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海南医学院免疫学与微生物学教研室牛莉娜目的要求1.掌握：（1）病原菌的常规分离与鉴定方法原则和常用的检测细菌抗原的方法。（2）人工自动免疫和人工被动免疫的概念。（3）常用生物制品的概念和特点。（4）细菌标本的采集与送检的主要原则。2.熟悉：抗菌药物的主要作用机制。3.了解：临床感染性疾病用药的基本原则及检测细菌对药物敏感性的常用方法。（一）标本的采集与运送原则一.病原菌检测第一节细菌感染的诊断1.早期采集2.无菌采集3.正确采集标本4.尽快送检5.标本做好标记（二）细菌分离培养与鉴定细菌培养生化试验血清学鉴定药物敏感试验形态学检查动物试验1、形态学检查不染色的标本——观察细菌大致的外表轮廓以及有无动力染色的标本——细菌形态学的观察单染法——只显示细菌的形态与排列复染法——可观察细菌的形态及其染色特性革兰染色（Gram’stain)——最常用最重要的分类鉴别法抗酸染色（Acid-faststain)特殊染色法——荚膜染色、芽胞染色、鞭毛染色、异染颗粒、负染法霍乱弧菌、螺旋体脑膜炎奈瑟菌（革兰染色）结核分枝杆菌（抗酸染色）直接涂片染色镜检2、细菌培养按不同目的把标本接种在普通琼脂平板、血液琼脂平板或选择培养基，以获得细菌的纯培养。3、生化试验糖类代谢糖发酵试验VP试验（Vi）甲基红试验（M）枸橼酸盐利用试验（C）蛋白质代谢靛基质（吲哚）试验（I）硫化氢试验尿素分解试验4、血清学鉴定已知抗体（抗血清）待检抗原（未知菌）直接法——玻片凝集试验（定性试验）原理：血清学诊断双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高≥4倍者方有意义种类：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。(抗原→未知抗体)标本：凝集试验：肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等沉淀试验：梅毒VDRL、RPR试验等中和试验：抗“O”试验等补体结合试验：Q热柯克斯体抗体检测等5、动物试验主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等6、药物敏感试验纸片琼脂法测量抑菌环直径第二节细菌感染的特异性预防生物制品：人工免疫的免疫原、免疫血清、细胞制剂及诊断制剂的生物性制剂。人工免疫：采用人工方法将疫苗、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主体的抗病能力。主动免疫自然免疫患病、隐性感染人工免疫疫苗、类毒素被动免疫自然免疫胎盘、初乳人工免疫抗毒素、丙球人工主动免疫(artificialactiveimmunity)：将疫苗或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施。作用：预防人工主动免疫主要生物制品：死疫苗活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗核酸疫苗类毒素（1）死疫苗(killedvaccine)是用物理、化学方法杀死病原微生物，但仍保持其免疫原性的一种生物制剂。如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。（2）活疫苗（livingvaccine）是通过独立变异或人工选择法而获得的减毒或无毒株，或从自然界直接选择出来的弱毒或无毒株经培养后制成的疫苗。BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。人工主动免疫活疫苗与死疫苗的区别区别点活疫苗死疫苗制品特点减毒或无毒的疫苗死菌，仍保持免疫原性制备方法通过非正常培养得到减毒株通过物理或化学方法使病原体失活接种次数和接种量1次，量小2~3次，量大接种反应可在体内增殖，类似轻型感染或隐性感染在体内不增殖，可出现发热、全身或局部肿痛等反应免疫应答的类型体液免疫和细胞免疫体液免疫免疫维持时间1~5年或更长0.5~1年毒力回升与安全性有可能，对免疫缺陷者有危险不可能，安全性好疫苗的稳定性相对不稳定相对稳定保存不易保存，4℃存活2周，真空冻干可长期保存易保存，4℃可保存1年以上（3）基因工程疫苗：目的基因原核或真核细胞基因产物（如乙肝疫苗）（4）重组载体疫苗：蛋白质抗原基因减毒的病毒或细菌基因整合基因产物疫苗转入培养表达导入人工主动免疫（5）亚单位疫苗：除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。如脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌表面的特异性多糖+吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。（6）DNA疫苗：即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的T细胞，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。人工主动免疫抗毒素丙种球蛋白(麻疹、甲肝、脊髓灰质炎)人工被动免疫(artificialpassiveimmunity)注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，作用及时。作用：治疗，紧急预防主要生物制品：人工被动免疫区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等接种次数1~3次1次免疫出现时间慢，2~4周快，立即免疫维持时间长，数年~数月短，2~3周主要用途预防治疗或紧急预防人工主动免疫与人工被动免疫的区别第三节、细菌感染的治疗思考题一、名词解释1．活菌（疫）苗2．死菌（疫）苗3．类毒素4．抗毒素5．人工被动免疫6．人工主动免疫二、问答题1．简述进行细菌学检查时对标本采集和送检过程应遵守的原则。2．列表比较人工自动免疫与人工被动免疫的区别。3．列表比较活疫苗与死疫苗的主要区别。4．简述病原菌检出的主要程序。（2）协同凝集：用SPA测脑膜炎奈瑟菌、志贺菌、沙门菌菌可溶性抗原作早期诊断。（3）免疫荧光技术（IF）：痢疾志贺菌荧光Ab→培养基+粪便标本荧光球。（4）对流免疫电泳(CIE):测脑膜炎奈瑟菌（5）免疫印迹技术（1）酶免疫技术（EIA）：淋病奈瑟菌、肠道菌检测。（三）病原菌的抗原检测（四）病原菌核酸的检测1、核酸杂交技术2、PCR技术3、基因芯片技术（genechips）