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模式生物技术服务平台服务手册（上海南方模式生物研究中心）前言上海南方模式生物研究中心是于2000年9月成立的一家专业从事规模化遗传工程小鼠模型及相关技术研发的事业法人单位，是国家科技部“863”计划生物技术领域和上海市科委共同组建的“疾病动物模型研发基地”和“上海模式生物研究基地”之一。中心主要任务是围绕国家目标，承担国家和地方科技项目，为上海乃至全国生命科学基础研究和生物医药产业发展提供优质高效的遗传工程小鼠模型研发及相关技术服务。中心由留美学者、教育部“长江学者奖励计划”特聘教授、中科院“百人计划”和国家杰出青年基金获得者王铸钢教授领衔，聚集了一批学术造诣深、技术精湛的科研技术人才，拥有设施先进的分子生物学实验室、细胞生物学实验室、蛋白质化学实验室、病理学实验室、斑马鱼实验室、家蚕研究室、干细胞研究室、显微注射室、基因型分析实验室、开放实验室以及SPF级小鼠饲养室和装备一流的小鼠表型研究技术平台（“小鼠医院”）。中心自成立以来，相继建成了大规模遗传工程小鼠模型研发技术平台，包括转基因和/或基因剔除质粒构建技术平台、小鼠胚胎干细胞研究技术平台、胚胎显微注射技术平台、基因型鉴定及遗传育种技术平台等，形成了从基因到小鼠模型的规模化高效技术流程，每年可产出近百种各类遗传工程小鼠模型，研发效率和技术水平达到国际同类机构先进水平。为进一步提高研发效率和拓展技术服务领域，中心不断加大新技术研发力度，成功建立了高效基因同源重组技术、四倍体囊胚补偿技术、细菌人工染色体（BAC）和组织细胞特异性诱导表达的转基因技术、条件性基因剔除和基因“敲入”技术、胚胎冷冻保存复苏等一批遗传工程小鼠模型研发相关的新技术。现已形成以小鼠转基因或基因剔除技术为核心，以疾病动物模型表型分析检测、仪器设备共享、开放实验室及动物实验环境条件保障、疾病动物模型共享资源库为支撑的模式生物技术研发公共服务平台。中心成立以来已为国内高校、科研院所及生物医药研发提供了上百项的模式生物技术服务；研发了几百种模拟人类疾病或者基因缺陷的小鼠模型；主持或参与承担了多项国家重大基础性研究项目、科技支撑计划项目、863科技攻关项目、中科院“知识创新”工程、国家自然科学基金项目、上海市科研项目等国家及地方的重大科研任务；产出了一批有质量的科研论文和专利。中心在上海市科委的领导下，将不断延伸政府对我国生命科学或生物医药产业发展的资源保障和技术支持功能，努力将中心建成国际上有影响力的模式生物技术及功能基因组学的研究中心、信息中心、资源中心、人才培训中心及产业化中心。服务规范1.转基因小鼠研发服务包括从质粒构建开始和客户提供重组质粒两种方式。客户提供重组质粒时，需提供详细的质粒信息，包括序列、酶切鉴定方案、质粒线性化位点、鉴定转基因小鼠基因型的PCR引物序列和条件，同时提供1g的质粒DNA和宿主菌的相关信息，或提供甘油菌；若需委托中心构建重组质粒则需提供设计意图，包括目的基因和启动子的详细信息。中心将提供3只以上转基因首建者小鼠（转基因不导致胚胎致死的前提下）。2.基因剔除小鼠研发服务可以从打靶载体构建、胚胎干细胞同源重组和阳性克隆的囊胚腔注射三个时间点开始。若从打靶载体构建开始，客户需提供基因名称和Ensembl上的基因编号，项目完成后，中心将提供3只以上杂合子小鼠（杂合子无胚胎致死现象）；若从同源重组开始，则客户需提供甘油菌，并提供打靶载体的2种酶切鉴定方案和载体线性化位点，中心将提供85个克隆的基因组DNA，DNA重组鉴定由委托方进行，鉴定完成后将克隆编号告知，由中心完成下续的步骤；若从阳性克隆的囊胚腔注射开始，客户需提供ES细胞的培养液及培养条件，中心将注射120个囊胚，移植10只受体，并向委托方移交所有出生小鼠。3.根据委托方要求，中心保证不向任何第三方提供客户的相关研究信息，并在实验结束后销毁相关材料。4.协议签订后客户需支付50%的费用，待小鼠移交、客户确认（时间为1个月）后将余款付清。服务流程说明1．技术服务部负责推广和宣传中心的服务内容，解答客户的业务咨询；针对客户的询问要求技术服务部给予电话或者电子邮件形式的解答。2．客户提交的具体技术细节的信息咨询由技术服务部转给三个项目部解答。项目部在一周之内给予详细解答。3．确定研究方案的可行性之后，技术服务部和客户协商签订协议书，明确双方的责任、义务。4．技术服务部将具体的项目分配到三个项目部，并定期进行项目进度情况的跟踪。5．客户对项目执行过程中具体的技术问题，直接与项目部联系，由负责项目的项目部门主管给予解答。6．项目结题后，由三个项目部负责完成结题报告，技术服务部负责联系客户及安排运送小鼠，和项目有关的结题文件由双方共同签字认可。1.客户咨询过程2.详细技术细节解答过程3.项目协议签订4.项目分配并定期跟踪5.项目进展实时查询6.项目结题并运送小鼠转基因小鼠制备流程图基因剔除小鼠流程图服务项目1．制作转基因小鼠模型服务（包括重组质粒的受精卵雄原核注射和慢病毒的受精卵透明带下注射）2．制作基因剔除小鼠模型服务（包括常规基因剔除、条件性基因剔除和基因定点敲入）3．小鼠繁殖和保种服务（包括常规保种繁殖、小鼠胚胎冻存、生物净化等）4．病理技术服务（包括石蜡切片、冰冻切片的制作和常规染色等）5．成熟模型小鼠的提供（包括绿色荧光小鼠模型、人乙肝病毒基因组转基因小鼠模型、骨质疏松小鼠模型、血友病小鼠模型、多形性腺瘤小鼠模型及其它中心研发的模型小鼠）收费标准因各基因遗传操作的难易程度不同，价格面议。