氨类药物的分析

第二节芳胺类药物的分析胺类药物的基本结构有两类：芳香第一胺未被取代，而在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类。如：苯佐卡因盐酸普鲁卡因盐酸丁卡因局部麻醉药芳香第一胺被酰化，并在芳环对位有取代的芳酰胺类药物。解热镇痛药—对乙酰氨基酚局部麻醉药—盐酸布比卡因抗麻风药—醋氨苯砜一、典型药物的结构与性质（一）、对氨基苯甲酸酯类芳香第一胺未被取代，而在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类。如：1、结构基本结构与典型药物COOR2NR1H含有对氨基苯甲酸酯的结构母体COOC2H5H2N苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因COOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺，抗心率失常药。2、性质（1）、芳香第一胺特性具有芳伯氨基或潜在的芳伯氨基，可发生重氮化—偶合反应鉴别或亚硝酸钠滴定法测定含；可与芳醛发生缩合，生成希夫碱；对日光或空气中的氧较敏感，易氧化变色。2、易水解性：盐酸丁卡因分子结构中无芳香第一胺则无此特性。因分子结构中有酯键，易发生水解反应。尤其是药物受光、热或碱性条件影响，更易促进其水解。如：盐酸丁卡因水解产物—对丁氨基苯甲酸（BABA）。3、弱碱性：因分子结构中有芳香第一胺，同时，除苯佐卡因外，其脂烃胺侧链为叔胺氮原子，故游离体具有弱碱性。碱性较弱，在水溶液中不能用酸滴定液直接滴定，可在非水溶液中滴定。叔胺氮原子还能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应。（二）、芳酰胺类药物NHCR2OR1R3R4是芳香第一胺被酰化，并在芳环对位有取代的芳酰胺类药物。其共性是具有芳酰胺基，基本结构为：1、结构HONHCOCH3NHCOCH3C2H5O非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3CONH醋氨苯砜（治疗麻风病，抑制麻风杆菌）。NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因2、性质（1）水解后显芳香第一胺特性分子结构中具有芳伯氨基，在酸性溶液中易水解为具芳香第一胺的化合物，显芳香第一胺特性反应。对乙氨基酚的水解速度相对比较快。利多卡因和布比卡因在酰氨基邻位存在两个甲基，由于空间位阻影响，较难水解，所以其盐的水溶液比较稳定。（2）水解产物易酯化对乙酰氨基酚和醋氨苯砜，水解后生成醋酸，可在硫酸介质中与乙醇反应，产生醋酸乙酯的香味。（3）酚羟基的特性对乙酰氨基酚具有酚羟基，与三氯化铁发生显色反应，可与利多卡因和醋氨苯砜区别。（4）、具脂烃胺侧链，弱碱性，可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别。利多卡因和布比卡因的脂烃胺侧链有叔氮原子，显碱性，可以成盐；其叔胺还可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应，如：与三硝基苯酚试液反应生成的沉淀具有一定的熔点。对乙酰氨基酚和醋氨苯砜不具有此侧链，亦无此类反应，可以区别。（5）、与重金属离子发生反应二、鉴别试验游离碱易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。利多卡因和布比卡因酰氨基上的氮可在水溶液中与铜离子或钴离子发生配位反应，生成有色的配位化合物沉淀。沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂后呈色。（一）重氮化—偶合反应芳香第一胺类鉴别反应。分子结构中具有芳香第一胺或潜在芳香第一胺的药物，均能发生重氮化-偶合反应。ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄～猩红色萘酚OH-直接：盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺等在盐酸溶液中可直接与亚硝酸钠进行重氮化反应。与碱性β-萘酚成偶氮染料。苯佐卡因和盐酸普鲁卡因ChP（2015）[鉴别]（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录Ⅲ）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性间接：对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯。间接的意思就是需要水解酰胺基。β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。对乙酰氨基酚ChP（2015）[鉴别]（2）、取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。对氨基酚对乙酰氨基酚、HCl盐酸丁卡因中不具有芳伯氨基，无此反应，但在酸性液中与亚（乳白色）盐酸丁卡因H2NaNO硝酸钠生成N-亚硝基化合物的白色沉淀。可与芳伯氨基同类区别。具有潜在芳香第一胺的药物，经适当方法处理后，若能游离出第一胺，也可发生重氮化-偶合反应。对乙酰氨基酚的鉴别反应如下：HONHCOCH3+HCl+H2OHONH2·HCl+CH3COOHHONH2·HCl+HNO3HON+≡NCl-+2H2OHON+≡NCl-+OH+NaOHOHN=NOH+NaCl+H2O（二）、三氯化铁反应对乙酰氨基酚的酚羟基可直接与三氯化铁试剂反应成蓝紫。OHNHCOCH33+FeCl3OHNHCOCH333Fe3++3HCl蓝紫色（三）与重金属离子反应1.与铜离子反应分子结构中具有芳酰胺的盐酸利多卡因，在碳酸钠试液中，与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，此有色物转溶于三氯甲烷中显黄色。具有N-芳环取代的盐酸利多卡因，在碳酸钠溶液中与硫酸铜反应生成蓝紫色，容易转入氯仿中显黄色。盐酸普鲁卡因，盐酸丁卡因，苯左卡因等都不发生此反应。黄色蓝紫色硫酸铜盐酸利多卡因氯仿碳酸钠2、与钴离子反应盐酸利多卡因可在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。，容易转入氯仿中显黄色。亮绿色细小盐酸利多卡因H2CoCl3．羟肟酸铁盐反应棕黑色）暗棕色羟肟酸铁（紫红色羟肟酸盐酸普鲁卡因胺++FeCl3H2O24.与汞离子的反应盐酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞试液，煮沸，显黄色。对氨基苯甲酸酯类显红色或橙黄色，可与之区别。（四）水解产物的反应、3HNO）（23NOHg盐酸利多卡因对氨基苯甲酸酯类黄色红色或橙黄色具有酯的结构的本类药物，可在碱性条件下水解，利用其水解产物进行鉴别。1.盐酸普鲁卡因ChP（2015）（使湿润的红色石蕊试纸变兰色）二乙氨基乙醇对氨基苯甲酸钠油状物普鲁卡因盐酸普鲁卡因NaOH对氨基苯甲酸钠+HCl对氨基苯甲酸（白色）[鉴别方法]取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀。加热，变为油状物（水解）；继续加热，产生的蒸气（氨基醇类挥发），能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。此沉淀能溶于过量的盐酸。2.苯佐卡因ChP（2015）[鉴别方法]取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5m1，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。苯佐卡因+NaOH乙醇乙醇+I2+NaOHCHI3）（碘仿臭气，黄色（五）制备衍生物测熔点本类药物的衍生物，如三硝基苯酚衍生物、硫氰酸盐衍生物，有固定的熔点、可供鉴别。ChP2005对盐酸利多卡因、盐酸部比卡因、盐酸丁卡因采用此法鉴别。1.三硝基苯酚衍生物（1）盐酸布比卡因的鉴别取供试品0.15g，加水10ml溶解后，加三硝基苯酚试液15ml，有三硝基苯酚布比卡因的黄色沉淀析出，滤过，沉淀用少量水洗涤后，再以少量甲醇和乙醚冲洗，在105℃干燥后，依法测定熔点，其熔点约为194℃。盐酸利多卡因与三硝基苯酚生成三硝基苯酚利多卡因衍生物，其熔点约为228～232℃，熔融时同时分解。（2）盐酸利多卡因的鉴别2.硫氰酸盐衍生物盐酸丁卡因的鉴别：取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80℃干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点约为131℃。（六）氯化物的鉴别反应盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因、盐酸利多卡因的水溶液显氯化物的鉴别反应。1.取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后，滴加AgNO3试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。反应如下：Cl-+Ag+AgCl↓（白色）AgCl+2NH3·H2OAg（NH3）2++Cl-+2H2OAg（NH3）2++Cl-+H+AgCl+2NH4+2.取供试品少量，置试管中，加等量的MnO2，混匀，加稀硫酸湿润，缓缓加热，即产生氯气，能使用水湿润的KI淀粉试纸显蓝色。反应如下：Cl-Cl2↑MnO2Cl2+2KII2+2KCl（七）、紫外特征吸收光谱本类药物分子结构中均有苯环，因此具有紫外吸收光谱特征。其主要特征表现在吸收峰的位置和吸收强度上。盐酸布比卡因鉴别：取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.53～0.58与0.43～0.48。（八）、红外吸收光谱盐酸布比卡因ChP（2015）[鉴别]本品的红外光吸收图谱与对照的图谱（光谱集324图）一致。三、特殊杂质检查（一）、对乙酰氨基酚一般以硝基氯苯为原料，水解后制得对硝基酚,还原成对氨基酚，再酰化。按药典规定，除检查酸度，氯化物，硫酸盐，重金属，水分和炽灼残渣外，还需进行下列检查：1.乙醇溶液的澄清度与颜色生产工艺中使用铁粉作还原剂可能带入成品中。对氨基酚的有色氧化物在乙醇中显橙红或棕色。检查方法:取本品1.0g,加乙醇10ml溶解,溶液应澄清,无色。2.有关物质合成路线多，杂质来源主要是中间体、副产物及分解产物，如对氨基酚，对氯乙酰苯胺，0-乙酰基对乙酰氨基酚，偶氮苯，氧化偶氮苯，苯醌和醌亚胺等，以对氯乙酰苯胺为杂质对照品；检查方法：TLC。其他杂质采用参比杂质对照品法。3.对氨基酚乙酰化不完全或贮藏不当发生水解均可引入。因毒性大又使苯品产生色泽，要严格控制限量。反应原理：对氨基酚+亚硝酰铁氰化钠OH-兰色检查方法对照法取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005％）。%005.0%1000.11050%1006供试品量允许杂质存在的最大量L（二）、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查有酯键，在注射液的制备过程中受灭菌温度，时间，溶液pH值，贮藏时间，以及光线和金属离子等因素的影响，可水解成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基醇。前者长期贮藏和高温加热脱羧成苯胺，苯胺可进一步转化成有色物使注射液变黄，疗效下降，毒性增加。限量为1.2%。检查方法TLC杂质对照品法%2.1%100105.2101030%1003供试品量允许杂质存在的最大量LH2NOHOH2NOO-CO2[O]精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各10l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14∶1∶1∶4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。检出限量0.01ug,苯胺五、含量测定（一）、亚硝酸钠滴定法分子结构中具有芳香第一胺的药物（如盐酸普鲁卡因、苯佐卡因）以及水解后具有芳香第一胺的药物（如对乙酰氨基酚），在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应，可用亚硝酸钠滴定液测定含量。1.原理Cl-+22+2+++ArNH2NaNO2HClArNNNaClH2O在酸性溶液中与亚硝酸钠成重氮盐具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。NHCOR+H2ONH2+RCOOHH+△NO2+6[H]NH2