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1.gain-of-function和loss-of-function是什么含义？在遗传病中（可不局限于文中涉及的几种眼科遗传病）分别举例并分析其对应致病机制加以说明。前者是功能获得型(突变)后者是功能缺失型(突变)遗传学最基本的原则机制PAX6基因的缺失2.linkageanalysis连锁分析aCGH比较基因组杂交quantitativereal-timePCR定时定量PCR原理减数分裂时同源染色体发生交换两个相邻的基因座位，距离较远，发生交换的机会较多，则出现基因重组,若两者较近，重组机会较少用不同的荧光染料分别标记肿瘤组织和正常细胞或组织的DNA制成探针，并与正常人的间期染色体进行共杂交，以在染色体上显示的肿瘤与正常对照的荧光强度的不同来反映整个肿瘤基因组DNA表达状况的变化，再借助于图像分析技术可对染色体拷贝数量的变化进行定量研究在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量意义利用被定位的疾病基因与同一染色体aCGH具有高通量、高分辨率等优点，不1.对核酸分子进行精确定量2。可以检测DNA和RNA上另一个遗传座位（多态性位点）相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体区带上仅能检测和定位肿瘤染色体的微小复杂重排，而且能对肿瘤进行分类和预后判断，极大地促进了肿瘤染色体的研究病毒局限1.连锁分析更适用于单基因疾病的遗传研究，但在对于复杂疾病的研究中，却存在很大的局限性2.对于致病性高、数量少的遗传变异具有较好的适用性，但对于中效甚至弱效的突变则显得力不从心3.在染色体上的定位通常是厘摩cM级别的，也就是百万个碱基对，这其中包含的成百上千的基因，不能精细定位常常检测出大量临床意义不明的CNVs，增加了结果解释的困难，而且也增加了芯片制造、质量控制及检测的费用CGH技术所能检测到的最小的DNA扩增或丢失是在3-5Mb,故对于低水平的DNA扩增和小片段的丢失会漏检。此外在相差染色体的拷贝数量无变化时，CGH技术不能1.敏感度问题，适用于扩增序列专一的体系的检测。2.。所选用的标准品必须与目的基因的扩增效率一致，要达到这个要求，需要标准品同目的基因的同源性尽可能的高，不仅长度相似，而且其碱基组成也尽量相同3。4、存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量检测出平等染色体的易位（就是姐妹染色单体同源序列的互换）。3·1）AD2）这四种病均有虹膜缺失或虹膜粘连的症状。根据文献中对PAX6的介绍：这是一个有22K碱基对的基因。其翻译产物可与眼组织的生长发育有密切联系。一旦缺失或突变可致多种眼部残疾（包括无虹膜）。为了保证对照组的虹膜正常，所以排除这四种疾病。3）定位克隆是将遗传病或发育异常畸形与相关表型之间，和由这些突变失活的基因所编码的特定蛋白质之间联系起来，而提供的一种基因定位克隆方法。排除之后才能有直接的联系，避免干扰。4.这是DNA片段的命名。D表示DNA；数字11表示DNA片段所在染色体的位置；第三部分表示用探针检测到的DNA片段的复杂程度，S表示这是一条独一无二的DNA片段，而Z表示在一个单一位置重复出现的DNA片段；第四部分的数字为了区分不同的DNA片段的编号。在此实验中这六个点在基因的定位中发挥着遗传标记的作用。根据孟德尔分离率，如果同一染色体上的位点不连锁，那么遗传标记将独立于致病基因而分离，与致病基因位于同一单倍体或不同单倍体的机会各占一半，否则表明连锁的存在。5.lod值是用来判断两个基因座是否在染色体上距离很近，是否可能一起遗传的统计学评估。它根据两个非此即彼的假设，计算数据的整体或然性，以确定两个基因座或是按一定的重组率而相互连锁的可能性或是互不连锁的可能性；这两种可能性之比，是基因座实际上为连锁的可能性通常判定连锁关系是以Lod值大小为依据。Lod值为0，意味着连锁假设与不连锁假设的可能性相等；Lod值为正值，有利于连锁；Lod值为负值，表示有一定重组率的连锁。显著的域值是+3和－2。Lod=+3时，连锁的概率为95%。lod值是连锁分析很重要的一个指标，而连锁分析应用被定位的基因与同一染色体上另一基因或遗传标记相连锁的特点进行定位。本实验中，在11号染色体短臂上每隔5cM做6个微卫星标记点，再根据lod数值以及单倍型分析，确定基因位置。6.常染色体显性遗传。我认为合理，因为实验为精确的测序，结果各患者之间也很相似，波动并不很大。为了进行对照，患病者ELP4的相对量只有正常人的一半，从而验证基因的缺失。7、杂合性缺失；实际就是杂合子，一对染色体上某一个染色体上基因缺失，与之配对的染色体上仍然存在。原因可以是拷贝数的缺失，可以是单亲二倍体（UPD），前者涉及到拷贝数的变化，后者没有拷贝数的变化。某些视网膜母细胞瘤患者基因突变是由于13q14.1-q14.2区域缺失或易位。这些患者其他组织或正常组织细胞中许多基因座是杂合的，但相同基因座在肿瘤组织中却是纯合的，所以肿瘤组织中DNA样本只含一对13号同源染色体中一条染色体上的等位基因，表现出杂合性丢失或缺失基因的完全表现，在遗传性视网膜母细胞瘤中，这个缺失或获得保留的异常13号chr基因往往从其患病的双亲中遗传而来。8、拷贝数变异；是一种大小介于1kb至3Mb的DNA片段的变异，在人类基因组中广泛分布，其覆盖的核苷酸总数大大超过单核苷酸多态性的总数，极大地丰富了基因组遗传变异的多样性。目前已经发现的拷贝数变异疾病可分为三大类：生殖细胞遗传CNVs，在父母中即存在；新生的获得性CNVs，父母中未发现的；体细胞性CNVs，在胚胎单细胞时期之后发生。其中生殖细胞性CNVs和新生CNVs与很多疾病相关9、aCGH结果显示PAX6基因下游566kb基因缺失，包括双倍肾上腺皮质激素区域包含因子1(DCDC1)，DnaJ同系物亚族C成员24(DNAJC24)，IMP1内部线粒体细胞膜(IMMP1L)，以及延长因子蛋白4(ELP4)四个基因。实时定量PCR通过针对和PAX6的引物进行，通过结果判断PAX6与先天性无虹膜家系的联系，而由结果可知受影响的人的ELP4值仅为正常人的一半，由此验证，PAX6缺失的基因与先天性无虹膜有关。10、连锁分析,是基于家系研究的一种方法,是单基因遗传病定位克隆方法的核心。连锁分析是利用连锁的原理研究致病基因与参考位点(遗传标记)的关系。它是利用遗传标记在家系中进行分型(Genotyping)，再利用数学手段计算遗传标记在家系中是否与疾病产生共分离。在本研究中，通过对中国西南部的一个大家族进行研究，建立家系系谱图，对该疾病进行归类分型，最终得到常染色体显性的结果。可能的影响因素：家系的大小、世代的多少、患者的多少、误诊率、外显率、疾病基因频率等。10.是利用遗传标记在家系中进行分型(Genotyping)，再利用数学手段计算遗传标记在家系中是否与疾病产生共分离。连锁分析是利用连锁的原理研究致病基因与参考位点(遗传标记)的关系。影响：该遗传病是否为单基因遗传病；遗传标记的选择；是否完全外显