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（二）不染色标本检查法和染色标本检查法不染色标本染色标本单染色复染色特殊染色鞭毛、芽孢、荚膜革兰染色、抗酸、albert动力观察载玻片细菌悬液盖玻片（1）压滴法1.不染色标本检查法（2）悬滴法镜检盖玻片细菌悬液凹玻片2.染色标本检查法细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。革兰氏染色（Gramstain)原理：步骤：意义：鉴别细菌选择抗菌药物研究细菌致病性结晶紫1min卢戈碘1min95%乙醇30s稀释复红30s革兰染色革兰染色结果油镜下模式图×1000结果：革兰阳性（G＋）菌呈蓝紫色革兰阴性（G－）菌呈红色原理：（1）细胞壁结构：成分、肽聚糖层数等（2）等电点：G＋等电点低，带负电荷多，与带正电荷的结晶紫结合牢固革兰染色的临床意义：（1）鉴别细菌（2）指导临床选择药物（3）与细菌的致病性有关（3）抗酸染色法鉴别：抗酸性杆菌和非抗酸性杆菌步骤：固定标本苯酚复红加温染色盐酸乙醇脱色亚甲蓝复染结果：抗酸性杆菌染成红色非抗酸性杆菌染成蓝色（4）特殊染色法鉴别：细菌的荚膜、芽胞、鞭毛及细胞壁、异染颗粒等的染色☆电子显微镜•适用于专性厌氧菌培养。•厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。常用的生化试验1、吲哚试验（Indoltest）：含有色氨酸酶的细菌（如大肠杆菌、变形杆菌等）可分解色氨酸生成吲哚，若加入二甲基氨基苯甲醛，与吲哚结合，形成玫瑰吲哚，呈红色，称吲哚试验阳性。2、甲基红试验：产气杆菌使丙酮酸脱羧后形成中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性，大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液呈酸性pH＜5.4，指示剂甲基红呈红色，称甲基红试验（Methylredtest,MR）阳性。3、V-P试验：大肠杆菌与产气杆菌均分解葡萄糖⊕，为区分两菌可采用VP试验及甲基红试验。产气杆菌能使丙酮酸脱羧、氧化（在碱性溶液中）生成二乙酰，后者可与含胍基的化合物反应，生成红色化合物，称VP阳性。大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，VP阴性。4、枸橼酸盐利用试验（Citrateultiliazationtest）:能利用枸橼酸盐作为唯一碳源的细菌如产气杆菌，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，同时分解培养基的铵盐生成氨，由此使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝（BTB）由淡绿转为深蓝，此为枸橼酸盐利用试验阳性。•吲哚（I）、甲基红（M）、VP（Vi）、枸橼酸盐利用（C）四种试验，合称之为IMViC试验，用以将大肠杆菌与其形状十分相近的肠杆菌属的细菌鉴别开来。吲哚试验甲基红试验V.P.试验枸橼酸盐利用大肠杆菌++--产气杆菌--++IMViC试验：