我国疏毛吴茱萸不同产区有效成分分析研究

我国疏毛吴茱萸不同产区有效成分分析研究[摘要]文章对我国主要产区疏毛吴茱萸的7个县市疏毛吴茱萸主要药用成分吴茱萸碱和吴茱萸次碱进行了分析。研究结果表明：7个县市种植吴茱萸总碱的平均含量为0.227%,其中吴茱萸碱的平均含量为0.14%，吴茱萸次碱的平均含量为0.085%，方差分析表明：7个县市的吴茱萸碱和吴茱萸次碱的差异具有不显著性，说明在试验区立地条件适宜的地方均适合疏毛吴茱萸生长，；但含量最高贵州余庆县的样品吴茱萸总碱含量最高达0.330%，比其他6个县市的平均值0.210%高出0.12%，说明贵州余庆县试验区的疏毛吴茱萸与其它6个县市的吴茱萸碱和吴茱萸次碱在含量差异上有显著性，有效成分的含量高于湖南浙江试验区。关键词：试验区；疏毛吴茱萸；有效成分StudyoneffectivecomponentofChinaofEvodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)HuangAbstract:ThearticlefocusesonmedicinalEvodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)Huang(includingevodiarutaecarpa(Juss.)andevodiaminerutaecarpine)ofthemainareaproducingofChinaPrefecture7County’s.Theresultsofthestudyshowthat:8county’scultivationofalkaliofEvodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)Huangwere0.227%,theevdiamineandrutaecarpawere0.14%and0.085%respectively.TheVarianceanalysisonthattheevdiamineandrutaecarpaof7countyscultivationdifferencewerenotsignificant,itindicatethatEvodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)HuangwasadapttogrowthinexperimentalPrefecturecircumstanceinthesamestandconditions,butthesampleofGuizhouyuqingcounty’sEvodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)Huangmaximumlevelwere0.330%higherthan0.210%sumoftheaverageof6county’s0.120%.AndGuizhouyuqingcounty’sEvodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)Huangconnectwiththeevdiamineandrutaecarpaof6county’sdifferenceweresignificantinawildstate.AndEffectiveingredientcontentofhigherthaninzhejiangareainhunanprovince.Keywords:experimental;Evodiarutaecarpa(Juss.)Beth;effectivecomponent;疏毛吴茱萸Evodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)Huang系芸香科（Rutaceae)多年生木本植物，广泛分布在贵州、江西、湖南、广东、广西等省，其干燥近成熟果实是传统中药吴茱萸的基源生药之一，为常用中药材，也是贵州地区常用苗族用药，别名米辣子、臭辣子树、气辣子、豆卡欧等。疏毛吴茱萸味苦性温，有小毒，归肝、脾、胃、肾经，常用作疏肝止痛中药，主要功能为散寒止痛，降逆止泻；用于厥阴头痛，寒疝腹痛，寒湿脚气，经行腹痛，脘腹胀痛，呕吐吞酸，五更泄泻，亦用于高血压和偏头痛等症的治疗。其药物功效《神农本草经》、《名医别录》、《本草拾遗》和《本草纲目》等中医古典医籍中均有详尽记载。药理研究表明，吴茱萸具有减肥、支气管收缩，刺激牛肾上腺髓质儿茶酚胺的分泌，抑制雄性大鼠带状血管球细胞释放醛固酮，减少大鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌，体外实验抑制鼠克隆癌细胞肺转移、对K通道有阻滞等作用。疏毛吴茱萸的挥发油部分是其药用的有效成分之一，有降低乙酰胆碱的功能，抑制麦角胺对ɑ-受体的阻碍作用。从疏毛吴茱萸干燥近成熟果实的95%乙醇提取物中分离得到8个化合物，分别为：吴茱萸次碱（1），吴茱萸碱（2），7β-羟基吴茱萸次碱（3），14N-甲酰二氢吴茱萸次碱（4），去氢吴茱萸碱（5），吴茱萸果酰胺-I（6），胡萝卜苷（7）和金丝桃苷（8），其中，化合物3，4，6～8为首次从该植物中分离得到。1疏毛吴茱萸的分析情况《GC-MS分析不同方法提取的疏毛吴茱萸挥发性成分》一文从SDE法提取的疏毛吴茱萸挥发性成分中共鉴定出42个成分，从PEE法提取的疏毛吴茱萸挥发性成分中共鉴定出28个成分，从SPME法提取的疏毛吴茱萸挥发性成分中共鉴定出78个成分。该文也提出了3种方法提取的挥发油无论在成分还是其相对质量分数上均存在很大差异。SPME法提取吴茱萸挥发性成分与SDE及PEE法比较，挥发性成分以及同一成分的相对质量分数间均存在一定差异；从提取效能和成本考虑，SPME法能显著提高吴茱萸挥发性成分的提取率，缩短提取时间，节约能耗。因此，在提取、富集吴茱萸挥发性成分的工艺中，采用SPME法较好。该文也提出了SDE、PEE、SPME三种方法对分析该药用植物中的挥发性化学成分有不同的影响。统合考虑，固相微萃取法能更真实地反映出挥发性化合物在疏毛吴茱萸中的含量。1产区环境条件及材料1.1疏毛吴茱萸的生物学特性与石虎相似，小枝被黄锈色或丝光质的疏长毛。小叶5～11，叶形变化较大，广长圆形、披针形或卵状披针形，先端短尖，下面仅在叶脉上被疏柔毛，侧脉清晰，油腺点小。花期7～8月，果期9～10月。喜温暖湿润气候，不耐寒冷、干燥。以选阳光充足、土层深厚、疏松肥沃、排水良好的砂质壤上和腐殖质壤土栽培为宜；低洼积水地不宜栽培。生于村边路旁、山坡草丛中。1.2试验材料及产区环境条件（1）湖南属中亚热带山区季风湿润气候区，地势由西北向东南倾斜，土地类型俱全，气候类型多样，自然资源丰富。州内山高岭峻，河谷深壑，海拔多在800m以上。各县市雨量充沛，气候温和，年均气温15.8℃-16.9℃，年均降水量1300-1500mm，无霜期250-280d。（2）贵州余庆县属亚热带温润季风气候。四季分明，冬无严寒，夏无酷暑，气候温和。年平均气温为16.4℃。平均最高气温21.3℃。年平均最低气温为12.9℃。霜雪不多，无霜期长达300天。雨量充沛，年平均降雨量为1056毫米。（3）浙江属亚热带季风气候，季风显著,四季分明,年气温适中，光照较多，雨量丰沛，空气湿润，雨热季节变化同步，气候资源配制多样。年平均气温15～18℃,极端最高气温33～43℃，极端最低气温-2.2～-17.4℃；全省年平均雨量在980～2000毫米，年平均日照时数1710～2100小时。以上产区均符合疏毛吴茱萸生长环境条件，本次试验样品采集来自湖南中方县，湖南津市保河堤，湖南浏阳市大围山，湖南湘阴县，湖南津市市，贵州余庆县，浙江建安市。样品的采集采用随机采样方法，果实采用同样方法处理。2材料分析方法疏毛吴茱萸中挥发性物质的提取技术主要有：液—液萃取（LIE）、静态顶空法（SHP）、动态顶空法（DHP）、蒸馏萃取（SDE）、超临界流体萃取法（SCFE）等，这些方法各有利弊，都存在一些缺陷，如：液—液萃取的有机溶剂是有毒性的，污染环境，需要样品量大且会引起某些化学结构或组分的变化；静态顶空法主要缺点是样品的蒸气体积过大，影响色谱柱的分离效能；蒸馏萃取一般需要花费几个小时，能耗较大而且有些易挥发性物质逸出是难免的。固相微萃取（SPME）是一种全新概念的样品预处理浓缩技术，它克服了传统提取方法的缺陷，与其它技术相比，具有简便、灵敏度高、重复性及线性好、样品处理时间短、分析样品用量少、无需有机溶剂和绿色环保等优点。水蒸气蒸馏、有机溶剂提取和固相微萃取法所提取的挥发性成分无论在数量上还是在相对质量分数上均存在一定差异。以固相微萃取法提取效率较高，提取成分较完全，是提取疏毛吴茱萸挥发性成分的理想方法。为了更好地了解疏毛吴茱萸挥发性成分，本文采用HS—SPME萃取法提取疏毛吴茱萸挥发性成分，用气相色谱—质谱联用（GC—MS）分析法，结合质谱NIST数据库检索以及相关文献对化合物进行分离鉴定，为疏毛吴茱萸的进一步开发提供理论依据。2.1器材2.1.1材料疏毛吴茱萸采自湖南中方县、湖南津市保河堤、湖南浏阳市大围山、湖南湘阴县、湖南津市市、贵州余庆县和浙江建安市7个地方的干燥未成熟果实。2.1.2仪器气质联用仪，顶空固相微萃取HS—SPME装置，纤维萃取头，5ml顶空瓶。2.2方法2.2.1HS—SPME萃取疏毛吴茱萸挥发性化学成分的萃取：在5ml装有磁力搅拌器的顶空瓶中加入0.5g的疏毛吴茱萸待测样品，分别在不同纤维的萃取头、萃取温度、萃取时间及GC解吸时间为5min，进行GC—MS分析。2.2.1气相色谱条件GC条件：HP—5弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25µm）；升温程序：初始温度40℃保持3min，以5℃/min升至100℃，保持1min，以3℃/min升至160℃,以6℃/min升至220℃，保持16min.载气：拟气；载气流速：0.76ml/min,进样口温度:250℃。2.2.3质谱条件离子源为：EI；电离电压：70eV；离子源温度：230℃；溶剂延迟时间：2min；质谱范围：40～400，扫描周期：0.5scan/s；分析结果运用质谱数据库NIST147标准谱库进行检索。2.2.4定性、定量方法质谱结果经计算机检索（质谱数据库NIST147）以及相关的文献进行定性分析。利用面积归一法计算已定性出的挥发性成分的相对含量。3结果与分析经随机人工采集，同一方法处理果实，采用高效液相色谱法，利用峰面积归一化法定量。数据处理采用EXCEL2003进行分析[8-10]。3.1疏毛吴茱萸样本分析疏毛吴茱萸药用主要成分为吴茱萸碱和吴茱萸次碱，本研究主要测定该产区疏毛吴茱萸中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱，分析结果如表1和图1（对7个产区的疏毛吴茱萸进行吴茱萸碱与吴茱萸次碱进行分析，图中7个阿拉伯数字代表以下7个产区：1湖南中方县2湖南津市保河堤3湖南浏阳市大围山4湖南湘阴县5湖南津市市6贵州余庆县7浙江建安市）：表1疏毛吴茱萸样品分析情况表Table1ContentsofevodiaminerutaecarpineinEvodiarutaecarpa(Juss)Benthvarbodinieri(Dode)Huang样品采集地湖南中方县湖南津市保河堤湖南浏阳市大围山湖南湘阴县湖南津市市贵州余庆县浙江建安市平均值均回收率0.2100.2660.1850.1300.2700.3300.2000.227吴茱萸碱0.1570.2130.0770.0100.2200.1900.1100.140吴茱萸次碱0.0530.0530.0780.1200.0500.1400.0900.083图1疏毛吴茱萸碱及次碱产地对照分析Fig2Analyzeevodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huangevodiamineandreferencerutaecarpineinproductionareasa/产区0.000.050.100.150.200.250.300.351234567均回收率吴茱萸碱吴茱萸次碱表1和图1说明：疏毛吴茱萸以吴茱萸碱和吴茱萸次碱总