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川芎、赤芍及其药对中有效成分的提取和含量测定一．资料综述1.川芎川芎是传统的化淤药，其主要成分为川芎嗪，它的化学结构为四甲基吡嗪（TMP）。有研究提示TMP可以通过血脑屏障，改善脑循环障碍。川芎嗪对心血管系统有强大活性，对血管平滑肌有解痉作用，对肾上腺素或氯化钾引起的主动脉收缩有明显拮抗作用。方法：用紫外分光光度法对川芎药材中总酚进行含量测定。2.赤芍赤芍为毛茛科芍药或川赤芍的干燥根，其味苦，微寒，归肝经，具有清热凉血，散瘀镇痛的功效。现代药理研究表明，赤芍具有抗肿瘤，抗肝纤维化等活性，尤其对心血管系统疾病具有良好的治疗效果。赤芍有效成分主要为芍药苷，本文针对芍药苷进行含量测定。方法：紫外分光光度法。3.川芎赤芍合用川芎和赤芍合用或单用均可明显降低血清总胆固醇，甘油三酯，低密度脂蛋白，合用还可提高超氧化物的歧化酶活性和降低丙二醛活性，在提高血管内皮细胞抗氧化能力促红细胞NO释放方面产生协同作用。二、实验原理紫外-可见分光光度法是研究物质在紫外-可见光区（200—800nm）分子吸收光谱的分析方法。紫外-可见分光光度法可以定性分析，也可以定量分析。定性分析时，可以用来鉴别具有不同官能团和化学结构的不同化合物；也可以用来鉴别结构相似的不同化合物。定量分析时，可以进行单一组分的测定；也可以对多种混合组分不经分离进行测定。用校正曲线法、对照法计算待测品溶液中待测物质浓度。川芎嗪在波长281nm处有最大吸收，芍药苷在波长232nm处有最大吸收。三、实验方法、实验内容及数据记录㈠实验方法和内容①主要药品、仪器设备：主要药品：川芎嗪标准品、芍药苷标准品（中国药品生物制品检定所）试剂：甲醇分析纯。仪器设备：UV762型紫外-可见分光光度仪（上海佑科）、1.0cm石英比色杯、SB5200DT超声波清洗仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）、电子分析天平。②实验方法：浸渍法。紫外-可见分光光度法进行定性、定量分析。㈡实验内容1.用紫外分光-光度计进行分析Ａ.川芎嗪标准品（川芎嗪对照品）的波谱扫描用移液管精密量取浓度为0.2140mg/10ml的川芎嗪标准品1ml，装入10ml容量瓶中，用50%甲醇定容后，再稀释10倍进行波谱扫描。得到川芎嗪的波谱特征图如下图，查找到最大吸收波长在281nm处。Ｂ.芍药苷标准品（芍药苷对照品）的波谱扫描用移液管精密量取浓度为0.4070mg/10ml的芍药苷标准品1ml，装入10ml容量瓶中，用50%甲醇定容后，进行波谱扫描。得到芍药苷的波谱特征图如下图，查找到最大吸收波长在232nm处。-0.0500.0000.0500.1000.1500.2000.2500.050.0100.0150.0200.0250.0300.0350.0400.0450.0Ｃ、川芎嗪、芍药苷的波谱比较2.原药材中有效成分的提取以及供试品溶液的制备：川芎中川芎嗪的提取方法：使用分析天平精密称取川芎粉末2.0309g、5.0788g，分别置于标号为①、②的250ml具塞锥形瓶中，均加50%的甲醇溶液50ml，称重，浸渍12h，超声30min，温度40℃，称重，补足减失量，精滤,取续滤液定容至50ml。用1ml移液管精密量取续滤液①②中川芎嗪样品1ml置于10ml容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，依次编号①②，再将①②继续稀释10倍，编号为①②，即得稀释100倍的川芎待测液。赤芍中芍药苷的提取方法：使用分析天平精密称取赤芍粉末2.0149g、4.9794g，分别置于标号为③、④的250ml具塞锥形瓶中，均加50%的甲醇溶液50ml，称重，浸渍12h，超声30min，温度40℃，称重，补足减失量，精滤，取续滤液定容至50ml。用1ml移液管精密量取续滤液③、④中芍药苷样品1ml置于10ml容量瓶中，依次编号③、④，用50%甲醇定容，即得芍药苷稀释10倍待测品。再将稀释10倍的③、④待测液继续稀释10倍，即得稀释100倍的芍药待测液③、④，再将稀释100倍的④继续稀释10倍，即得稀释1000倍的④号待测液。药对中川芎嗪、芍药苷的提取方法：使用分析天平精密称取药对㈠川芎0.9914g、赤芍1.0051g,药对㈡川芎2.4938g、赤芍2.5045g,分别置于标号为⑤、⑥的250ml具塞锥形瓶中，均加50%的甲醇溶液50ml，称重，浸渍12h，超声30min，温度40℃，称重，补足减失量，精滤，取续滤液。用1ml移液管精密量取续滤液⑤、⑥中药对样品1ml置于10ml容量瓶中，依次编号⑤、⑥，用50%甲醇定容，即得药对稀释10倍待测品，再将稀释10倍的⑤、⑥待测液继续稀释10倍，即得稀释100倍的药对待测液⑤、⑥，再将稀释100倍的⑥继续稀释10倍，即得稀释1000倍的号待测液⑥。3.川芎嗪、芍药苷标准曲线的制备：川芎嗪标准曲线的制备：川芎嗪标品C=0.2140mg/ml,分别吸取2ml、2.5ml、4ml、4.5ml、5ml标品置编号为①②③④⑤的10ml容量瓶中，用50%甲醇定容置刻度，于紫外分光光度计中检测，得川芎嗪标准曲线，数据记录和标准曲线如下：序号样品名称吸取量（ml）浓度（μɡ/ml）吸光度（Abs）①2.04.280.2202②2.55.350.2983③4.08.560.4904④4.59.360.5095⑤5.010.70.600川芎嗪标准曲线y=0.0568x-0.0141R2=0.98920.0000.1000.2000.3000.4000.5000.6000.7000.00002.00004.00006.00008.000010.000012.0000浓度（ug/ml）吸光度吸光度线性(吸光度)川芎嗪标准曲线的制备：芍药苷标品C=0.4070mg/ml，分别吸取,1.8ml、2.0ml、2.3ml、2.5ml、3ml标品置编号为①②③④⑤的10ml容量瓶中，用50%甲醇定容置刻度，于紫外分光光度计中检测，得芍药苷标准曲线，数据记录和标准曲线如下：序号样品名称吸取量（ml）浓度（μɡ/ml）吸光度（Abs）1①1.87.32600.1972②2.08.14000.2483③2.39.36100.2644④2.510.10000.3215⑤3.012.21000.384四、数据记录与处理：数据记录如下：样品编号样品名称样品质量（g）波长（nm）吸光度（Abs）样品稀释倍数样品浓度（ug/ml）①川芎2.03092810.2961005.4717②川芎5.07882810.70710012.645③赤芍2.01492320.93510026.231④赤芍4.97942320.207100010.075⑤药对川芎、芍药川：0.9914赤：1.00512810.3511006.43522320.60717.780⑥药对川芎、芍药川：2.4938赤：2.50452810.76910013.7322320.474100014.361数据处理如下：根据数据记录结果，计算样品中有效成分川芎嗪、芍药苷的含量，并计算有效成分的提取率。①：原样品中川芎嗪含量：m=50C×100×1ml=50×5.4717ug/ml×100×1ml=0.02735g提取率：W=0.02735g/2.0309g×100%=1.35%②：原样品中川芎嗪的含量：m=50C×100×1ml=50×12.645ug/ml×100×1ml=0.063g提取率：W=0.063g/5.0788g×100%=1.2%③：原样品中芍药苷含量：m=50C×100×1ml=50×26.231ug/ml×100×1ml=0.131g提取率：W=0.131g/2.0149g×100%=6.5%④：原样品中芍药苷含量：m=50C×1000×1ml=50×10.075ug/ml×1000×1ml=0.503g提取率：W=0.503g/4.9794g×100%=10.1%⑤：药对中川芎嗪含量：m=50C×100×1ml=50×6.4352ug/ml×100×1ml=0.0322g提取率：W=0.0322g/0.9914g×100%=3.2%药对中芍药苷含量：m=50C×100×1ml=50×17.780ug/ml×100×1ml=0.0889g提取率：W=0.0889g/1.0051g×100%=8.8%⑥：药对中川芎嗪含量：m=50C×100×1ml=50×13.732ug/ml×100×1ml=0.068g提取率：W=0.068g/2.4938g×100%=2.7%药对中芍药苷含量：m=50C×1000×1ml=50×14.361ug/ml×1000×1ml=0.718g提取率：W=0.718g/2.5045g×100%=28.7%五、结果分析：编号原药材质量（g）有效成分名称有效成分含量（g）提取率①2.0309川芎嗪0.027351.35%②5.0788川芎嗪0.0631.2%③2.0149芍药苷0.1316.5%④4.9794芍药苷0.50310.1%⑤0.9914川芎嗪0.03223.2%1.0051芍药苷0.08898.8%⑥2.4938川芎嗪0.0682.7%2.5045芍药苷0.71828.7%根据表中结果①②⑤⑥比较，川芎单用量少时，川芎嗪提取率1.35%混合量少川芎嗪提取率3.2%；川芎单用量多时，川芎嗪提取率1.2%混合量多川芎嗪提取率2.7%；③④⑤⑥芍药单用量少时，芍药苷提取率6.5%混合量少芍药苷提取率8.8%；芍药单用量多时，芍药苷提取率10.1%混合量多芍药苷提取率28.7%。六、结论根据结果分析显示，川芎和赤芍合用有效成分分提取率比它们单用有效成分提取率高，说明它们合用可能有相互促进的作用，有助于它们各自有效成分更好的被析出与吸收。七、合理化建议⒈由于时间限制，川芎赤芍合用是否有增效的作用不能给出确切答案，建议做药理实验。⒉实验过程中所用仪器均应洗干净，多次洗涤并润洗。⒊应多做几组平行性实验，多次测量求平均值。⒋建议对有效成分进行高效液相色谱法陈测定，因为紫外法只能进行定性测量，而不能进行定量测量。