离组织，置于1%番红水溶液染5min5水洗：数次去浮色6粘片：用玻璃棒蘸取含有木质部细胞的水液，均匀涂布在载玻片上，将载玻片平放于摊片盘中，置于36°C温箱中烘干7封片：二甲苯过一遍，加拿大树胶封片生物制片1临时制片法：制作用于临时观察，不需要长期保存(临时装片徒手切片冰冻切片木材切片)2永存片制片法：制片可长期保存（石蜡切片半薄切片徒手切片、木材切片超薄切片）切片法徒手切片石蜡切片半薄切片冰冻切片振动切片滑走切片超薄切片非切片离析法涂片法、压片法整体制片法扫描电镜样品制备染色的染料果胶质：钌红染色法—胞间层染成红色纤维素：氯化锌-磺液法—蓝紫色；碘-磷酸法—深紫色木质素：间苯三酚—红色；苯胺反应法—鲜黄色；番红法—红色角质和栓质：苏丹III（IV）--红色；磺-氯化锌—黄色或浅褐色变为紫红色检查淀粉等的试剂淀粉：碘-碘化钾溶液—蓝色脂肪：苏丹III（IV）--脂肪被染成黄色至红色菊糖：1、1d2%a-萘酚95%乙醇+1d浓硫酸---紫色反应2、15%~20%麝香草酚乙醇+1d浓硫酸---红色反应蛋白质：汞-溴酚蓝法—蛋白质鲜蓝色；碘-碘化钾—蛋白质黄色，淀粉蓝色透射电子显微镜的特点1、使用电子束作为光源2、使用电磁场作为透镜3、电镜标本需制作成厚度约50mm的超薄切片。扫描电子显微镜的特点1能够直接和多角度观察样品表面的结构2样品制备过程简单，不用切成薄片3景深大，图像富有立体感4图像的放大范围广，分辨率也比较高5在观察形貌的同时，还可利用从样品发出的其他信号作微区成分分析6电子束对样品的损伤与污染程度小荧光显微镜的原理特点使用注意事项原理利用一定波长的激发光（紫外线）对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，然后再经显微镜成像系统放大来镜检。特点1光源为短波光2有两个特殊的滤光片3照明方式通常为落射式4灵敏度高注意事项1尽量缩短观察时间，避免荧光的衰减和消失2因荧光较弱，观察应在较暗的室内进行3使用遮光板防止紫外线损伤视网膜4制片过程中，尽量避免使用能产生荧光的试剂5切片不能太厚体视显微镜的特点1最大倍数仅为200倍左右2工作距离长，便于实际操作3成像为三维空间的立体视觉图像视场直径大焦深大暗场显微镜的特点原理根据光学上的丁达尔现象设计。特点利用暗视野进行观察，与明视野不同，照明光线通过暗视野聚光镜后，光线不是直接进入物镜，而是由标本表面的反射光线或衍射光线形成图像，结果背景变暗，标本发亮显微镜的常用附件游标尺目镜测微尺与镜台测微尺怎样的照片才算是好照片1一幅好照片要有一个鲜明的主题（有时也称之为题材）。或是表现一个人，或是表现一件事物，甚至可以表现该题材的一个故事情节。主题必须明确，毫不含糊，使任何观赏者一眼就能看得出来2一幅好照片必须能把注意力引向被摄主体，换句话说，使观赏者的目光一下子就投向被摄主体3一幅好照片必须画面简洁，只包括那些有利于把视线引向被摄主体的内容，而排除或压缩那些可能分散注意力的内容。石蜡制片的过程。取样（材料的选择和分割）固定保存-冲洗、染色（整染）-脱水（各级乙醇，低浓度—高浓度)-透明（透明剂，低浓度—高浓度）-浸蜡（低浓度—高浓度）-包埋（石蜡包埋剂）-切片（旋转切片机）-展片、粘片---烘片---脱蜡（脱包埋剂石蜡）-复水（各级乙醇，低浓度—高浓度）---染色（片染）--分色（根据染色情况而定）---脱水（各级乙醇，低浓度—高浓度）---透明---镜检、封藏---烘片、观察、摄影照相机的原理影响曝光因素原理小孔成像因素1快门：控制进光时间2光圈：调节光通量快门的作用控制进光时间;影响成像清晰度不同快门速度的效果:较低的快门速度获得具有动感的模糊照片高速快门可以获得定格的动作照片数字越大,速度越快生物显微技术:利用光学系统或电子光学系统设备，观察肉眼所不能分辨的微小物态结构及其特性的技术。单纯固定液：仅含一种固定剂的固定液。混合固定液：有几种单纯固定液按一定比例混合而成。固定：也称为杀生.指用物理或化学的方法，迅速杀死新鲜的植物细胞、组织，并且尽量保持其生活的自然状态。复式显微镜：由两组或两组以上的透镜系统组成。单式显微镜：只有一个透镜的显微镜，即放大镜。感光度：（也就是ISO）指的是感光体对光线感受的能力。互易律：当光照度与曝光时间按反比互易时，如果曝光量相同，不同光圈快门组合的曝光效果也相同，这种关系在摄影曝光上称为互易律。丁达尔现象：即光的散射现象或称乳光现象，当一束光线透过胶体，从入射光垂直方向可以观察到胶体里出现的一条光亮的“通路”，这种现象叫丁达尔现象。分辨率：又叫分辨本领，是指分辨物体最小间隔的能力。景深：指在焦点所及范围内主题的最近部分到最远部分的距离。