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文冠果花粉生活力的研究测定关键词：文冠果；花粉；采集；生活力；萌发率引言：以文冠果同一开花时期不同采集时间为试材，在不同培养时间调查花粉发芽率，以确定最佳观察材料和时间。结果表明，开花第一天上午8:00时的花朵为最佳试验材料，在培养基(10％蔗糖+O．1％硼酸+4g·L-l琼脂粉)25℃下培养2h后，基本达到最大花粉发芽率，可以进行花粉发芽率的调查，从而进行花粉生活力的测定。摘要：文冠果（XanthocerassorbifoliaBunge）属于无患子科文冠果属，为单种属。落叶乔木或灌木，株高可达8m，胸茎达90cm。原产我国北方，由于该树具有较强的适应性和抗逆（抗寒、抗旱和抗盐碱）能力且种子营养丰富、种仁含油率高，其花色品种多样、花期较长等很多优良特性，珍贵所以文冠果是水土保持及防沙改造环境的优良树种，是的园林绿化树种和蜜源植物，是一种中国特有的珍稀木本油料植物，有“北方油茶”之称【4】。因文冠果具有很高的应用价值，20世纪70-80年代在我国北方许多地区都曾大面积栽培，但开发利用受以下几方面的制约：一是群体内类型混杂，株间产量悬殊；二是优树无性繁殖体系尚未建立；三是对文冠果“千花一果”的生物学机制缺少了解，从而缺少改变现状的对策。本文对文冠果的花粉生活力的测定研究，试验采用碘一碘化钾染色测定法及培养基发芽法来测定文冠果花粉的生活力，为后人研究提供依据【3】。1材料与方法1．1材料的采集与准备本实验材料采自齐齐哈尔大学植物园，试验采用抖动法，所用材料为文冠果树中部向阳部位，选择健康无病的枝条开花第一天不同采集时间，分别为上午8时、10时、12时三个时间段采集即将开放的、大小基本一致的花蕾，每个时间段设置三次重复，用来进行不同采集时间下花粉生活力的比较，同样每个时间段设置三次重复。采集回来以后将花蕾放在黑暗条件下阴干一天，待花蕾散粉后，筛除杂质，将纯净的花粉用硫酸纸包好，放在锥形瓶中，贮藏在-20℃条件下。1．2花粉培养花粉采用固体培养法：其培养基的成分为10％蔗糖+O．1％硼酸+4g·L．1琼脂，用玻璃棒蘸2-3滴培养液滴于凹面载玻片上，待其凝固后使用。用发丝将干燥已完全散开的花粉均匀散播于培养基上。将载玻片放于有湿润吸水纸的培养皿内，于25℃培养。1.3.1文冠果花粉活力测定碘一碘化钾染色测定法【1】。正常有生活力的花粉粒内含有淀粉，而无生活力的花粉粒不含有或含有较少的淀粉。根据这一特性，可以用碘一碘化钾染色测定法测定(间接)花粉的生活力情况。正常有生活力的花粉在试验中被染成蓝色，发育不良的花粉或无生活力的花粉一般不染色。试验时，取花粉散播在载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，加入一滴1％碘一碘化钾染色液，盖上盖玻片置于显微镜下镜检，计算其生活力。花粉生活力(％)=被染色的花粉数／花粉总数×100%1.3.2花粉萌发实验法花粉的萌发实验法是另一种测定花粉生活力的方法，以弥补花粉的染色不足。其培养基的成分为10％蔗糖+O．1％硼酸+4g·L．1琼脂，用玻璃棒蘸2。3滴培养液滴于凹面载玻片上，待其凝固后使用。用发丝将干燥已完全散开的花粉均匀散播于培养基上。将载玻片放于有湿润吸水纸的培养皿内，于25℃培养，观察花粉萌发情况。1．4花粉萌发率的统计及数据处理显微镜下观察统计发芽率。当花粉管的长度大于花粉粒的直径时，花粉粒被认为萌发。每个品种观察5个视野以上(每个视野花粉数I50)，重复5次。并且每隔一定时间记录一次5个视野的萌发个数及正常花粉管个数，求出总和。同时测量每个花粉管的长度，求平均花粉管长度【2】。萌发花粉数量根据以下公式进行数据统计：花粉萌发率(％)=萌发花粉数/正常花粉数x100％2结果与分析2.1花粉生活力采用碘一碘化钾染色测定法对花粉进行生活力的测定（表1）研究表明，不同采集时间的花粉生活力不同，通过显微镜观察统计后得知，上午8:00时花粉的生活力最高为65%，10:00时其次为57.6%，12:00时的生活力最低为41.9%。实验结果哦也表明，快花时间越长，其花粉生活力越低。有生活力花分数/花粉总数花粉生活力%平均生活力%12345总计58.165表1.2.2花粉萌发率采用花粉的萌发实验法进行花粉萌发实验。由表二可知，其花粉生活力依旧为8:00时最高，且随着培养时间的增加，其花粉的萌发率逐渐增长花粉管也逐渐增长，两者均24时后最大。且随着时间的推移，其花粉管增长幅度在逐渐减小。其原因可能是花粉内贮藏物质的消耗增多，酶活性下降，水分逐渐流失，所以增长逐渐缓慢。8：00点重复12011131420112重复2111215171310167.3重复3211314132012166.910:00点重复1121616181111960.557.6重复2111215171411360.1重复315109191112352.312:00点重复18111012911543.441.9重复27119121112739.4重复311109141012642.8表2.3.讨论有关研究认为。在培养基里添加适宜浓度的蔗糖和硼酸有利于花粉的萌发．蔗糖一方面为花粉萌发和花粉管的生长提供营养．另一方面起着维持花粉与培养液之间渗透平衡、避免花粉及花粉管的破裂的作用。硼酸可以促进糖的吸收和代谢．与糖结合能极大地提高花粉的萌发率，增加氧气的含量和吸收．参与果胶物质的合成，利于花粉管的建立【5】。本次实验也表明,上午8:00花粉的生活力是相对较高的，但其生活力较其他花的种类来说还是相对较低。可以为花粉的保存及杂交育种提供依据，具有一定的参考性。四．参考文献【1】王壮伟，赵密珍，钱亚明，吴伟民，袁骥草莓花粉生重复1重复2重复3采集时间(上午)培养时间h花粉管长（μm）萌发率（%）花粉管长（μm）萌发率（%）花粉管长（μm）萌发率（%）8：00438.933.233.135.425.436.7847.839.244.644.131.640.71259.644.850.555.944.960.12469.558.669.360.168.163.210:00436.130.230.229.429.430.1843.541.540.133.439.140.31250.948.342.439.140.650.52460.555.161.255.755.754.212:00428.128527.325.623.522.2838.230.234.530.130.131.41241.144.141.235.139.539.42440.348.348.549.644.244.3活力的测定江苏省农业科学院园艺研究所，南京210014【2】刘会超，贾文庆，周玉玲丁香花粉生活力测定及贮藏特性研究河南科技学院园林学院，河南新乡453003【3】彭伟秀，李凤兰，杨文利文冠果不同类型花粉生活力测定及比较河北林果研究1999年第14卷第1期【4】苗青，曲波，张春宇，李楠，孙权，邵美妮文冠果花粉形态学观察及生活力研究沈阳农业大学生物与科学技术学院，辽宁沈阳【5】赵元杰，蒋建雄，刘明稀，艾辛，易自力芒花粉生活力测定方法比较湖南农业大学生物科学技术学院，长沙文冠果花粉生活力的研究测定园艺081王红2008055014尚未建立；三是对文冠果“千花一果”的生物学机制缺少了解，从而缺少改变现状的对策