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学校教案系部:影像口腔检验系教研室：检验授课教师：第1次课授课教师职称授课日期课程名称授课对象授课类型教学手段助教2012.10.15临床检验基础检验12-1理论讲授授课内容第二章血液一般检查第二节白细胞检查学时数1教学步骤及主要内容（详细内容见课件和讲授提纲）时间安排复习旧课、引入新课白细胞计数总结及布置预习5分钟30分钟5分钟教学目的了解：白细胞计数在临床中意义。熟悉：白细胞计数质量控制、演变过程、生理功能。掌握：白细胞计数的概念、原理、参考范围、操作、计算。教学方法讲授法、演示法、分组讨论教学重点基本概念、操作方法、原理、参考范围、计算教学难点白细胞生理概况、计算、显微镜下细胞计数教材及参考书教材:《临床检验基础》（第四版）.主编：熊立凡刘成玉.人民卫生出版社.2008.参考书:《全国临床检验操作规程》（第三版）.主编：叶应妩王毓三申子瑜.东南大学出版社.2009《临床实验诊断学》.主编：孙荣武、王鸿利.上海科技出版社.2001思考题1．白细胞计数的临床意义及方法学评价?2．白细胞计数时标本采集的质量保证?3．如何减少白细胞计数的固有误差?教学内容教学活动导入：讨论血常规检查报告单上的白细胞检查第二节白细胞检查一、白细胞计数（一）、白细胞概述白细胞为球形，直径7-25um，分类有粒细胞、淋巴细胞、单核细胞。是肌体的抵御病原微生物等异物入侵的主要防线。根据粒细胞动力学原理，将细胞成熟过程划分为干细胞池、分裂池、成熟池、贮存池、循环池、边缘池。（二）、显微镜计数法原理：采用白细胞计数稀释液將全血稀释一定倍数，同时破坏红细胞和固定白细胞，充入计数板，在低倍镜下计数一定体积内的白细胞数量，经换算求出每升血液的白细胞总数。方法学评价显微镜计数法：简便易行、不需昂贵仪器，但重复性和准确性较差，受微量吸管、血细胞计数板、细胞分布、人为因素等多种情况影响。血液分析仪计数法：计数细胞数量多、速度快、易于标准化、计数精确性较高，适合大规模人群健康筛查，但需特殊仪器。某些人为因素（如抗凝不充分）、病理情况（如出现有核红细胞、巨大血小板、血小板凝集等）可干扰白细胞计数。器材和试剂1、白细胞稀释液：冰乙酸2.0ml10g/L亚甲蓝3滴加蒸馏水至100ml后混匀，过滤两次后备用。2、显微镜、改良改良牛鲍计数板、微量吸管、盖玻片、采血针（注射器）、棉球、试管。操作a.加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中b.用微量吸管吸取20μl末梢血。c.擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管2-3次（注意每次不能冲浑稀释液），混匀。d.待红细胞完全破坏，液体变为棕褐色后，再次混匀后充池，静置2-3min，待白细胞下沉。e.用低倍镜计数四角4个大方格内的白细胞数，对压线细胞按“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。计算白细胞/L=N/4×10×20×106=N/20×109式中：N：为4个大方格内白细胞总数。引入课题讲述讲述提问讲述讲述提问讲述提问讲述讲述教学内容教学活动÷4：为每大方格（即0.1μl）内白细胞平均数。×10：1个大方格的容积为0.1μl，换算成1.0μl。×20：血液的稀释倍数。×106：将μl换算成L质量保证1．计数误差（1）技术误差：规范、熟练的操作，仪器的校正、试剂的标准化和操作人责任心。1)器材：清洁、干燥，校准，合格试剂。2)标本要求：血液分析仪检测的标本要求及质量保证见表2—25。3)加盖玻片影响：WHO推荐采用“推式”法，此法较“盖式”法更能保证充液体积的高度为0.10mm。4)充池影响：①充池前充分混匀白细胞悬液，避免气泡。②充池应避免充液过多、过少、断续，避免气泡及充液后移动盖玻片。5)计数原则：计数压线细胞时，数上不数下,数左不数右。6)计数室内细胞分布要均匀：白细胞总数在正常范围内时，各大方格间的细胞数不得相差8个以上。2次重复计数误差不超过l0％。7)有核红细胞影响：外周血出现有核红细胞，可使白细胞计数结果偏高，须校正。（2）固有误差：主要是指计数域误差。是由于每次充池后血细胞在计数室内分布不同，计数域误差变异系数(CV)可随计数的细胞数量增多而减小。（3）生理状态影响：运动、劳动、冷热水浴、酷热、严寒等常出现一过性白细胞增高；一日之内白细胞数最高值与最低值可相差1倍。另外，吸烟者白细胞总数平均较非吸烟者高30％。最好在固定检查时间。2．质量考核与评价（1）经验控制（2）两差比值评价法（3）双份计数标准差评价法正常参考值成人（4-10）×109/L儿童（(8-10）109×109/L新生儿（15-20）×109/L讲述讲述讲述小结：本节概述了白细胞生成、分化、成熟的认识，并详述了白细胞计数的原理、方法计算、注意事项和临床意义。通过学习，对白细胞计数在临床检验中的作用有了进一步了解。再次强调重点授课记录: