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理研1205张璇2012201072高效液相色谱在手性分离技术中的应用12020/1/122CSP法是将手性化合物制成固定相，对手性药物对映体进行直接拆分。由于其高效方便，既可用于分析分离，还可用于对映体的半制备和制各分离，成为药物对映体分离中最为吸引人的方法。CSP法之所以能拆分对映体，是因为CSP与外消旋体相互作用时，各对映体与CSP生成稳定性不同的短暂的对映体复合物，造成在柱淋洗时保留时间不同，从而达到拆分的目的。HPLC法拆分手性化合物对映体间接拆分法：手性试剂衍生化发CDR直接拆分法手性流动相添加剂法CMPA手性固定相法CSP2020/1/13第一类为给体-受体CSP，如Pirkle型CSP，被分析物与CSP之间通过吸引一排斥作用，主要是π电子给体一受体机理，形成短暂的络合物。第二类为纤维素衍生物类CSP，被分析物是通过吸引作用被包容到固定相的手性空腔中。第三类为主客体络合CSP，如环糊精、冠醚类CSP，形成的是包容络合物。第四类为手性配体交换色谱CSP，溶质是所形成的非对映异构金属络合物的一部分。第五类为蛋白质类CSP，溶质与CSP通过疏水和极性作用的结合形成化合物。312345HPLC手性固定相的分类，根据不同的目的，有不同的分类方法，如被广泛采用的Wainer分类方法，是按照手性固定相与溶质之间的相互作用机理而分为五类。2020/1/14根据手性固定相来源分类：42020/1/155纤维素是D(+)．葡萄糖单元由1，4-糖苷键形成的高度有序、呈螺旋型空穴结构的光学活性天然高分子。虽然纤维素本身有手性识别，但它并不能用作有效的CSP，是由于其慢转移和扩散导致了低分辨率和宽峰，并且纤维素的高极性羟基特性经常会导致溶质与纤维素之间出现非立体选择性，而且，纤维素不耐高压，因此一般都经衍生化用作CSP。纤维素衍生物一般由纤维素和相应的酰氯或异氰酸酯作用制取。纤维素及其衍生物用作CSP，有三种方式：a．做成凝胶颗粒直接装柱；b．涂布在大孔载体如硅胶上；c，化学键合于硅胶表面。其中b最为常用，得到的CSP柱效和稳定性较高，分离效果也较好。2020/1/16利用高效液相色谱纤维素衍生物手性色谱柱分离β-肾上腺素受体阻滞剂62020/1/177AttemptshavebeenmadetoseparateS-(-)-andR-(+)-enantiomersofβ-adrenergicblockersbychiralHPLConCelluCoatcolumn.1Throughthesupramolecularmodeltostudythemechanismofchiral.3ThereportedHPLCmethodwasappliedformonitoringchiralratiosofsomeβ-blockersinthecommerciallyavailabletabletsandtheresultsobtainedwerefoundreliable,selectiveandreproducible.4Describeasuccessfulenantiomericresolutionof10β-adrenergicblockersonasinglechiralcolumn(CelluCoat).2Highlightsofthispaper2020/1/188USFDA,EuropeanCommitteeforProprietaryMedicinalProductsandotherdrugsregulatoryagencieshaverestrictedthemarketingofracemicdrugssinceusuallythedesiredpharmacologicalactivityresidesinoneenantiomeswhiletheotherenantiomermaybetoxic,lessac-tiveandpossessesundesirablesideeffects.Chiralseparationbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC)hasbec-omeapowerfultoolinthedevelopmentofchiraldrugs.Therearenumerouscommerci-allyavail-ablechiralselectorsthatareusedfortheresolutionofracemicdrugsincludingblockers.Recently,KromasilintroducedapolysaccharidebasedcolumnnamedCelluCoat.ItissimilartoChiralcelOD-Handhastris-3,5-(dimethylphenylcarbamate)celluloseaschiralselector,whichiseffective,efficientandinexpensive.TheexperimentalresearchbackgroundCelluCoattris-3,5-(dimethylphenylcarbamate)cellulose2020/1/199纤维素(硅胶表面涂有3，5-二甲基苯基氨基甲酸脂)(CDMPC，ChiracelOD)是CTPC的衍生物的一种，显示出特别优良的拆分能力，它对各类手性化合物都表现出了极高的手性识别能力。CDMPC可拆分一系列对映体，包括芳香烃、胺、羧酸、醇、氨基酸衍生物，还有多种药物，如β-受体阻滞剂，多种β-阻滞剂能在CDMPC上得到拆分，R型与S型对映体先后洗脱。2020/1/110β-受体阻滞剂是具有氨基醇基团的碱性化合物，因此其对映体的拆分大多是在含有少量胺的碱性流动相体系中完成的，β-受体阻滞剂是临床治疗高血压和心绞痛广泛应用的一类重要药物。大多数β-受体阻滞剂以外消旋体形式存在，但其对映体的药理、药代动力学和毒理等差异较大，通常S构型药物比R构型临床疗效高(约100倍)。因此研究这类药物的对映体分离，对深入研究这些药物的作用机理、毒性和代谢，以及药物生产质量控制具有重要作用。高效液相色谱(HPLC)和毛细管电泳已成为β-受体阻滞剂类药物分离和测定的有效工具，其中采用手性固定相的HPLC研究尤为突出。β-受体阻滞剂2020/1/11111β-adrenergicblockersβ-肾上腺素受体阻滞剂usedasthedrugsofchoiceinthetreatmentofhypertension,anginapectoris,cardiacarrhythmiasandglaucomaTreatment:particularcharacteristicsS-(−)-enantiomersarepharmacologicallyeffectiveshowingabout50–500-foldhigheractivities.racemicmixturemaycauseserioussideeffectstothepatientsS-(−)-enantiomersR-(+)-enantiomers2020/1/11212阿普洛尔；烯丙心安；[药]心得舒比索洛尔丁呋洛尔醋丁洛尔卡拉洛尔Fig.1.Thechemicalstructuresofβ-blockers2020/1/11313塞利洛尔氧烯洛尔美托洛尔茚心安普萘洛尔；心得安Fig.1.Thechemicalstructuresofβ-blockers2020/1/11414ExperimentalExtractionofβ-blockersfromcommercialtabletsTheextractionofsomeβ-blockersincommercialtablets(10–50mg)wascarriedoutusingmethanol.Fivetabletsofindividualβ-blockerwereweighedandgrindedtoafinepowderextractedwith50mLmetha-nolfor15minusingsonicat-orat40℃Methanolwasdecanted.residuewasagainextractedtwice.filteredthrough0.22μmmem-braneandevap-oratedto20mLunderreducedpressure.crystallizationwascarriedoutthecrystalswereseparatedandwashedwithdiethyletheranddriedinair2020/1/11515ExperimentalHPLCanalysisHPLCsystemofECOM(CzechRepublic)solventdeliverypump(modelAlpha10),manualinjectorabsorbancedetector(Sapphire600UV–vis)chromatographyI/Fmoduledataintegrator(Indtech.Instrument,India)Winchromesoftware.CelluCoat(250mm×4.6mm,5.0μmsilicaparticlesize)Hamiltonsyringeof50μLThestocksolutions(0.1mg/mL)oftheracemicβ-blockersThemobilephasesweredifferentcombinationsofn-heptane–ethanol–diethylamineTheseparationswerecarriedoutat27±1◦Ctemperaturewithdetectionat225nm.standardprocedure.experimentcondition2020/1/11616Themobilephaseswereusedatvariousflowrates2020/1/11717ExperimentalResultsanddiscussionThevaluesofselectivityandresolutionforalltheracematesweregreaterthanoneindicatingagoodseparation.Thevaluesofseparationandresolutionfactorsrangedfrom1.12–2.19and1.00–9.502020/1/11818[II]n-heptane–ethanol–diethylamine(95:05:0.2,v/v/v)[I]n-heptane–ethanol–diethylamine(90:10:0.2,v/v/v)mobilephase[I]isslightlyhigherincomparisontomobilephase[II]2020/1/11919oxprenololenantiomers(Rs=9.50)氧烯洛尔bisoprololenantiomers(Rs=1.00)比索洛尔2020/1/12020themaximum(Rs=9.50)andminimum(Rs=1.00)resolutionachievedwasofoxprenololandbisoprololat1.0mL/minflowrate,respectively.Itisduetohigherenantio-selectivebondingsofoxprenololenantiomersincompari-sontothebondingsinbisoprolol.2020/1/12121diethylamine(DEA)2020/1/12222oxprenololenantiomers(Rs=9.50)氧烯洛尔2020/1/