显齿蛇葡萄总黄酮对急性酒精中毒小鼠的解酒及肝损伤的保护作用_蔡建峰

福建中医药2016年6月第47卷第3期16FujianJournalofTCMJune2016，47（3）显齿蛇葡萄总黄酮对急性酒精中毒小鼠的解酒及肝损伤的保护作用蔡建峰1，蓝文明2，魏亮龙2，黄珠萍2，刘娉娉2，陈俊毅2，许文3，黄鸣清3（1.泉州正骨医院，福建泉州362000；2.福建中医药大学中西医结合学院，福建福州350122；3.福建中医药大学药学院，福建福州350122）摘要：目的观察显齿蛇葡萄总黄酮对急性酒精中毒小鼠的解酒及肝损伤的保护作用。方法建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，随机分为正常组、模型组、显齿蛇葡萄高、中、低组、阳性药物组，比较醒酒时间、ALT、AST、GSH、SOD、MOA、ADH、ALDH的变化。结果显齿蛇葡萄总黄酮可缩短醒酒时间，提高ADH、ALDH活性，降低ALT、AST水平，增加SOD、GSH水平，减少MDA含量。结论显齿蛇葡萄总黄酮对急性酒精性肝损伤有较好的保护作用。关键词：肝损伤；酒精中毒；显齿蛇葡萄；总黄酮；抗氧化；小鼠模型中图分类号：R285.5文献标志码：B文章编号：1000-338X（2016）03-0016-02DOI:10.13260/j.cnki.jfjtcm.011141显齿蛇葡萄Ampelopsisgrossedentata（Hand2-Mazz）W.T.Wang是葡萄科蛇葡萄属藤本药用植物，文献［1-4］显示显齿蛇葡萄对感染鸭血清乙型肝炎病毒DNA水平有显著的抑制作用，对非酒精性脂肪肝、肝纤维化、四氯化碳诱导的急性肝损伤等具有良好的保护作用，但是对于急性酒精中毒的解酒作用及酒精性肝损伤的保护作用报道较少。因此，我们研究显齿蛇葡萄总黄酮解酒及抗急性酒精性肝损伤的作用，为以显齿蛇葡萄为原料，开发解酒、抗酒精性肝损伤的新药，保健食品的研发，提供实验依据。1仪器与试药1.1实验仪器SartoriusCPA225D十万分之一电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BH-2系统显微镜（日本Olympus公司），M200多功能酶标仪（瑞士Tecan公司）。1.2实验材料显齿蛇葡萄药材于2014年8月实地采自福建省三明市尤溪县西城镇?头村显齿蛇葡萄繁育圃，经福建中医药大学药学院范世明高级实验师鉴定为葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄Am-pelopsisgrossedentata（Hand2Mazz）W.T.Wang干燥叶。凯西莱（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；盐酸纳洛酮（百灵威科技有限公司）；56%酒精（v／v）采用56°红星二锅头（北京红星酿酒总厂）；ALT、AST、SOD、TG、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）试剂盒（南京建成生物工程研究所）；乙醇脱氢酶（ADH）、乙醛脱氢酶（ALDH）活性测试试剂盒收稿日期：2016-03-10基金项目：福建省大学生创新创业训练计划项目（201510393021）作者简介：蔡建峰（1987—），男，药师，主要从事药械管理和中草药质量研究。通讯作者：黄鸣清（1980—），男，副教授。Email：[e-mail]（上海西唐生物科技有限公司）。1.3实验动物SPF级雄性昆明种小鼠120只，体质量（20±2）g，福建中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（沪）2012-0002。2实验方法2.1显齿蛇葡萄总黄酮制备根据文献［5］，取显齿蛇葡萄干燥叶100g，用30倍量60%乙醇超声提取2次，每次28min，提取液浓缩干燥制备显齿蛇葡萄总黄酮提取物，实验时用生理盐水配制成16、32、48mg／mL（每mL含生药0.05、0.1、0.15g）的低、中、高3个剂量，备用。2.2阳性对照药物配制称取凯西莱100mg，实验时用生理盐水配制成500mg／mL备用。称取盐酸纳洛酮100mg，实验时用生理盐水配成50mg／mL备用。2.3显齿蛇葡萄解酒作用模型的建立及给药方法参考文献［6］的造模方法，SPF级雄性小鼠60只随机分成模型组、显齿蛇葡萄160mg／（kg／d）组（低剂量组）、显齿蛇葡萄320mg／（kg／d）组（中剂量组）、显齿蛇葡萄480mg／（kg／d）组（高剂量组）、盐酸纳溶酮5mg／（kg／d）组（阳性药物组），每组12只。每组用56%酒精20mL／（kg／d）灌胃造模，酒精灌胃后，显齿蛇葡萄低、中、高剂量组分别灌胃给药，阳性药物组腹腔注射盐酸纳洛酮，观察各组小鼠活动状况，以翻正反射消失时间为醉酒潜伏期，翻正反射恢复时间为醒酒时间。2.4小鼠急性酒精性肝损伤模型的建立及给药方法参考文献［7］的造模方法，SPF级昆明种雄性小鼠60只，随机分为正常组、模型组、显齿蛇葡萄160mg／（kg／d）组（低剂量组）、显齿蛇葡萄320mg／（kg／d）组（中剂量组）、显齿蛇葡萄480mg／（kg／d）组（高剂量组）、凯西莱50mg／（kg／d）组（阳性药第3期蔡建峰等：显齿蛇葡萄总黄酮对急性酒精中毒小鼠的解酒及肝损伤的保护作用17物组），每组10只，造模连续10d，除了正常组外，每组给56%酒精15mL／（kg／d）灌胃造模，正常组给等体积的生理盐水，每日1次。自造模第1天起，治疗组每日按照10mL／kg灌胃给予相应药液。于末次灌胃后禁食12h后，进行取材和生化指标检测。摘眼球采血，3500r／min离心10min，分离血清，按照试剂盒方法检测ALT、AST。采血后处死动物，剖腹取肝脏左叶，按照试剂盒方法制作肝脏匀浆并检测SOD、GSH、MDA及肝脏乙醇脱氢酶（ADH）和乙醛脱氢酶（ALDH）活性。2.5统计学处理数据用x±s表示，用SPSS16.0软件进行分析，组间比较用单因素方差分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。3实验结果实验结果见表1～表4。表1显齿蛇葡萄对急性酒精中毒小鼠模型的解酒作用（x±s）组别小鼠剂量／醉酒潜伏醒酒时间／h／只（mg／kg）期／min模型组9—14.7±5.15.3±1.7阳性药物组10526.6±12.91）3.9±1.12）低剂量组1016018.4±7.34.6±0.9中剂量组932018.6±9.33.9±1.12）高剂量组1148021.1±8.42）3.8±0.92）注：与模型组比较，1）P＜0.01，2）P＜0.05。表2显齿蛇葡萄对急性酒精性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST的影响（x±s）组别小鼠剂量／ALT／KUAST／KU／只（mg／kg）正常组10—25.2±4.327.5±4.7模型组10—47.5±7.91）50.7±7.91）阳性药物组105021.8±9.12）29.7±4.32）低剂量组1016037.6±3.63）39.1±6.23）中剂量组1032035.6±4.13）37.8±7.63）高剂量组1048032.6±7.53）34.2±6.13）注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01，3）P＜0.05。表3显齿蛇葡萄对急性酒精性肝损伤模型小鼠肝脏GSH、SOD、MDA的影响（±s）x组别小鼠／只剂量／（mg／kg）GSH／（mg／gprot）SOD／（U／mgprot）MDA／（nmol／mgprot）正常组10—4.8±0.8164.4±14.54.6±0.8模型组10—2.6±0.61）72.4±12.31）7.7±1.31）阳性药物组10503.6±0.63）121.4±33.43）4.7±0.52）低剂量组101603.4±0.63）112.2±26.23）5.3±0.73）中剂量组103203.5±0.53）126.3±34.43）5.7±1.23）高剂量组104803.7±0.73）131.7±25.32）6.0±0.82）注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01，3）P＜0.05。表4显齿蛇葡萄对急性酒精性肝损伤模型小鼠肝脏ADH、ALDH的影响（x±s）组别小鼠剂量／ADH／ALDH／／只（mg／kg）（U／mgprot）（U／mgprot）正常组10—21.4±3.119.6±1.8模型组10—35.8±5.01）32.5±5.21）阳性药物组105040.8±4.038.9±3.22）低剂量组1016036.2±4.735.0±5.6中剂量组1032038.5±5.136.2±4.1高剂量组1048044.0±5.82）39.9±4.12）脏MDA含量，提示显齿蛇葡萄总黄酮对急性酒精性肝损伤有较好的保护作用。参考文献：［1］阎莉，郑作文.藤茶双氢杨梅树皮素抗鸭乙肝病毒的实验研究［J］.中国中药杂志，2009，34（7）：908-910.［2］王俊杰，舒洋，曹欣，等.藤茶对非酒精性脂肪性肝病的治疗作用研究［J］.中国全科医学，2011，14（7B）：2248-2250.［3］欧贤红，吕林艳，郑作文.藤茶提取物抗慢性肝纤维化作用［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（3）：132-134.［4］谭沙，罗静，李建新，等.藤茶研究进展［J］.安徽农业科学，注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05。4讨论研究发现显齿蛇葡萄总黄酮在解酒方面可以有效地延长醉酒潜伏期和缩短醒酒时间，这与其提高肝脏解酒酶（ADH、ALDH）活性有关。对于急性酒精性肝脏损伤，显齿蛇葡萄总黄酮能有效降低模型小鼠的ALS、AST，增加肝脏SOD、GSH水平，减少肝2015，43（31）：71-73.［5］苏素娇，林培玲，丁春花，等.星点设计-效应面法优化藤茶总黄酮超声提取工艺［J］.福建中医药大学学报，2013，23（1）：28-30.［6］王林元，陈绍红，屈胜胜，等.巴西莓对急性酒精中毒小鼠的解酒及保肝作用研究［J］.世界中医药，2014，9（10）：1334-1337.［7］屈胜胜.巴西莓对酒精性肝损伤的保护作用及机制研究［D］.北京：北京中医药大学，2014.