微滴式数字PCR技术及市场应用培训试题

微滴式数字PCR技术及市场应用培训试题一、填空题（2′×15）1、Sanger法测序、ARMS-PCR和微滴式数字PCR（ddPCR）的检测灵敏度分别为：%、%、%。2、QX100微滴发生器能将每份反应液形成约个均一的微滴，最多能同时处理个样品。3、QX100微滴式数字PCR检测所需样本量不能少于：ul血浆或ml全血，片切片和块绿豆大小活检组织。4、目前QX100微滴式数字PCR技术在市场上主要应用于拷贝数变异分析、稀有突变检测、基因表达分析三个方面的研究。5、在针对健康人所开展的肿瘤早期筛查项目中，ddPCR现在已经可以检测14种常见肿瘤中的11个癌基因约60余个突变位点。二、选择题（3′×5）1、微滴式数字PCR（ddPCR）的检测灵敏度为（）A.1%B.0.1%C.0.01%D.0.001%2、以下哪一项不是微滴式数字PCR的技术优势（）A、高灵敏度、高特异性B、真正意义上的绝对定量，可统计突变率C、所需样本量较多D、实验数据分析便捷3、目前，微滴式数字PCR（ddPCR）的市场应用有哪些？（多选）（）A、拷贝数变异分析B、稀有突变检测C、基因表达分析D、测序文库定量4、根据（）以及阳性微滴的比列，分析软件可计算给出待检靶分子的浓度或拷贝数。A、笛卡儿定理B、泊松分布原理C、卡尔丹公式D、海伦公式5、QX100微滴分析仪可同时检测（）种不同的荧光信号。A、2种B、4种C、7种D、9种三、判断题（2′×5）1、微滴发生器能将每份反应液形成约1,000,000个均一的微滴。（）2、经过微滴化处理的样本不需要通过PCR反应便可直接在微滴分析仪上进行检测。（）3、微滴式数字PCR（ddPCR）实验数据分析便捷，根据卡尔丹公式以及阳性微滴的比列，分析软件可计算给出待检靶分子的浓度或拷贝数。（）4、每个阳性微滴含有至多1个拷贝的靶标DNA。（）5、微滴式数字PCR（ddPCR）操作时并非真正意义上的绝对定量，仍需依赖标准曲线、Ct值和扩增效率。（）四、简答题（3′×15）1、请简述微滴式数字PCR（ddPCR）的技术原理。2、分析比较微滴式数字PCR（ddPCR）检测技术和临床常用肿瘤筛查检测手段的优缺点。3、简述目前公司已开展的ddPCR检测项目及技术优势。参考答案一、填空题1.10%；0.1%；0.001%2.20000；83.200；1-2ml；2-3；14.拷贝数变异分析；稀有突变检测；基因表达分析5.14；11；60二、选择题1.D2.C3.ABC4.B5.A三、判断题1.×2.×3.×4.×5.×四、简答题1.微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，即将含有核酸分子的反应体系分成约20,000万个纳升级的微滴，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。2.3.A、肿瘤药敏检测数字PCR样本需求量低的特性可以避免由于预扩增所引入的实验误差，更好的实现实验的精准性和可靠性。当病理样本太少时，ddPCR可以帮助检测突变，来辅助诊断对药物的敏感性。这对于临床样本来说特别重要。另外在异质组织内，仅存有少量突变存在的情况下，突变的特定等位基因是否可以被准确检测到，直接影响到靶向治疗是否有效。数字PCR在进行突变/稀有变异检测中发挥着重要的作用。B肿瘤早期筛查迄今为止最灵敏的检测肿瘤细胞突变DNA的手段。相比于传统的PCR检测方法，有更高的灵敏度，可以很好的胜任稀有变异检测的工作，实验数据证实微滴式数字PCR可以实现1:100,000的突变频率筛查。C肿瘤负荷实时监控检测外周血循环细胞中微量肿瘤细胞突变DNA成为实行肿瘤负荷实时监控的有效手段，从而判断患者体内肿瘤细胞负荷更加科学、可靠、及时。D药物继发性耐药突变外周血监控目前，许多肿瘤常规化疗效果差，预后不良是困扰临床的重要难题，而肿瘤多药耐药性则是肿瘤化疗失败的关键因素。经治疗后，残存的肿瘤干细胞耐药性形成，常导致对某些药物治疗敏感性降低，并引起肿瘤复发甚至转移，因此，对药物耐药突变的筛选和监控成为当今医学界研究的热点。