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探究：培养液中酵母菌种群数量的变化探究：培养液中酵母菌种群数量的变化目的要求1、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化3、注意样方法的应用4、体会影响种群数量变化的因素1、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是:兼性厌氧(可进行有氧呼吸和无氧呼吸)回顾思考:出芽生殖3、酵母菌的培养条件要注意那些问题?比如要用适宜的温度培养,调节好PH值,溶氧量的控制等。例如：酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下呈“S”型增长。温度、养分会影响酵母菌的生长。探究：培养液中酵母菌种群数量的变化问题培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？温度会影响酵母菌的生长吗？营养成分会影响酵母菌的生长吗？作出假设根据前面所学的知识，针对这一问题作出假设：讨论探究思路探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计数板（2mm×2mm方格）、滴管、显微镜等，都由老师提供。在制订计划前，你需要思考以下问题，并与同学讨论。一、怎样进行酵母菌的计数？提示：对一支试管中的培养液(可定为10ml)中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用抽样检测的方法，用到血球计数板。介绍:血球计数板的构造1、血球计数板：可用来测量细胞，细菌等一些微小物体的长度，还有就是测量数量。血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台，中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。化放大后的方格网计数室IHGFEDCBA25×1616×252、方格网的构成：方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，计数室通常有两种规格：一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。3、使用方法:将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的盖玻片，将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内，加盖盖玻片。5、单位换算:以1mm×1mm为例，大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3，换算为mL，则0.1mm3=10-4mL。4、计数室的规格：计数室长×宽有：1mm×1mm,2mm×2mm,3mm×3mm等深度均为0.1mm。如果使用规格为16格×25格的计数室，要按对角方位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数。如果使用规格为25格×16格的计数室，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数（五点取样法）。出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。6、如何计数呢？规格为25格×16格的计数室，五点取样法7、盖玻片下的培养液厚度为0.1mm，请推算出将一个小方格范围内的酵母菌数，换算成1ml培养液中酵母菌总数的公式。每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式（以大方格1mm×1mm为例）：酵母细胞数/ml=(80小格内酵母细胞个数/80)×400/10-4×稀释倍数即：一小方格内酵母菌个数×4×106×稀释倍数课本中大方格的长和宽各为2mm，深度为0.1mm，则：每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式（2mm×2mm）：25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=(80小格内酵母细胞个数/80)×400/4X10-4×稀释倍数即：一小方格内酵母菌个数×106×稀释倍数其体积为0.4mm3，换算mL则0.4mm3=4X10-4mL。使酵母菌混合均匀。不需要，因不同时间取样已形成对照。需要。尽量减少误差。对每个样品计数三次,取其平均值。二、从试管中吸出培养液进行计数之前，建议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么？三、本探究需要设置对照吗？如果需要,请讨论对照组应怎样设计和操作，如果不需要，请说明理由。四、需要做重复实验吗？时间（d）酵母菌细胞数量（×106个/mL）A组B组C组A1A2A3平均B1B2B3平均C1C2C3平均1234567五、怎样记录结果？记录表怎样设计？.只计数相邻两边及其顶角的酵母细胞数稀释培养液。稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。八、血球计数板的清洁血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物，若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。六、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？七、对于压在小方格界线上的酵母菌，应当怎样计数？实验设计将9支试管分成ABC三组，每组3支。A组为实验组，装培养液10mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度28℃。B组装培养液10mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度5℃，与A组形成温度条件对照。C组不装培养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,环境温度28℃，与A组形成营养条件对照。实验操作：(1)、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；(2)、预先设计分装。先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培养液到A组和B组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取10mL无菌水到C组试管。待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。(3)、用高压蒸汽灭菌锅灭菌；(4)、接种菌种：用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）(5)、培养：将A、C试管置于28℃的恒温箱中培养。将B试管置于5℃的恒温箱中培养。（5℃的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定5℃时代替。）(6)、计数和记录：每天取样时间大体一致，每次每组按序号取一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进行细胞计数后，立即将数据填到记录表格中。分析结果，得出结论将所得数值用曲线图表示出来，分析实验结果是否支持你所做的假设。酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈“S”型增长，但之后会下降。温度、营养成分会影响酵母菌种群数量的变化。探究的结论：讨论：影响酵母菌的种群数量增长的因素可能是什么？除了本实验中温度、营养以外还包括酵母菌菌种本身性质、接种时间、pＨ值、接种量、溶氧量等影响因素。1．取少量酵母菌液放入血球计数板直接计数，测得的数目是（）A．活细胞数B．死细胞数C．菌落数D．细胞总数A2、探究酵母菌的种群数量实验中，某学生的部分操作过程如下：（1）把酵母菌培养液放置于冰箱中培养，（2）从静置试管中吸取酵母菌培养液计数，（3）到第七天取样计数，请纠正其错误：（1）___________________________（2）__________________________（3）_________________.该同学用25格x16格,其中长和宽各为2mm,深度为0.1mm的血球计数板计数,用五点取样法读取酵母菌有40个,其中稀释了10倍,则1ml菌液中所含的酵母菌个数为_____________应将静置改为轻轻振荡几次.应放在适宜温度下培养.应连续七天取样计数.练习:（40/80）×106×10=5×106