汇报B细胞迁移

关于B淋巴细胞迁移能力的探讨宋海波2005.8.15B淋巴细胞人B细胞在胚胎晚期至出生后在骨髓内分化成熟。成熟B细胞可定居于周围淋巴组织，如淋巴结的皮质区和脾的红髓及白髓的淋巴小结内。外周血中，B细胞约占淋巴细胞总数的10%～15%。B细胞分化pre-Bcell无膜表面Ig的表达，immatureBcell开始表达mIgM，如与抗原结合，形成自身免疫耐受。matrueBcell从骨髓经血液迁移至外周淋巴器官，膜表面同时表达mIgM和mIgD,mIgD的表达防止了B细胞与抗原结合后所引起的免疫耐受。activatedBcell抗原刺激后成为activatedB细胞，发生增殖和分化，膜结合Ig水平逐渐降低，而分泌型Ig逐渐增加，并可发生免疫球蛋白基因重链类别的转换。plasmacell,PC合成和分泌各类免疫球蛋白，mIg,MHCⅡ类抗原、CD19、CD20、CD21等标记消失。趋化因子和受体趋化因子吸引初期的B细胞，在各B细胞亚群的归巢和在抗原非依赖性与抗原依赖性反应阶段的定位中起重要作用DistinctgeneexpressionprofilesindifferentB-cellcompartmentsinhumanperipherallymphoidorgansYuleiShen,JaveedIqbal,LiXiao,RyanCLynch,AndreasRosenwald,LouisMStaudt,SimonSherman,KarenDybkaer,GuimeiZhou,JamesDEudy,JanDelabie,TimothyWMcKeithanandWingCChanCCL18由imDC分泌,在GC表达上调.。产生于GCDC能吸引MNZB细胞向GC运动。高表达的CCL18在GC反应的启动中特别重要。先聚集抗原到已接触抗原的pre-GCB细胞,接着与GC的DC相互作用启动和维持GC反应。CXCL10(IP-10)在GC中的表达水平升高.具有多种效果,包括刺激单核细胞和T细胞迁移CCL20表达增高在MNZcells.人naïve和memoryB细胞表达CCL20同源受体CCR6，CCL20的高表达在MNZnaïveB细胞的迁移和定位中起至关重要的作用CXCL12(SDF1)在MGZ细胞高表达。CXCL12的受体是CXCR4,存在于CD34+细胞,骨髓细胞,CD4+T细胞,B细胞,上皮细胞，内皮细胞，DC.在骨髓，基质细胞分泌CXCL12,参与造血前体细胞在胚胎发生中迁移到骨髓。外周淋巴器官的CXCL12可参与B细胞，可能有其它细胞如T细胞，浆细胞到MGZ.CCL14(HCC1)和CCL3(MIP-Iα)在MGZ高表达.CCL14可以通过也能识别CCL3的受体活化单核细胞。CCL3是清除病毒感染和先天免疫中起重要作用的促炎性细胞因子，因此，该基因在脾脏MGZ先天免疫中可能起重要作用.CXCL13和CCL5MGZandMNZ的CXCL13和CCL5在显微解剖中比在流式分选中表达上调。以前的研究证实CXCL13(BLC)在Peyer‘spatches(PP)和许多外周淋巴结的发育起重要作用，可以控制B细胞的迁移从而组成B细胞环境。CCL5(RANTES)基质相关的趋化因子，活化的T细胞，巨噬细胞，NK显示与CD44相互作用以活化MAPK途径。CCL5可能在合适的条件下,对细胞，特别是相关的MGZB细胞识别抗原信号的活化起重要作用。IL-7RαMGZ细胞高表达IL-7Rα，与其在MGZ组成中的作用相一致。除了在B细胞分化和增殖中的作用，IL-7Rα的表达也是前体细胞聚集的二级淋巴器官发育和该器官组织构成所必须的。问题一B细胞是否具有迁移能力？HumanAirwayEpithelialMonolayersPromoteSelectiveTransmigrationofMemoryTCells:ATransepithelialModelofLymphocyteMigrationintotheAirwaysLisaA.MillerandEugeneC.ButcherAMERICANJOURNALOFRESPIRATORYCELLANDMOLECULARBIOLOGYVOL.191998研究内容淋巴细胞和单核细胞积聚在支气管壁和内腔是慢性肺病的炎性症状。单核细胞来源的巨噬细胞和淋巴细胞在肺炎性反应的维持和发展中起重要作用。淋巴细胞和单核细胞黏附到血管内皮，渗透到黏膜下细胞外基质，再穿过肺上皮进入气道。淋巴细胞和单核细胞穿过上皮进入气道有着功能性意义。该细胞如何从外周血进入呼吸道？外周血分离PBMC（梯度密度离心法）1.5-2X107/毫升悬液37CBEGM预平衡/预温transwell上室：1.5-2X106/100微升37C,5%CO2,3-4h收集下室的PBMCstandardhemocytometer计数结果（流式分析）问题二B细胞有迁移能力B细胞的迁移如何进行？CD11b-mediatedmigratorypropertyofperipheralbloodBcells.KawaiK,TsunoNH,MatsuhashiM,KitayamaJ,OsadaT,YamadaJ,TsuchiyaT,YoneyamaS,WatanabeT,TakahashiK,NagawaH.JAllergyClinImmunol.2005Jul研究背景CD11b是α链整合素的成员，与β2整合素形成Mac-1复合物，在宿主防御中免疫细胞从外周血迁移道炎症部位起中心作用。CD11b不仅使免疫细胞通过ICAM-1黏附到内皮,而且通过连接多种配体（fibronectin,collagens,laminins）到达内皮下和空隙细胞外基质。最近报道中已证实CD11b表达在CD8+T细胞并在细胞迁移中起重要作用。外周血中部分B细胞表达CD11b，但其在B细胞迁移中的作用和表达CD11b的B细胞的特征尚未得到充分研究研究目的说明表达在B细胞的CD11b的功能活性研究B细胞中CD11b表达的细胞的迁移能力。外周血B细胞分类（根据IgDCD27）IgDCD27备注CB1+-naiveBcellCB2++memoryBcellCB3-+memoryBcellCB3是classicmemoryBcells,从最初表达IgM转换到表面表达IgG，IgA或IgE。尽管cB2带有机体高频突变,表达IgM，说明其是memorycells的组成细胞亚群，,但其特征和基因表达与普通的cB3有区别。活化B细胞中的一部分可分化为小淋巴细胞，停止增殖和分化，并可存活数月至数年，当再次与同一抗原接触时，很快发生活化和分化，产生抗体的潜伏期短，抗体水平高，维持时间长，这种B细胞称为记忆B细胞（memoryBcell）。研究发现，只有表达CD27的B细胞才能在有丝分裂原刺激下分泌抗体，所以CD27可以作为区分天然(naive)B细胞与抗原刺激的成熟B细胞的标志。不成熟B细胞，接触到自身抗原后便凋亡，直到它同时表达IgD时才为成熟B细胞(cB2)。成熟B细胞迁移到外周免疫器官或组织，能被抗原激活而变成抗体分泌的浆细胞或对抗原再次接触产生迅速反应的记忆细胞(cB3)，未能成功完成成熟发育的B将凋亡。分类依据研究方法外周血CD19+B细胞的分离流式分析细胞表面分子。细胞迁移试验。健康人外周血PBMCFicoll-Paque梯度密度离心法免疫磁珠分离系统CD19+B细胞FCAS：纯度97％表型分析：CD19,CD27,IgD,IgM,CD5,CD25,CXCR4,CXCR5（FITC）CD11b(PE)CD11bmAb(PE-Cy5)FCASTranswell(5μm孔)实验路线transwell一组二组三组四组五组六组上室0.2％BSA/RPMI2X105CD19+B细胞+Anti-CD19mAb(20μg/ml)0.2％BSA/RPMI2X105CD19+B细胞+Anti-CD11bmAb(20μg/ml0.2％BSA/RPMI2X105CD19+B细胞+Anti-CD19mAb(20μg/ml0.2％BSA/RPMI2X105CD19+B细胞+Anti-CD11bmAb(20μg/ml0.2％BSA/RPMI2X105CD19+B细胞+Anti-CD19mAb(20μg/ml0.2％BSA/RPMI2X105CD19+B细胞+Anti-CD11bmAb(20μg/ml下室0.2％BSA/RPMI0.2％BSA/RPMI0.2％BSA/RPMI+SDF-1α(100ng/ml)0.2％BSA/RPMI+SDF-1α(100ng/ml)0.2％BSA/RPMI+BLC(500ng/ml)0.2％BSA/RPMI+BLC(500ng/ml)4h下室B细胞EDTA加到下室（终浓度0.02％）收集B细胞FCAS迁移细胞计数CB1,CB2,CB3细胞中CD11b+细胞百分比实验结果1.CD11b+B细胞亚群CD11b在外周血表达占B细胞的30%2.CD11b+和CD11b-B细胞表面分子差别：CD11b-B细胞多为IgD+CD27-IgM+CD25-,几乎一半CD5+。可推测CD11b-大多数是cB1细胞CD11b+B细胞IgD,CD27,IgM,CD5表达为双峰，CD25表达略高，因此cB1,cB2,cB3都有CD11b+CD27：细胞成熟标志。mIgM和mIgD：不成熟B细胞表达mIgM，成熟B细胞同时表达mIgM和mIgD，抗原刺激后的B细胞mIgD很快消失CD5：区分B1,B2细胞。CD25：IL-2受体的α亚单位，表达在活化的B淋巴细胞MemoryB细胞和naiveB细胞的CD11b表达(A)大多数CD11b-B细胞是cB1(91.6%),而CD11b+细胞包含cB1,cB2,andcB3。(B)大多数cB1是CD11b-(77.4%),而大部分cB2和cB3memoryB细胞为CD11b+(71.5%and81.3%）cB3的CD11b表达显著性高于cB2.即CD11b表达水平：cB3cB2cB1注：cB1(filledbar),cB2(openbar),andcB3(shadedbar)purifiedBcells(left),CD11b-Bcells(middle),CD11b+Bcells（right）外周血B细胞的迁移A：28.3%纯化的外周血B细胞是CD11b+，而迁移的细胞主要是CD11b+（趋化因子无影响）B：CD27/IgD双染，CD27+memoryB细胞主要是迁移的B细胞。cB3占迁移细胞的40%，而cB3在迁移前的比例不到11.1%.迁移的B细胞主要是CD11b+,又以cB3为主SDF-1α和BLC显著增加了迁移细胞的数量，加入anti-CD11b阻断mAb明显抑制B细胞的迁移CD11b-和CD11b+B细胞表达CXCR4和CXCR5,分别是SDF-1α，BLC的受体,其表达水平在CD11b-和CD11b+B细胞没有差别。从以上数据可以推测是CD11b,而不是趋化因子受体在memoryB的迁移中起重要作用1证实了CD11b在外周血表达占B细胞的30%。2比较了CD11b+和CD11b-B细胞表面分子的表达,CD11b-大多数是cB1细胞.而cB1,cB2,cB3都有CD11b+3有报道MemoryB细胞比naiveB细胞迁移活性高，CD11b表达水平：cB3cB2cB1，因此，可以推测细胞表面CD11b表达对B细胞迁移起关键作用小结4研究了CD11b对B细胞迁移能力的作用。因为迁移的B细胞主要是CD11b+,又以cB3为主，CD11b特异性阻断抗体明显减少了迁移细胞的数量，所以CD11b+B细胞比CD11b-B细胞的迁移能力强。5CD11b+B细胞和CD11b-B细胞趋化因子受体的表达没有差别，而迁移受抗CD11bmAb的影响，因此，迁移的差别不依赖趋化因子受体而是依赖CD1