流式细胞术在临床检测上的应用

流式细胞术在临床检测上的应用（一）淋巴细胞亚群分析目前主要开展的项目：1．T/B/NK/CD4/CD8/CD4:CD82．绝对计数3．活化淋巴细胞的检测（CD69/HLA-DR/CD71）4．CD4+Th/i和CD8+Ts/c进一步区分5．Naïve/MemoryT细胞亚群检测6．Th1/Th2亚群的检测临床意义：•了解在不同情况下体内免疫功能状态•辅助临床疾病的诊断•探索疾病的发病机理、病程、预后•监测、指导临床治疗方案•免疫系统疾病，如SLE等•免疫缺陷病，AIDS•移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测•肿瘤病人化疗后免疫力检测推荐试剂：T/B/NK/CD4/CD8/CD4:CD8:试剂货号规格MultiTESTIMKKit34050350test绝对计数试剂货号规格MultiTESTIMKKitwithTruCOUNTTubes34050350test活化淋巴细胞检测试剂货号规格描述CD4FITC/CD69PE/CD3PerCP34036550test三色试剂，用于检测T,B,NK淋巴细胞群的功能CD8FITC/CD69PE/CD3PerCP34036750testCD19FITC/CD69PE/CD45PerCP34041850testCD56FITC/CD69PE/CD45PerCP34041750testCD69PE/CD3PerCP34036850test双色，可用于自选搭配γ1FITC/γ1PE/CD3PerCP34036950test双色和三色同型对照γ1PE/CD45PerCP34041650testCD2/CD2R340336250ugT淋巴细胞活化对照Naïve/MemoryT细胞亚群检测试剂货号规格CD45RAFITC/CD45ROPE/CD3PerCP/CD4APC34057150testCD45RAFITC/CD45ROPE/CD3PerCP/CD8APC34057450testCD45RAFITC/CD62LPE/CD3PerCP/CD4APC34097750testCD45RAFITC/CD62LPE/CD3PerCP/CD8APC34097850testTh1/Th2检测试剂货号规格FastImmuneCD4IntracellularIFN-rDetectionKit34097025testFastImmuneCD4IntracellularIL-2DetectionKit34097125testFastImmuneCD4IntracellularTNF-aDetectionKit34097225test（二）HLA-B27的检测HLA-B27与强直性脊椎炎（ankylosinspondylitis，AS）具有高度的疾病相关性，B27的个体的该病的相对危险率达300以上，AS病人中约95%以上的个体是B27。同时，与B27高度相关的疾病还有：莱特儿病（包括腹泻、多发性关节炎、尿道炎、结膜炎等的综合症，Reiter’disease）和急性前葡萄膜炎（acuteanterioruveitis）等，最新近研究认为还和心肌炎等心脏病有关联。BDHLA-B27Kit检测HLA-B27，报告检测的平均荧光强度，根据界值判定，得到阴性/阳性结果。实验的灵敏度为100%，特异性为97.5%推荐试剂：试剂货号规格Anti-HLA-B27Kit34018350test（三）血液学上的应用1．白血病和淋巴瘤免疫分型用流式来检测对下列情况有重要意义：•用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。•形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。•混合性白血病。•部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。•慢性淋巴细胞白血病。•微小残留白血病。2．造血干细胞计数主要应用于•PBSC采集前CD34阳性细胞动员有效性的检测•各种造血干细胞移植物的CD34+细胞计量控制•化疗强弱的掌握•贫血的鉴别（如再障，缺铁性贫血等）•基因治疗推荐试剂：试剂货号规格ProCOUNTProgenitorCellEnumerationKit34049850test3．PNH诊断阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血。利用流式细胞术和CD55和CD59单克隆抗体，对PNH患者红细胞、粒细胞和血小板进行分析，证实存在膜蛋白表达缺陷的血细胞，并计算缺陷细胞在全血中所占比例双色：CD55FITC555693CD59PE555764单色：CD55FITC555693CD59FITC555763推荐试剂：试剂货号规格双色检测：CD55FITC555693100testCD59PE555764100test单色检测CD55FITC555693100testCD59FITC555763100test4．血小板分析•血小板活化的相关检查血小板颗粒膜糖蛋白，如CD62，CD63血小板膜糖蛋白活化表位，如PAC-1临床意义：监测血小板活化相关疾病过程，抗血小板药物疗效或治疗药物的影响，预测血栓形成心肌缺血（心绞痛、心肌梗塞）与血小板活化有关预测冠状动脉成形术后发生急性缺血事件的危险性缺血性脑血管病与血小板活化有关子痫前期、外周血管疾病等均有血小板活力增加抗血小板治疗疗效监测•血小板减少性疾病网织血小板的检测特发性血小板减少症的诊断和治疗指标鉴别因血小板消耗引起的血小板减少症（如ITP）和因骨髓增生不良引起的血小板减少症（如再障）；肿瘤化疗疗效的监测；自体骨髓移植和外周血干细胞移植疗效监测推荐试剂：血小板活化试剂货号规格CD61PerCP34050650testCD62PPE348107100testPAC-1FITC34050750testMsIgG1PE349043100ugMSIgMFITC555583100test网织血小板试剂货号规格Retic-COUNTReagent349204200test（五）肿瘤早期诊断根据DNA在整个细胞周期中有规律的变化这一特点，利用核酸染料来检测。•DNA非整倍体的出现可能是癌前病变发生早期癌变的一个重要指标。•淋巴瘤、白血病在病理形态学还不能做出早期诊断之前，FCM可以提供确切的诊断信息。•DNA非整倍体的交界瘤应按恶性肿瘤对待。•形态学表现为良性的肿瘤出现非整倍体提示有恶性转变的可能。•DNA指数可作为判断间叶组织肿瘤良恶性的辅助指标。推荐试剂DNA倍体检测试剂货号规格CycleTESTPlusDNAReagentKit34024240test（六）细胞因子检测细胞因子是可溶性蛋白，在淋巴细胞免疫功能调节方面发挥重要作用。细胞因子可以调节多种细胞的生长、分化和功能，调节正常与病理状态下的免疫应答，研究生理或病理免疫调节因素所致细胞因子合成的应答与改变是研究疾病病因与免疫状态的重要工具。T细胞的细胞因子分型分为I型和II型Ⅰ型细胞介导免疫反应引起迟发过敏反应、巨噬细胞活化、2型反应下调刺激来源：病毒、某些细菌Ⅱ型体液介导免疫反应引起B细胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、1型反应下调刺激来源：多细胞寄生虫、过敏源细胞因子相关的主要研究领域•肿瘤•肾炎•感染•自身免疫病•超敏反应•移植排斥反应•免疫缺陷病•血液疾病1．胞内细胞因子检测推荐试剂试剂货号规格FastImmuneCD4IntracellularIFN-rDetectionKit34097025testFastImmuneCD4IntracellularIL-2DetectionKit34097125testFastImmuneCD4IntracellularTNF-aDetectionKit34097225testFastImmuneCD8IntracellularIFN-rDetectionKit34604925test2．血清血浆中可溶性细胞因子定量检测BD专利的CBA系统则是将液体中的可溶性成分结合在一种类似于细胞大小的颗粒上，根据夹心法的原理使用流式细胞仪对其进行定量的检测技术。与传统的ELISA方法相比：CBA所需样本体积仅为ELISA分析所必需样本量的1/6CBA的灵敏度与ELISA相当，但稳定性更好，符合细胞因子检测的国际标准（经美国NIBSC的gold标准测试）对标准品混合物做一次流式检测，就可得到样本中各种被分析物相应的标准曲线能避免由于酶联放大技术使信号失真导致的假象CBA实验时间比单次ELISA大大缩短，而且能提供需要做6次ELISA才能得到结果。推荐试剂：试剂货号规格BDCBAHumanTh1/Th2CytokineKit(IL-2,4,5,10,TNF-a.IFN-r)55074980testBDCBAHumanTh1/Th2CytokineKitII(IL-2,4,6,10,TNF-a.IFN-r)55180980test