普洱茶黄酮类物质对D-galactose诱导氧化应激大鼠GSH-Px活性影响的研究

0科类农科编号（学号）2010312657本科生毕业论文（设计）普洱茶黄酮类物质对D-galactose诱导氧化应激大鼠GSH-Px活性影响的研究Studiesoftheeffectsofflavonoidinpu’erteaontheGSH-PxactivityinoxidativestressratsinducedbyD-galactose李银丽指导教师：侯艳职称：讲师云南农业大学昆明650201学院：龙润普洱茶学院专业：茶学（茶艺茶道方向）年级：2010级论文（设计）提交日期：2014年4月答辩日期：2014年5月答辩委员会主任：吕才有云南农业大学2014年5月1普洱茶黄酮类物质对D-galactose诱导氧化应激大鼠GSH-Px活性影响的研究李银丽（云南农业大学，龙润普洱茶学院，昆明，650201）摘要【目的】探讨普洱茶黄酮类物质对D-galactose诱导氧化应激大鼠GSH-Px活性的影响；【方法】以由D-galactose诱导引起的氧化损伤试验大鼠为模型动物，造模成功的试验大鼠随机分为阳性（D-galactose模型）对照组、药物组，50%乙醇洗脱物（低、中、高剂量）组，30%乙醇洗脱物（低、中、高剂量）组，10%乙醇洗脱物（低、中、高剂量）组，加上为阴性（正常）对照组共12组，每组12只（雌雄各半）。持续分别给予蒸馏水、VitaminE水溶液（混悬液）、普洱茶黄酮类物质乙醇洗脱物50%（低、中、高）、30%（低、中、高）10%（低、中、高）、蒸馏水。连续灌喂28天后牺牲实验动物，测定试验大鼠心、肝、肾与脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性。【结果】与正常对照组(Vehiclegroup)相比，D-galactose诱导氧化应激模型组大鼠主要脏器（心，肝、脑与肾）组织中GSH-Px活性显著降低。药物对照组（VitaminE）与模型组比较，大鼠脏器（心，肝、脑与肾）组织中GSH-Px活性显著升高（P＜0.001）。普洱茶黄酮类提取物50%，30%和10%的乙醇洗脱物均具有增加D-galactose诱导氧化应激模型大鼠主要脏器（心，肝、脑与肾）组织中GSH-Px活性的作用（P＜0.01），并具有剂量-效应关系，且三种物质的作用相当。【结论】普洱茶黄酮类物质具有增加氧化应激大鼠GSH-Px活性的作用。关键词:普洱茶，黄酮类物质；抗氧化；GSH-Px；大鼠2Studiesoftheeffectsofflavonoidinpu’erteaontheGSH-PxactivityinoxidativestressratsinducedbyD-galactoseLiyinli(YunnanAgriculturalUniversity;CollegeofLong-runPu-erhtea；Kunming650201)ABSTRACT【OBJECTIVE】Toinvestigatetheeffectsofflavonoidinpu’erteaontheGSH-PxactivityinoxidativestressratsinducedbyD-galactose.【METHODS】Inthisstudy,weusedoxidativestressratsasanimalmodel,thesuccessfullyestablishedexperimentalratsmodelswererandomlydividedaspositivecontrolgroup,druggroup(VitaminE),50%ethanolicelutiongroups(includehigh,middleandlowthreedosagegroups),30%ethanolicelutiongroups(includehigh,middle,lowthreedosagegroups),10%ethanolicelutiongroup(includehigh,middle,lowthreedosagegroups)andnegtivegroupwith12ratsineachgroup.Eachgroupratsweregivenbygavagewithdistilledwater,VitaminE,high,middle,lowdosesof50%ethanolicelution,high,middle,lowdosesof30%ethanolicelutionandhigh,middle,lowdosesof10%ethanolicelution,anddistilledwaterrespectively.Theheart,liver,kidneyandbrainofratswereobtained4weekslater,inwhichthevitalityofGSH-Pxweredetected.ThevitalityofGSH-Pxinmainorgansofoxidativestressratssignificantlyreduced,Comparedwithnormalcontrolgroup.ThevitalityofGSH-Pxinmainorgansofdruggroupratssignificantlyincreased,Comparedwithpositivecontrolgroup(P＜0.001).TheflavonoidsinPu'ertea(50%,30%and10%ethanolicelution)couldimprovetheactivityofGSH-Pxinmainorgansofoxidativestressrats（P＜0.01),andshowedasignificantdoseresponserelationship,andthesethreeelutionsservethesamefunction.【CONCLUSION】Flavonoidsinpu’erteahavesignificanteffectonincreasingtheGSH-PxactivityinoxidativestressratsinducedbyD-galactose.Keywords:theflavonoidsonofPu-ErhTea；antioxidatio；D-galactose；Rats3洱茶黄酮类物质对D-galactose诱导氧化应激大鼠GSH-Px活性影响的研究1引言1.1普洱茶的概述及其研究现状普洱茶是以云南省一定区域内的云南大叶种晒青毛茶为原料，经过后发酵加工成的散茶和紧压茶[1]。普洱茶属于黑茶类,产于云南省西双版纳、思茅和临沧等地,自古以来即在普洱集散,因而得名[2],是我国的特种茶类[3]。渥堆发酵是普洱茶的特征工序，对普洱茶的保健功效起着关键作用[4]。研究表明，普洱茶具有抗氧化[5]、、减肥[9]、暖胃助消化[10]、抗癌[11]、健齿护牙[12]、降压[13]、防治糖尿病、提高免疫力、生津止渴、醒酒解毒、降血脂[6]、降血糖[7]、抗突变、防癌及防治心血管疾病等功能。普洱茶药理作用的主要成分是茶多酚、茶色素和茶多糖等[8]。茶叶中的多酚类包括黄烷醇类、黄酮类、黄酮醇类、花青素类、花白素类；酚酸及缩酚酸类等多种结构类型的酚类化合物[3]。1.2氧化应激的概述从生物学角度来看，人体的生命活动是由难以计数的酶促氧化—还原反应组成的。例如机体所需能量的产生，是在细胞当中的“发电厂”线粒体中的一系列氧化还原反应产生的。在其反应过程中，不可避免地产生大量的“中间产物”。这些“中间产物”就是所谓的“自由基”。即带有未成对电子的分子基团，反应活性极高。可攻击人体当中任何的分子，因而，这种物质常被称为“有害垃圾”。在正常情况下，这些“有害垃圾”或“自由基”可被细胞中的环卫系统—“抗自由基”分子消除掉。当机体的垃圾清理系统能力不足或功能紊乱时，这些垃圾就会在人体中沉积。这些“垃圾”可沉积到皮肤，人体皮肤便会出现“老年斑”；当这些“垃圾”沉积到心脏时，人体可出现心悸、心慌与气短。当这些“垃圾”堆积到脑组织时，就可出现学习记忆的障碍，如失眠、健忘等。当这些“垃圾”沉积到肾组织中时，人体便会出现肾功能的损害，如出现蛋白尿甚至血尿等。所谓的“氧化应激”（OxidativeStress，OS），其实就是机体在遭受各种有害刺激时，体内活性氧自由基(reactiveoxygenspecies，ROS）和活性氮自由基（reactivenitrogenspecies，RNS）产生过多，氧化程度超出氧化物的清除，氧化系统和抗氧化系统失衡，从而导致组织损伤。即体内“有害垃圾”的产生与“垃圾清除”失衡。垃圾产生大于垃4圾清理，结果导致组织的损伤。大量资料证明，炎症、肿瘤、衰老、血液病，以及心、肝、肺、皮肤等各方面疑难疾病的发生机理与体内自由基过多积累或清除自由基能力下降有着密切的关系。自由基和活性氧的生成，主要来自体外、体内各种因素，体外因素主要是各种各样环境因素中的自由基进入到体内，特别重要的是大气污染物质、药物、紫外线、放射线等；体内自由基的产生系统主要有：活性化的巨噬细胞，白血球(嗜中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性细胞、淋巴细胞、单核细胞)，细胞内微粒(线粒体、细胞核膜、微粒体等)，氧化金属蛋白质(氧合血红蛋白)，酶类(黄嘿吟氧化酶、叫睬胺氧添加酶等)，身体内物质的自动氧化(儿茶酚胺、硫醇化合物等)等。因此，降低自由基危害的途径也有两条：一是，利用内源性自由基清除系统清除体内多余自由基；二是，发掘外源性抗氧化剂—自由基清除剂，阻断自由基对人体的入侵。1.3普洱茶黄酮类物质的概述黄酮类(Flavone)物质是自然界广泛存在的一类黄色色素，茶叶中黄酮类物质约为茶叶干重的3%-4%。相关试验表明，黄酮类物质能通过其所含的酚羟基结构与自由基反应而达到可有效清除羟自由基和体内自由基,实现抗氧化作用，且其清除自由基的能力大于维生素C和维生素E[12]。此外，黄酮类物质还作为一种天然的抗氧化剂，以其安全、高效地防止油脂及其制品氧化和酸败，保证含油食品的感官品质和营养价值，延长保存期而受到人们的关注[13]。黄酮类基本结构是2-苯基色原酮（2-Phenylchromone），现在则泛指两个具有酚羟基的苯环（A与B环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。黄酮具有较高的药用价值,黄酮类物质具有：①抗菌作用；②抗病毒作用；③抗过敏作用；④抗衰老作用；⑤抗肿瘤及降血脂等多种生物活性[14]。1.4研究目的和意义综上所述，自由基与多种疾病的关系，已愈来愈被重视，自由基生物医学的发展使得探寻高效低毒的自由基清除剂——天然抗氧化剂成为生物化学和医药学的研究热点。抗氧化被认为是茶叶保健抗癌的最重要机理。对普洱茶中活性物质具有抗氧化作用的研究越来越深入，而普洱茶黄酮类物质是否具有抗氧化作用，以及其抗氧化作用是如何发挥的还鲜见报道。活性氧自由基伴随代谢而产生，因而氧化应激损伤随时都会发生。为了应对时时刻刻都会产生的损伤，人类和动物在进化中发展了多重防线。除了SOD以外，生物细胞5中还存在谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase，GSH-Px)抗损伤系统，只是它们的分工不同。活性氧自由基ROS经过SOD酶的催化，转化为过氧化氢（H2O2），H2O2再经过GSH-Px的催化转化为水和分子氧。实验研究显示，GSH-Px活性随衰老的下降，与多器官的抗损伤能力下降有关。国际上的生物学家做了一些有趣的实验，发现单纯增加SOD的活性，并不能显著地对抗衰老，而同时增加GSH-Px的活性，则显著延长衰老动物的健康寿命。因此，本次试验采用柱层析法以不同乙醇浓度（50%，30%，10%）洗脱液获得的普洱茶黄酮类物质为原料，以由D-galactose诱导引起的氧化损伤试验大鼠为模型动物，对其持续分别经口灌胃普洱茶黄酮类物质50%（高、中、低）、30%（高、中、低）、10%（高、中、低）4周后，牺牲试验动物，测定其主要脏器（心，肝、脑与肾）组织中谷