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EcoRIGAATTCCTTAAGV2010.07运输温度：-20℃保存温度：-20℃TaKaRaCode：D1040A包装量：4,000Units附带试剂：10×HBuffer500μl10×LoadingBuffer500μl纯度：1）OverdigestionTest：≥12Units2）Ligation-RecuttingTest：LigationEffi.：100%,RecuttingEffi.：100%3）pKF3CloningTest：＜2%●酶贮存液：10mMTris-HCl,pH7.5100mMKCl0.1mMEDTA1mMDTT0.15%TritonX-1000.01%BSA50%Glycerol●起源：EscherichiacoliRY13●一般反应体系：EcoRI1μl10×HBuffer2μlDNA≤1μg灭菌水upto20μl●反应温度：37℃●活性确认：在50μl反应液中，37℃温度下反应1小时，将1μg的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。●纯度检测：1）OverdigestionTest：在1μgDNA中加入过量的该限制酶，进行长时间（24小时）酶切反应，然后进行琼脂糖电泳，确认切出的DNA片段的电泳谱带不发生变化。2）Ligation-RecuttingTest：在经过10倍量该酶切出的DNA片段中，加入T4DNALigase，使其连接，然后再使用该酶进行切断反应，判断Ligation-Recutting效率。3）pKF3EnforcementCloningTest：使用10倍量的该酶，将EnforcementCloningVectorpKF3DNA切开，然后再进行连接后，转化至TH2感受态细胞中，判断该酶切位点受到影响的重组体所占的比率。●在各种UniversalBuffer中的相对活性：●各种DNA的切断数：●甲基化的影响：根据识别序列后续碱基的不同，有时受CGmethylase影响。●Star活性：高甘油浓度、Mn2+存在、低离子强度条件下，识别序列会发生变化。如果在反应液中添加Spermine（0.2mM左右），活性降低20～30%，但可以抑制30～50%的Star活性。●BasalBuffer组成：100mMTris-HCl,pH7.57mMMgCl250mMNaCl7mM2-Mercaptoethanol0.01%BSA●UniversalBuffer组成（-20℃保存）：1.10×L100mMTris-HCl,pH7.54.10×K200mMTris-HCl,pH8.5100mMMgCl2100mMMgCl210mMDithiothreitol10mMDithiothreitol2.10×M100mMTris-HCl,pH7.51000mMKCl100mMMgCl25.10×T330mMTris-Ac,pH7.910mMDithiothreitol(BSA100mMMg-Ac500mMNaCl－Free)5mMDithiothreitol3.10×H500mMTris-HCl,pH7.5660mMK-Ac100mMMgCl26.0.1%BSA10mMDithiothreitol7.0.1%TritonX-1001000mMNaCl●10×LoadingBuffer组成（开封后室温保存）0.9%SDS50%Glycerol0.05%BromophenolBlue使用时添加反应液量的1/10，即可停止反应，进行电泳。-20℃保存时，会出现SDS沉淀，请于温水浴中溶解后使用。在室温下保存时，SDS有时也会出现沉淀，此时同样请在温水浴中溶解后使用。LMHKT(+BSA)相对活性(%)(20)(100)100(120)(80)λAd2SVφXpBRpUCpUCM13Col4017432219119mp18E1551011111