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大学生创新性实验计划项目申请书项目类别：校重点项目名称：木醋液的开发利用研究申请人：李轲娜所在学院：林学院专业年级：林产化工2009级联系电话：15229291512指导教师:尉芹职称教授申请日期：2011年06月01日西北农林科技大学教务处西北农林科技大学团委制1填表说明一、填写立项申请书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。申请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。二、封面横线处填写国家级或校重点或校一般或校基地。三、申请书为A4本，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在学院审查并签署意见加盖学院印章后报送教务处实践教学科备案。四、“所在单位意见”一栏中，应注明研究人员、时间、条件、政策等方面的保证措施和意见。“项目类别”指A、B、C、D，A—学术论文、社会调查类；B—全国、省级竞赛（决赛）类；C—实验设计和科技制作、科研类；D—其他类。“项目批准号”不填，由学校统一编号。五、如表格不够，可以加附页。2一、简表项目简况项目名称木醋液的开发利用研究项目类别A、学术论文、社会调查类；B、全国、省级竞赛（决赛）类；√C、科学实验和科技制作、科研类；D、其他类。申请资助经费6000元项目起止时间2011.08——2013.4项目申请人姓名李轲娜性别女民族汉出生年月1991年4月专业年级林化2009级学院林学院前一学期综合测评名次1/30电话15229291512指导教师个人简历姓名性别民族职称出生年月研究方向尉芹女汉教授1958年12月林产化工和植物资源开发利用最后学位博士最高学历博士主要教学工作简历时间授课名称授课对象学时授课单位1984年至今树木提取物工艺学本科生林学院主要科学研究工作简历时间项目名称获奖情况2011山杏壳深度开发利用研究省部级课题2010项目组主要成员姓名性别出生年月专业年级所在学院项目分工签字董斌斌男1990年12月林化09级林学院试验操作及数据统计施金锐男1990年5月林化09级林学院数据记录秦志永男1990年12月林化09级林学院材料提取余新栋男1991年2月林化09级林学院活性检测3二、立项依据（项目的意义、现状分析）（一）研究意义木醋液是生物质热解过程中得到的一种赤褐色有机酸混合物，含有酸、醇、酚、酮等多种有机物，每热解1吨生物质，通常可生产250-300m3燃气，250-300kg固体碳，200-250kg木醋液和30-50kg木焦油，即1吨生物质热裂解的产物中四分之一为木醋液，作为生物质热裂解的重要副产物，木醋液在各行各业的用途是当前生物质热裂解工艺的关键难点。事实上，根据相关研究，发现木醋液具有促进植物生长、抑菌、除草、防腐等多种作用，并可作为除臭剂，食品、饮料、饲料添加剂，医疗保健品使用，因此木醋液在农业、林业、畜牧业、环保、化工、食品加工与医药卫生等领域均有广泛的用途。从天然植物或海洋资源中提取分离有效成分作为各种用途产品的研究开发已成为当今世界的热点之一。木醋液作为一种植物源物质，含有数量可观的有机物，是一种难得的天然化工原料。从木醋液中提取分离活性物质用于农业、食品、医药等行业，或对其进行深度加工和系列开发，制成不同用途的产品是当前木醋液开发研究的趋势，也是一项可获得巨额收入的产业。（二）现状分析木醋液在日本、韩国、美国等国家已获得广泛应用。如日本根据不同用途采取不同的精制方法得到的木醋液，作为医药原料(皮肤药等)、食品添加剂(熏液等)、染料原料(媒染剂原料)、脱臭剂(家庭用脱臭剂原料等)、农药原料(农药添加剂)、土壤改良剂(发根促进剂)等，还开辟了饮料添加剂、沐浴添加剂等用途。日本每年大约生产5万吨的木醋液，其中约有一半应用于农业生产，其作用主要是促进作物生长及控制线虫、病原菌和病毒，另一半应用于食品加工、医药保健等方面。在韩国，已把精制木醋液用于医药，并将木醋液提炼加工成为一种叫“森林饮料”的保健品。在美国，木醋液主要应用于花园园艺和林果业等方面。我国虽然在20世纪90年代开始对木醋液在农林上应用的试验与研究，开展了一系列用木醋液防治作物、蔬菜和果树病害的室内外实验，但在产品的开发研究方面进程缓慢，具有自主知识产权的产品很少，市场上基本没有商品化产品销售。目前，日本的木醋液产品已以4万元/吨的高昂价格打入中国市场。当前,国内外对木醋液的研究主要集中在其制造工艺及其应用研究方面，4对于木醋液的应用，目前尚未对木醋液进行进一步提纯分离，而仅是一种由不同有机物组成的混合物,其功能活性成分分析及其作用机理的基础研究均尚待加强。因此对于木醋液中活性物质的提取、分离及活性测定及木醋液活性物质的开发利用等方面还需进一步的研究。主要参考文献:[1]毛巧芝，赵忠，马希汉.杏树枝木醋液的制取及其抑菌活性和化学成分分分析[J]西北农林科技大学学报（自然科学版）2009年10期[2]薛桂新，陈志军，李永红.木醋液对京亚葡萄保鲜效果的研究[J]食品科技2009年34卷12期[3]尉芹,马希汉,朱卫红,张珊珊,李晓明.不同温度段苹果枝木醋液化学组成、抑菌及抗氧化活性比较[J]林业科学2009年45卷12期[4]尉芹，马希汉，郑滔.核桃壳木醋液的制取、成分分析及抑菌试验[J]农业工程学报2008年24卷7期[5]徐社阳，陈就记，曹德榕.木醋液的成分分析[J]广州化学2006年31卷3期[6]Ji-LuZheng,QinWeiImprovingthequalityoffastpyrolysisbio-oilbyreducedpressuredistillation[J]biomassandbioenergy35(2011)1804e1810[7]QinWeia,XihanMab,ZhongZhaoa,ShanshanZhanga,ShengchenLiuaJournalofAnalyticalandAppliedPyrolysis[J]88(2010)149–154[8]王海英，杨国亭，周丹，等．木醋液研究现状及其综合利用[J]．东北林业大学学报，2004，32（5）：55－59．[9]朴哲，闫吉昌，崔香兰，等．木醋液的精制及有机成分研究[J]．林产化学与工业，2003，23（2）：17－20．[10]尉芹,马希汉,徐明霞.2008.杨树木醋液的化学成分分析及抑菌试验.[J]林业科学,44(10):98-102.[11]高尚愚,钱慧娟.日本的木醋液精制和应用研究[J].林产化工通讯,1994(6):36-37.三、项目实施方案及实施计划实施方案、实施办法、具体实施计划及可行性分析。（一）实施方案：1、研究内容：（1）木醋液中抑菌活性物质的提取、分离及生物测定。以细菌、霉菌以及植物病原菌等为生测对象，采用萃取、减压蒸馏、精馏以及柱层析等方法从木醋液中提取、分离抑菌活性物质，在活性追踪的基础上，确定具有抑菌活性物质类别；（2）木醋液中抗氧化活性物质的提取、分离及活性测定。以DPPH自由基清除活性、ABTS阳离子自由基清除活性以及对铁的还原能力等为检测指标，采用萃取、减压蒸馏、精馏以及柱层析等方法从木醋液中提取、分离抗氧化活性物质，确定具有抗氧化活性物质的类别。5（3）木醋液活性物质作为植物源农药、食品防腐剂、食品保鲜剂的加工技术研究。2、研究目标：（1）确定木醋液中抑菌活性物质提取工艺；（2）确定木醋液中抗氧化活性物质提取工艺；（3）获得3-4种具有明显抑菌、抗氧化活性单体物质（二）具体实施计划及日程表第一阶段：知识储备及场地准备（2011.08-2011.09）1、查阅图书馆和网络数据库的文献资料，了解有关木醋液中活性物质提取分离的相关知识。2、集中学习并掌握萃取、蒸馏、柱层析等提取分离物质的方法。3、准备实验原料。第二阶段：提取并分离木醋液中的活性物质，并逐一测定其抑菌效果与抗氧化性（2011.09-2012.09）1、提取木醋液中的活性物质：利用干馏热解的方法,依据木材热解的理论分别在几个不同温度段收集粗制木醋液,经过静置、木炭粉吸附杂质、过滤等过程得到精制木醋液,并对其pH、有机酸含量和密度等理化性质进行测定。将木醋液原液用乙酸乙酯萃取至无色，萃取液用碳酸氢钠溶液１∶１体积比萃取至少3次，合并碳酸氢钠萃取液并调节至原木醋液ｐＨ值，以１∶１的乙酸乙酯萃取至少3次，所得萃取液经减压蒸馏、干燥得到固体即抗菌物质。将余下的溶液用碳酸钠溶液以１∶１体积比萃取至少3次，合并碳酸钠萃取液并调节至原木醋液ｐＨ值，用二氯甲烷萃取至少3次，所得萃取液经常压蒸馏、干燥得到固体即抗氧化物质。2、木醋液中活性物质的分离提纯：此过程可采用渗漉法、萃取法、蒸馏法、分液法、升华法来进行操作。3、测定活性物质的抑菌效果与抗氧化性：用滤纸片法、固体稀释法以庆大霉素作为对照,测定提取、分离出的木醋液活性物质对大肠杆菌(Escherichiacoli)、产气杆菌(Enterobacteraerogenes)、变形杆菌(Proteusvulgaris)、巨大芽孢菌(Bacillusmegaterium)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)等菌的抑制作用;以6苯唑青霉为对照,测定木醋液对黑曲霉(Aspergillusniger)、青霉(Penicilliumsp.)、绿木霉(Trichodermaviride)和康氏木霉(Trichodermakoningii)的抑制作用。抑菌效果用抑菌圈直径表示(mm)。用比照法以一般的食品防腐剂、食品保鲜剂为参照实验，以提取、分离出的木醋液活性物质为作为同一食品的食品防腐剂、食品保鲜剂，在相同的实验条件下对比其防腐、保鲜程度，并作出结论。第三阶段：研究木醋液活性物质的开发利用价值（2012年7月—2012年11月）1、植物源农药方面木醋液中的活性物质能很好地溶解农药的药性成份，其中醇类、醛类、酮类等物质分子比水分子小，能渗透到作物的叶、根等组织中去，从而更好地发挥药效，减少农药使用量、增加农药的效果。将提取出的活性物质作用于不同植物，并作对照实验,观察并记录活性物质对植物生长状况的影响。2、食品防腐剂方面防腐剂主要作用是抑制微生物的生长和繁殖，以延长食品的保存时间。防腐剂主要包括有机酸、有机酸盐等，而木醋液中有机成分包含乙酸、苯酚等天然活性有机物，因此对食品有一定的防腐效果。可以取几种不同的超市袋装或罐装食品为作用对象，以不同浓度的木醋液样品取代本有的食品防腐剂，以原食品作比较作对照，测定食品的有效保存时间。有效保存时间越长，木醋液防腐作用越好，从中选择出木醋液作为食品防腐剂的最佳浓度（忽略其他因素影响）。3、食品保鲜剂方面：保鲜剂是与食品一起包装时，能主动性吸取包装内的水分和氧作为反应物质，进行一系列复杂化合反应后，释放出抗菌气体，从而使被包装食处于无氧且抑菌环境中，使微生物失去活动、生长的环境，从面抑制微生物生长，食品得到保鲜。以不同浓度的木醋液为保鲜剂，通过浸渍处理研究不同浓度木醋液对新鲜水果（如苹果）的保鲜效果。浸渍处理后在室温(20±2)℃下贮藏，测定腐烂率、失水率、总酸、还原7糖、呼吸速率、丙二醛含量。作出一定时间后苹果腐烂率、失水率、总酸、还原糖、呼吸速率、丙二醛含量对木醋液浓度的曲线图，从中选择出木醋液作为食品保鲜剂的最佳浓度（忽略其他因素影响）。第四阶段：项目总结及撰写论文（2012年12月——2013年4月）1、回顾实施项目过程，总结记录数据及实验现象，并合理处理数据。2、根据实验结果，在老师的指导下撰写论文。（三）可行性分析：1、本课题以杏壳、核桃壳、苹果木等为原料，丰富易得。而且木醋液一般一吨价格在1000元左右，成本低廉，实用性强。2、近几十年来，木醋液中活性物质的提取已经取得了一定的成果，实验操作简单，对设备的要求不是很高。3、本课题组指导老师尉芹主要从事林木废弃物热裂解产物（木醋液和活性炭）的深度加工技术以及生物柴油的加工工艺研究，在林产化工方面有着十几年的教学与科研经验，特别是在对木醋液的制备、生物活性及化学成分研究应用方面具有丰富的专业知识，能够给予我们有力的技术和经验指导。4、本课题