总脂肪的测定(三氯甲烷-甲醇法)

总脂肪的测定（三氯甲烷-甲醇法）一．原理：样品用酶液消化分解，游离出的脂肪用三氯甲烷-乙醇提取。提取液蒸发干燥后，称得的脂肪重量即为总脂肪含量。二．仪器设备：1.混合器：半微量2.消化管：50ml3.水浴锅4.离心机三．试剂：1.甲醇2.三氯甲烷3.酶液：2%淀粉酶（高峰淀粉酶）-0.5mol/L乙酸钠溶液：将25mL淀粉酶消化剂和200mL2.5mol/L乙酸钠溶液混合后，转移到1000mL容量瓶中，加水定容，混匀备用。四．操作步骤准确称取5g（精确到0.0001g）粉碎试样（如果试样粗脂肪含量＞10%，称取3g即可），装入50mL消化管中，再加入30mL酶液，混匀。将消化管及其消化液置于50℃恒温水浴锅内保温1小时，偶尔摇动一次。把分解液转入到半微量混合器中，再加入80mL甲醇和40mL三氯甲烷，扣上盖后混合2分钟；打开盖再加入40mL三氯甲烷，盖上盖继续混合30秒。转移提取液至250mL聚氯乙烯离心管中，以5000转/min的速度离心10分钟，使三氯甲烷层澄清（如果提取液在20℃下放置2小时候，澄清自然发生而无需离心）。准确吸取20mL上清液（三氯甲烷层）加入到100mL烧杯中（烧杯101℃下恒重，并准确称取重量）。在通风橱中，将烧杯及样液置于水浴锅中，使样液蒸干。（操作时注意，避免烧杯内被水浸湿，始终保持烧杯内干燥）将烧杯及蒸干物质在101℃下干燥30分钟，取出放于干燥器中冷却，称取烧杯及蒸干物质的重量。计算总脂肪百分含量。五.计算总脂肪=（剩余物质质量*4*100）/样品质量=（（m2-m1）*4*100）/mm:样品质量m2：蒸干物质和烧杯的总质量m1：烧杯恒重后质量六.注意提取液中，三氯甲烷、甲醇和水分的体积比在最初和最终分别保持在1:2:0.8和2:2:1.8这个范围内。