抗氧化性方法

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资源描述

1DPPH取0.2mL甲醇,加入0.3mL样品溶液(浓度50-800ug/mL,甲醇配制),混匀,加入2.5mL75uMDPPH(甲醇溶解)溶液,室温放置30min,于517nm处测吸光值。清除率=[A0-(A-Ab)/A0]×100%A0:不加入样品,DPPH吸光值(对照)A:样品和DPPH吸光值Ab:样品,不加DPPH吸光值2O2-·PMS吩嗪硫酸甲酯NADH烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NBT氯化硝基四氮唑蓝0.1mL样品溶液,加入1mL16mMTris-HCl(pH8.0)---78uMNADH,1mL16mMTris-HCl(pH8.0)---10uMPMS,1mL16mMTris-HCl(pH8.0)---50uMNBT,25min保温5min后于560nm处吸光值。清除率=(1-A样品/A对照)×100%。3邻苯三酚自氧化0.1mL样品溶液,加入2.8mL0.05MTris-HCl(pH8.0)---1mMEDTA,加入0.2mL6mM邻苯三酚。室温迅速振摇,于325nm处每30s测吸光值至4min。清除率=(1-样品斜率/对照斜率)×100%4FRAPreagent:10体积300mmol/LpH3.6醋酸缓冲液,1体积10mmol/LTPTZ---40mmol/LHCl溶液,1体积20mmol/LFeCl3.1.5mL新配制FRAPreagent加热至37℃,于593nm处测空白吸光值。然后加入50uL样品溶液和150uL去离子水。8min后测吸光值。FRAP值=A样品-A空白2.1清除羟基自由基(HPLC法)2.1.1色谱条件色谱柱:AngilentHC-C18柱((4.6×250mm,5um);流动相:甲醇:0.1%H3PO4=30:70;流速:1ml/min;柱温:35℃;紫外检测波长:254nm;进样量:20ul。2.1.2方法取1.5ml0.18mmol/L对羟基苯甲酸,加入1.0ml蒸馏水,1.0ml0.3%H2O2,,紫外照射30min前后进行HPLC分析计算清除率。清除率=(空白反应后3,4-二羟基苯甲酸峰面积-样品反应后生成3,4-二羟基苯甲酸峰面积)/(空白反应后峰面积-空白反应前峰面积)2.2清除超氧阴离子(邻苯三酚自氧化)0.1ml不同浓度的多糖溶液,加入5ml0.05mol/LTris-HClbuffer(pH8.2),25℃水浴10min,加入0.2ml6mmol/L邻苯三酚,摇匀后每隔30s,4min内于325nm处测吸光值。以0.1ml水代替多糖溶液,0.2ml水代替邻苯三酚作参比液,0.1ml水代替多糖溶液作对照溶液,其余同上述方法操作。清除率=(1-样品斜率/对照斜率)×100%。2.3清除DPPH反应体系:1ml浓度不同的多糖溶液,2ml0.6mmol/LDPPH,1ml95%乙醇,2m0.6mmol/LDPPH加入3ml95%乙醇作对照液,5ml95%乙醇作参比,混匀后暗处反应30min,517nm处测定吸光值。清除率=(1-A样品/A空白)2.4分光光度计法测·OHFeSO4溶液(1.8mmol/mL):称取FeSO4晶体0.2736g,用水定容于100mL容量瓶中,使用时稀释9倍H2O2(0.3%):取30%的H2O2溶液1.0mL,用水定容于100mL容量瓶中。水杨酸-乙醇(1.8mmol/mL):取水杨酸固体0.2486g,用无水乙醇定容于100mL容量瓶中,使用时稀释9倍。向试管中加入一系列不同浓度多糖溶液1.0mL,FeSO4溶液2.0mL,水杨酸-乙醇1.5mL,最后加H2O20.1mL启动反应,振荡混合,水浴37℃,保温30min,在波长510nm下测量各自的吸光值。以1.0mL蒸馏水代替多糖溶液,其余操作同上作为空白。清除率=[(A0-As)/A0]×100%A0为空白管的吸光度,As为加入样品后的吸光度。

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