微柱凝胶卡标准操作程序

1文件类别：医疗管理编码：XC-DJPS-YLGL-XK-001-01初审人：审核人：批准人：初审日期：2014年1月20日批准日期：2014年10月20日执行日期：2014年10月20日回顾日期：2014年10月20日微柱凝胶卡标准操作程序（SOP）襄城县人民医院血库2目录1、ABO.RhD血型抗原检测卡标准操作程序（SOP）.......................32、ABO、RhD血型检测卡标准操作程序（SOP）...............................53、不规则抗体筛检卡标准操作程序（SOP）.............................................84、抗人球蛋白交叉配血卡标准操作程序（SOP）............................105、新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）....................................116、新生儿溶血病母体IgG抗体效价检测卡标准操作程序（SOP）.....................................................................................................137、新生儿溶血病母体IgG抗体效价检测卡标准操作程序（SOP）.....................................................................................................158、微柱凝胶检测卡在实验室操作的注意事项..................................173一、ABO.RhD血型抗原检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作1、微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。2、检测标本的准备：红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液，此浓度大约为0.8%－1%。外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。二、操作步骤1．将准备好的微柱凝胶试剂卡做好标记。2．将配制好的被检者红细胞悬液分别加入第1至第3管或第第4至第6管中，每管50微升。3．即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼判定结果。血型判定见表：血型抗A抗B抗DD阳性A+—+B—++O——+AB+++D阴性A+——B—+—O———AB++—三、注意事项1、检测标本必须为抗凝血。2、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。3、如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。4、若结果为±或1＋需进一步分析，可能为亚型或弱化抗原。5、红细胞悬液的浓度控制在0.8％－1％之间，否则可能出现漏检或混合凝集。46、每日实验前，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温，以防冷凝集。7、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献：1、《输血技术学》2、《全国临床检验操作规程》第三版5二、ABO、RhD血型检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。二、操作步骤1.将准备好的ABO.RhD血型定型试剂卡做好标记2.将待检者0.8%－1％红细胞悬液分别加入第1至第4管中，每管50ul3.将待检者血清分别加入第5和第6管，每管50ul4.将已知的A型和B型红细胞0.8%-1%浓度悬液或ABO血型反定型红细胞试剂，每管50ul分别加入第5和第6管5.即刻使用专用离心机离心，900rpm2分钟，1500rpm3分钟，取出肉眼判定结果。结果判定：6阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。血型判定：三、注意事项1.检测标本必须为抗凝血。2.红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。3.血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。4.如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。5.若结果为±或1＋需进一步分析，可能为亚型或弱化抗原。6.红细胞悬液的浓度控制在0.8％--1%之间，否则可能出现漏检血型抗A抗B抗D阴性对照A细胞B细胞D阳性A+—+——+B—++—+—O——+—++AB+++———D阴性A+————+B—+——+—O————++AB++————7或混合凝集。7.每日实验前，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温，以防冷凝集。8试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献：1、《输血技术学》2、《临床检验操作规范》第三版8三、不规则抗体筛检卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。二、操作步骤1、将准备好的不规则抗体筛检卡做好标记。2、将配好的筛检细胞或谱细胞悬液加入标好的微管中，各一滴（或50μl）。3、分别立即加入被检者血清1滴（或50μl）。4、加样后的试剂卡，置37℃中孵育15分钟。5、使用专用离心机离心5分钟，（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼观察结果。结果判定：根据所提供的筛检红细胞或谱细胞的反映格局来判定结果例：按Ⅰ（-）；Ⅱ（4+）；III（-）的实验结果及提供如下的筛检红细胞反应格局来分析筛检细胞反应格局DCEceJkaJKbMNSsFyaFybDiaKkLeaLebP1Ⅰ＋＋－－＋－－－＋－＋＋－－－＋－＋－Ⅱ＋－＋＋－－－－＋－＋＋－－－＋－＋＋Ⅲ＋＋－＋＋－－＋＋－＋＋－－－＋－＋－阴性结果用排除法；阳性结果用可能包含法以前五种抗原为例：Ⅰ（-）可排除D、C、e；Ⅱ（4+）判断可能含有D、E、c；III（-）可排除D、C、c、e；综上，可认为：此样品血清中可能含有－E三、注意事项1、应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入4℃-10℃9冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。2、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。3、血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。4、如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。5、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。6、筛检细胞或谱细胞悬液的浓度严格控制在0.8%－1％之间。7、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献：1、《输血技术学》2、《全国临床检验操作规程》第三版10四、抗人球蛋白交叉配血卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：将受血者与献血者的红细胞和血浆分离，各取其压积红细胞10微升，分别加入含1毫升红细胞稀释液的两个试管中，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。二、操作步骤1、将准备好的抗人球交叉配血卡做好标记。2、将受血者血清1滴（或50μl）与献血者红细胞1滴（或50μl）加入主侧管中。3、将受血者红细胞1滴（或50μl）与献血者血清1滴（或50μl）加入次侧管中。4、加样后的试剂卡，置37℃中孵育15分钟。5、使用专用离心机离心5分钟，900rpm2分钟，1500rpm3分钟，取出肉眼观察结果。三、结果判定：1、阴性结果：红细胞完全沉降于凝胶管底部，表明受血者与献血者血型相合。2、阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，表明受血者与献血者血型不相合。四、注意事项1、应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入4℃-10℃冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。2、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。3、血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。4、如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。5、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。6、红细胞悬液的浓度控制在0.8%－1％之间。7、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。11五、新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。(二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。（六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白（或生理盐水）混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。即放散液。2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。参见酸性放散试剂盒使用说