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1第二十二章革兰阳性需氧杆菌2第一节炭疽芽胞杆菌炭疽是人畜共患的急性传染病主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，可并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎3致病物质•荚膜：–抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散•炭疽毒素：–保护性抗原、致死因子、水肿因子4所致疾病•炭疽病：–传染源：患病食草动物及其制品或被污染物–传播途径：接触——皮肤炭疽食用——肠炭疽吸入——肺炭疽•可并发败血症，死亡率极高•乙类传染病(发生肺炭疽按甲类处理)•病后可获得持久免疫力5•形态染色:致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状有毒株可有明显荚膜芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央•多在有氧条件下形成，25～30℃，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞•在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖二、微生物特性革兰染色×10006培养特性：•需氧或兼性厌氧，生长条件•不严格，最适温度30～35℃•普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边缘呈卷发状•BAP：12～15h不溶血，•18～24h轻微溶血•其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速7•肉汤—絮状沉淀生长•明胶—37℃18～24h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。•NaHCO3BAP：--有毒株—5%CO2、37℃24～48h、产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)--无毒株—粗糙型菌落8生化反应：•分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，•有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气•水解淀粉、还原硝酸盐•不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不分解尿素•在牛乳中生长2～4天牛乳凝固→缓慢胨化•触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）9•菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热、耐腐败，特异性不高。•荚膜多肽抗原：与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细菌生长和扩散。荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义•芽胞抗原：血清学诊断价值•炭疽毒素：保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿因子（EF）三个组分。单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性具有抗吞噬和免疫原性。抗原构造：10抵抗力：--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃3h才能杀灭--在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年--生物武器11--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化剂较敏感，常用以下方法杀菌：1：2500碘10min、3%H2O21h、4%高锰酸钾15min、0.5%过氧乙酸10min--对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、氯酶素均敏感12•要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策三、微生物学检验13标本的采集与处理•皮肤炭疽：病灶深部标本•肺炭疽：痰和血液•肠炭疽：粪、呕吐物•脑膜炭疽：CSF、血液•死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。14•无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基•污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振荡10～15min、静置10min，取悬液65℃水浴30min或85℃5min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养•污染杂菌液体标本：离心，弃上清液后，加0.5%洗涤剂振荡10～15min，离心取沉淀物增菌和分离培养15生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏器等血液Ascoli试验以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理肉汤增菌培养BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉汤4-8hG染色镜检菌落特征动力观察串珠试验确定报告荚膜肿胀试验16痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌37℃4h荚膜肿胀试验直接涂片荚膜染色G染色初步报告0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、荚膜染色初步报告17•涂片染色：--G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告--荚膜荧光抗体染色•核酸检测：核酸杂交•分离培养：--BAP、戊烷脒多粘菌素B平板--2%兔血清肉汤增菌→分离培养18鉴定试验：•形态和菌落特征•生化试验:•串珠试验:--接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤中，37℃6h，大而均匀成串的圆球状菌体--与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关--类炭疽无此现象19•青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，37℃24h生长受抑制不生长•串珠和青霉素抑制联合试验：兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片青霉素1U／片纸片贴于平板，37℃1—2h，低倍镜下观察，可见纸片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青霉素浓度低,菌体细胞壁受抑而成为串珠。20•噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体•NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、37℃、24～48h有毒株形成荚膜—黏液型菌落无毒株不形成荚膜—粗糙型菌落•动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种21•植物凝集素试验：•Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断22第二节蜡样芽胞杆菌•食物中毒含菌量达105/g以上呕吐型——耐热肠毒素腹泻型——不耐热肠毒素•全眼球炎（外伤后）•心内膜炎、败血症和脑膜炎23•夏、秋季多见•食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食•在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见•中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意24•形态与染色：-G+大杆菌-生长6h后即形成圆形芽胞、位于菌体中心或次末端、不突出菌体-菌体两端平截，多数呈链状排列-引起食物中毒的菌株多有周鞭毛、无荚膜二、微生物特性25•培养特性：•需氧或兼性厌氧•营养要求不高•最适温度30~35℃•普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样光泽26•BAP—有β溶血卵黄平板—生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应27•生化反应：•能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊精，产酸不产气•能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂酶（+）•多次传代后生化特性常可改变28•抵抗力：耐热，肉汤中细菌需100℃20min才能杀死，食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30min、干热120℃60min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺、呋喃类耐药29三、微生物学检验•标本采集：可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。30确诊由该菌引起的食物中毒必须：•从食物中分离出菌数≥105CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险•从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型31检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数接种普通琼脂平板、BAP、卵黄平板37℃18-24h纯培养动物试验（肠毒素测定）生化反应血清凝集（分型）报告结果直接涂片染色镜检32•检验方法：•直接镜检•分离培养与活菌计数普通琼脂平板、BAP、卵黄平板•鉴定与分型：根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测33产单核细胞李斯特菌（Listeriamonocytogenes)致病物质：•李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子•内在素——表面蛋白（侵袭性蛋白）•磷脂酶C34所致疾病:•健康带菌者是主要的传染源•污染食物，粪-口途径传播，通过肠道扩散全身•胎盘和产道——感染新生儿•接触病畜及产品——眼和皮肤的局部感染35（二）微生物特性•形态与染色：G+短小杆菌，形态与培养时间有关-37℃3～6h，菌体主要呈杆状，随后以球杆状为主，3～5天常形成长丝状无芽胞，一般不形成荚膜，在含血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜36•20～25℃形成周鞭毛，有动力；37℃时鞭毛很少或无•细菌接种半固体培养基，置室温，由于动力强，细菌自穿刺线向四周弥漫生长，在离琼脂表面数毫米处出现一个倒伞形的生长，是本菌特征之一37培养特性：•兼性厌氧菌、生长温度范围广0.5～45℃均生长（4℃冷增菌），最适30～37℃•营养要求不高，在含血液、血清、腹水的培养基生长更好•BAP—极小的露滴状、侧光微显蓝绿色→灰白色菌落。狭窄的β溶血环•萘啶酸选择性平板—细密湿润、边缘整齐的兰色圆形小菌落•肉汤——均匀混浊，表面有菌膜38•生化反应：•37℃24h，发酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麦芽糖和水杨素产酸不产气•触酶（+）甲基红（+）VP（+）•水解七叶苷、水解精氨酸产氨•CAMP（+）39•分型：•根据O抗原和H抗原，分4个血清型，1、3、4型可分若干亚型•抗原结构与毒力无关，与地理分布有联系•与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌等有共同抗原40•抵抗力：•耐盐、耐碱、不耐酸•对热、常用消毒剂敏感•多种抗生素敏感，首选氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素等也敏感•对杆菌肽、多粘菌素耐药41（三）微生物学检验•标本采集：血液、CSF、宫颈、阴道、鼻烟分泌物等•直接涂片：--在CSF标本中成对排列，形如球菌，易误认为肺炎链球菌--G染色过度脱色形似流感杆菌--有时与类白喉杆菌也极易混淆可用该菌1型和4型及多价荧光抗体染色，同时作动力检查42•分离培养：•BAP、巧克力平板•杂菌污染标本可用20%NaCl心脑浸液肉汤2支1支—10%CO2，37℃24～48h→分离培养（BAP、萘啶酸选择性平板）1支—4℃“冷增菌”→分离培养（每24h一次，共4次，以后每周一次，至少4周）43•鉴定：•形态特征、菌落特点、动力及生化反应作出鉴定•可疑菌落用已知李斯特菌1型、4型或多价抗血清做玻片凝集试验进行鉴定•与其他G+菌鉴别44触酶动力马尿酸盐水解产单核李斯++-B群链球菌--+•本菌有耐碱耐盐的特点，可用??试验与肠球菌鉴别45二、红斑丹毒丝菌•毒力与其产生的神经氨酸酶有关，能使细菌粘附至靶细胞•从事屠宰、经营鱼类和皮革行业的人员及兽医等感染机会较多•通过破损皮肤侵入，引起局限性皮肤病灶，通常称“鱼毒”或“类丹毒”46（二）微生物特性•形态与染色：G+杆菌，菌体细长、直或稍弯，单个或短链状，慢性期分离的菌落为粗糙型，常呈长丝状，而且有分支及断裂，与放线菌近似.无荚膜、无芽胞、无鞭毛红斑丹毒丝菌革兰染色1000×47•培养特性:厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环境，传代后有氧环境也能生长，最适温度30-35℃。在含葡萄糖或血清培养基生长旺盛BAP：35℃24h可形成两种菌落光滑型：菌落细小、透明突起、发亮、边缘整齐、质软易于悬于液体中，毒力较强粗糙型：菌落较大，颗粒状、扁平、边缘不齐可呈卷发状，无毒力48BAP上新分离的菌株有轻微的α溶血，培养时间延长溶血现象明显，传代后溶血特性常消失•含碲盐的培养基——黑色菌落49•葡萄糖肉汤：培养24h后，呈轻微混浊，不形成菌膜，室温静置2~3天后，管底有少量灰色沉淀；粗糙型沉淀较多。S-R变异同时毒力、抗原性也发生变异，但遗传学上不稳定，常出现互变。50（三）微生物学检验•标本：病灶边缘组织碎片或皮肤病变抽出液•直接涂片G染色镜检：G+细长杆菌，有时长丝形，单独或呈短链状。•分离培养：1%葡萄糖肉汤，35℃5%CO2环境增菌，每日移种BAP，可出现二种菌落（S型和R型）51•鉴定依据：G+、H2S+、无动力、触酶-、吲哚-、VP-与产单核细胞李斯特菌鉴别（表11-2）新霉素敏感试验：红斑丹毒丝菌—R产单核李斯特菌—S动物毒力试验：对小鼠、大鼠、兔、鸽均有致病性，0.2ml的2~4天培养物注入小鼠腹腔，4-5天后，败血症而死，心血培养（+）52第四节阴道加特纳菌属于加特纳菌属,此菌属只有本菌一个种与非特异性阴道炎（细菌性阴道病）有关53二、微生物特性•形态与染色：--G染色视菌株和菌龄不同而异，实验室保存菌株趋向G-，新鲜临床标本中分离的菌株趋向G+，生长在高浓度的血清中呈G+--具有多形性，两端钝圆，无芽胞、无荚膜、无鞭毛54•培养特性：兼性厌